V Rusku je v současnosti standardním postupem laboratorní diagnostiky HIV infekce detekce protilátek proti HIVpomocí enzymového imunotestu následuje potvrzení jejich specifičnosti v reakci imunitní blotting.

Protilátky proti HIV se objeví u 90–95 % infikovaných do 3 měsíců po infekci, u 5–9 % – po 6 měsících od okamžiku infekce a u 0,5–1 % – později. Nejčasnější doba pro detekci protilátek je 2 týdny od okamžiku infekce.

Detekce protilátek proti HIV zahrnuje 2 kroky. V první fázi celkové spektrum protilátek proti antigenům HIV se zjišťuje pomocí různých testů: enzymatická imunoanalýza, aglutinační, kombinovaná, hřebenová, membránově-filtrační nebo membránově-difuzní. Ve druhé fázi imunoblotting se používá ke stanovení protilátek proti jednotlivým proteinům viru. V práci je přípustné používat pouze testovací systémy, které mají povolení k použití od Ministerstva zdravotnictví Ruské federace. Diagnostické postupy by měly být prováděny pouze v souladu se schválenými pokyny pro použití příslušných testů.

Odběr krve se vyrábí z loketní žíly do čisté suché zkumavky v množství 3-5 ml. Novorozencům lze odebírat pupečníkovou krev. Získaný materiál (plná krev) se nedoporučuje skladovat déle než 12 hodin při pokojové teplotě a déle než 1 den v chladničce při 4-8°C. Nadcházející hemolýza může ovlivnit výsledky analýzy. Sérum se oddělí centrifugací nebo sledováním krve podél stěny zkumavky Pasteurovou pipetou nebo skleněnou tyčinkou. Separované sérum se přenese do čisté (nejlépe sterilní) zkumavky, lahvičky nebo plastové nádobky a v této formě se může skladovat až 7 dní při teplotě 4-8°C. Při práci byste měli dodržovat bezpečnostní pravidla uvedená v „Pokynech k protiepidemickému režimu v diagnostických laboratořích AIDS“ č. 42-28 / 38-90 ze dne 5. července 1990.

Stanovení celkových protilátek proti HIV.

Po obdržení prvního pozitivního výsledku se analýza provede ještě 2krát (se stejným sérem a ve stejném testovacím systému). Pokud byl získán alespoň jeden pozitivní výsledek (dva pozitivní výsledky ze tří testů ELISA), je sérum odesláno do referenční laboratoře.

V referenční laboratoři se primární pozitivní sérum (to znamená, které poskytlo dva pozitivní výsledky v prvním testovacím systému) znovu vyšetřuje testem ELISA ve druhém (jiném) testovacím systému vybraném pro potvrzení.

Po obdržení pozitivního výsledku analýzy v druhém testovacím systému je nutné sérum vyšetřit v IS.

Pokud je ve druhém testovacím systému získán negativní výsledek, sérum je znovu vyšetřeno ve třetím testovacím systému.

Pokud je výsledek testu ve druhém i třetím systému negativní, je vydán závěr o nepřítomnosti protilátek proti HIV.

Když je získán pozitivní výsledek ve třetím testovacím systému, sérum je také odesláno k analýze pomocí imunitního přenosu.

imunitní blotting.

Principem metody je detekce protilátek proti určitým proteinům viru imobilizovaných na nitrocelulózové membráně. Obalové proteiny (env) HIV-1 se běžně označují jako glykoproteiny ("gp" nebo "gp") s molekulovou hmotností vyjádřenou v kilodaltonech (cd): 160 kd, 120 kd, 41 kd. V HIV-2 glykoproteiny mají hmotnost 140 kd, 105 kd, 36 kd. Jádrové proteiny (gag) (běžně označované jako proteiny - "p" nebo "r") v HIV-1 mají molekulovou hmotnost 55 kd, 24 kd, 17 kd, v tomto pořadí, a HIV-2 -56 kd, 26 kd , 18 kd. Enzymy HIV-1 (pol) mají molekulovou hmotnost 66 kd, 51 kd, 31 kd, HIV-2-68 kd.

Výsledky imunoblotingu jsou interpretovány jako pozitivní, neurčité a negativní.

pozitivní(pozitivní) jsou považovány za vzorky, ve kterých jsou detekovány protilátky proti 2 nebo 3 glykoproteinům HIV.

záporný(negativní) jsou séra, která nedetekují protilátky proti žádnému z antigenů (proteinů) HIV.

Zvažují se vzorky, které detekují protilátky proti jednomu HIV glykoproteinu a/nebo kterémukoli z HIV proteinů pochybný(nedefinované nebo neinterpretovatelné).

Když je získán neurčitý výsledek s protilátkami proti proteinům jádra (gag) v imunitním blotu s antigeny HIV-1, provede se test s antigeny HIV-2.

Po obdržení pozitivních výsledků imunologického přenosu je učiněn závěr o přítomnosti protilátek proti HIV v testovaném materiálu.

Po obdržení negativního výsledku testu vydá IB závěr, že neexistují žádné protilátky proti HIV.

Po obdržení neurčitého výsledku (pokud nebyl zjištěn antigen p24) se po 3 měsících provádějí opakované testy na protilátky proti HIV,

a při zachování neurčitých výsledků po dalších 3 měsících. Pokud byl detekován antigen p24, provede se druhé vyšetření 2 týdny po obdržení prvního neurčitého výsledku.

Pokud jsou po 6 měsících od prvního vyšetření znovu získány neurčité výsledky a pacient nemá rizikové faktory infekce a klinické příznaky infekce HIV, je výsledek považován za falešně pozitivní. (Pokud existují epidemiologické a klinické indikace, sérologické studie se opakují podle předpisu).

Imunitní blotování pomocí rekombinantních virově specifických polypeptidů "HIV blot" se vyznačuje tím, že nepoužívá samotné virové proteiny, ale rekombinantní polypeptidy - analogy HIV antigenů ("Env1", "Gag1", "Poll", "Env2" "). Rekombinantní polypeptid Env1 detekuje protilátky přímo proti HIV-1 gp120 a gp41, polypeptid Gagl proti antigenům p17 a p24, polypeptid Po11 proti antigenu p51, polypeptid Env2 proti antigenům HIV-2 gp110 a gp38. Sérum je považováno za pozitivní, pokud reaguje buď s Env1 nebo Env2 nebo s oběma Env (duální infekce HIV typu 1 a 2). Reakce pouze s Poll and Gag je považována za neurčitý výsledek, přičemž sledování v tomto případě probíhá obdobně jako v případech neurčitých výsledků klasického imunoblotu pomocí HIV lyzátu.

Zvláštností sérologické diagnostiky HIV infekce u dětí narozených HIV-infikovaným matkám je, že infikované i neinfikované děti v prvních 6-12 měsících života mají protilátky proti HIV mateřského původu, které pak mohou vymizet. Kritériem indikujícím přítomnost HIV infekce u dítěte je průkaz protilátek proti HIV ve věku 18 měsíců a více. Absence protilátek proti HIV u 18měsíčního dítěte narozeného matce infikované HIV je kritériem proti infekci HIV.

Popis

Způsob stanovení Imunoblot.

Studovaný materiál Sérum

Možnost návštěvy domova

Antinukleární protilátky jsou rodinou autoprotilátek, které se vážou na ribonukleové kyseliny a jejich přidružené proteiny. Vyskytují se u více než 90 % pacientů s difuzními onemocněními pojivové tkáně a často jsou pozorovány také u autoimunitních onemocnění jater a řady dalších stavů. Dosud bylo charakterizováno asi 200 odrůd této rodiny autoprotilátek, ale ne všechny mohou být použity v klinické praxi.

Imunoblot antinukleárních protilátek umožňuje současně provádět studii 15 hlavních typů antinukleárních protilátek v jednom testu, což zajišťuje diferenciální diagnostiku hlavních systémových revmatických onemocnění. Každý typ autoprotilátek detekovaný imunoblotem je obvykle pozorován u pacientů s charakteristickým klinickým obrazem, takže spektrum autoprotilátek umožňuje nejen diagnostikovat onemocnění, ale také stanovit riziko rozvoje určitých klinických projevů.

Imunoblot antinukleárních protilátek je vhodné použít ve druhé fázi sérologického vyšetření s pozitivním výsledkem dalších testů indikujících přítomnost antinukleárních protilátek v séru vyšetřovaného. Tyto testy zahrnují stanovení antinukleárních protilátek (ELISA screening), průkaz antinukleárního faktoru (ANF) na buňkách Hep2 (), antinukleárních protilátek a protilátek proti extrahovatelnému jadernému antigenu (ENA,).

Imunoblotová metoda antinukleárních protilátek v diagnostice systémových revmatických onemocnění se vyznačuje vysokou klinickou specificitou. Ale specificitu antinukleárních protilátek, dokonce i při vysokých titrech ANF (), není vždy možné stanovit, protože řada antinukleárních protilátkových antigenů stále zůstává necharakterizována. Negativní výsledek imunoblotu v tomto případě nevylučuje diagnózu systémových revmatických onemocnění. Řadu antinukleárních protilátek lze detekovat pomocí imunoblotu – panelu autoprotilátek specifických pro myositidu () a imunoblotu – panelu autoprotilátek u sklerodermie ().

Literatura

1. Lapin S.V. Totolyan A.A. Imunologická laboratorní diagnostika autoimunitních onemocnění / Nakladatelství "Chelovek", Petrohrad - 2010. 272 ​​​​s.
2. Nasonov E.L., Aleksandrova E.N. Moderní standardy pro laboratorní diagnostiku revmatických onemocnění. Klinická doporučení / BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoprotilátky u orgánově specifických autoimunitních onemocnění: diagnostická příručka/ PABST, Dresden - 2011. 300 s.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoprotilátky u systémových autoimunitních onemocnění: diagnostický odkaz/ PABST, Dresden - 2007. 300 s.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2. vyd./ Elsevier Science - 2006. 862 s.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press - 2008. 598 s.
7. Pokyny k reagenční soupravě.

Výcvik

Je lepší vydržet 4 hodiny po posledním jídle, neexistují žádné povinné požadavky.

Indikace pro schůzku

Test je indikován pro diagnostiku a diferenciální diagnostiku následujících stavů:

• systémový lupus erythematodes;
• subakutní kožní lupus a další typy kožního lupusu;
• smíšené onemocnění pojivové tkáně;
• Sjögrenův syndrom a přidružená onemocnění;
• difuzní a lokalizovaná sklerodermie, CREST syndrom;
• zánětlivé myopatie (polymyositida a dermatomyositida);
• juvenilní chronická artritida;
• autoimunitní hepatitida;
• primární biliární cirhóza a sklerotizující cholangitida;
• použití tohoto testu je indikováno při průkazu vysokých titrů antinukleárního faktoru, antinukleárních protilátek, protilátek proti extrahovatelnému jadernému antigenu, protilátek proti DNA, protilátek proti nukleozomům a antifosfolipidových protilátek.

Interpretace výsledků

Interpretace výsledků vyšetření obsahuje informaci pro ošetřujícího lékaře a není diagnózou. Informace v této části by neměly být používány pro vlastní diagnostiku nebo samoléčbu. Přesnou diagnózu stanoví lékař s využitím jak výsledků tohoto vyšetření, tak potřebných informací z jiných zdrojů: anamnéza, výsledky dalších vyšetření atd.

Jednotky měření: kvalitativní test, výsledek je prezentován ve tvaru „detekováno“ nebo „nenalezeno“.

Když je detekován pruh charakterizující přítomnost jakéhokoli typu protilátky, intenzita barvy pruhu je navíc popsána počtem plusů ("křížků") pro každý z identifikovaných typů protilátek. Zvýšení míry pozitivity nepřímo odráží obsah a afinitu autoprotilátek.

Referenční hodnoty: protilátky proti Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNA, histon, nukleozom , Rib P, AMA-M2, Jo-1 nebyly nalezeny.

Výsledek stanovení autoprotilátek je uveden v „křížcích“ pro každý odpovídající antigen. Zvýšení stupně séropozitivity nepřímo odráží obsah a afinitu autoprotilátek. Možnosti skóre séropozitivity jsou uvedeny níže:

1. Protilátky nebyly nalezeny.
2. +/- - hraniční výsledek;
3. + - nízký obsah autoprotilátek proti specifickému antigenu;
4. ++ je průměrný obsah autoprotilátek proti specifickému antigenu;
5. +++ - vysoký obsah autoprotilátek proti specifickému antigenu.

Hlavní onemocnění spojená s průkazem antinukleárních protilátek:

Antigen	Význam
Sm (Smith)	Specifický marker pro systémový lupus erythematodes (zahrnut do 10. kritéria pro SLE na American College of Rheumatology, ACR)
SS-A (Ro52)	Vyskytuje se u různých autoimunitních onemocnění, častěji u systémového lupus erythematodes a jeho kožních forem, systémových revmatických onemocnění, revmatoidní artritidy, autoimunitních onemocnění jater atd.
SS-A (Ro60)	Systémový lupus erythematodes, kožní formy lupus erythematodes, fotosenzitivita u systémového lupus erythematodes, vysoké riziko vrozeného lupus erythematodes a fetálního srdečního onemocnění. Hlavní sérologický ukazatel u Sjögrenova syndromu. Často se zaznamenává spolu s protilátkami proti antigenu SS-A (Ro52).
SS-B	Sjögrenův syndrom, systémový lupus erythematodes.
PCNA	Systémový lupus erythematodes, riziko lupusové nefritidy.
Ribozomy (Ribo P)	Systémový lupus erythematodes, riziko poškození centrálního nervového systému.
Nukleosomy	Systémový lupus erythematodes, vysoké riziko lupus glomerulonefritidy.
dvouvláknová DNA	Specifický marker systémového lupus erythematodes (zahrnut do 10. kritéria SLE ACR), vysoké riziko lupusové nefritidy.
snRNP/Sm	Smíšené onemocnění pojiva, systémový lupus erythematodes s nízkým rizikem poškození ledvin, sklerodermie.
Histony	Systémový lupus erythematodes, polékový lupus, sklerodermie.
Scl-70	Systémová skleróza s difúzními lézemi kůže a vnitřních orgánů.
PM-Scl	Sklerodermie s polymyositidou.
CENP-B	CREST syndrom se sklerodaktylií, teleangiektázie, podkožní kalcifikace, Raynaudův syndrom, ezofagitida.
Jo-1	Polymyositida ve formě antisyntetázového syndromu.
AMA-M2	Primární biliární cirhóza, Sjögrenův syndrom.

Imunoblot (imunoblot) je vysoce specifická a vysoce citlivá referenční metoda, která potvrzuje diagnózu u pacientů s pozitivními nebo neurčitými výsledky získaných testů vč. pomocí RPGA nebo ELISA .

Tato metoda detekce protilátek proti jednotlivým antigenům patogenu je založena na ELISA na nitrocelulózových membránách, na které jsou aplikovány specifické proteiny ve formě samostatných pásů, oddělených gelovou elektroforézou. Pokud existují protilátky proti určitým antigenům, objeví se na odpovídajícím místě proužku tmavá čára. Jedinečnost imunoblotu spočívá ve vysokém informačním obsahu a spolehlivosti získaných výsledků.

Výzkumný materiál je lidské sérum nebo plazma. Pro výzkum na jednom proužku je zapotřebí 1,5-2 ml krve nebo 15-25 µl séra.

Podle doporučení WHO se imunoblotting (western blot) používá v diagnostice HIV infekce jako doplňková expertní metoda, která by měla potvrdit výsledky ELISA. Tato metoda se obvykle používá k dvojité kontrole pozitivního výsledku ELISA, protože je považována za citlivější a specifičtější, i když je složitější a dražší.

Imunoblotting kombinuje enzymovou imunoanalýzu (ELISA) s předběžnou elektroforetickou separací virových proteinů v gelu a jejich přenosem na nitrocelulózovou membránu. Postup imunoblotu se skládá z několika fází. Za prvé, předčištěný a zničený na své základní složky, je HIV podroben elektroforéze, přičemž všechny antigeny, které tvoří virus, jsou odděleny podle molekulové hmotnosti. Poté se blotováním antigeny přenesou z gelu na proužek nitrocelulózy nebo nylonový filtr, které nyní obsahují spektrum okem neviditelných proteinů, charakteristické pro HIV. Dále se na proužek nanese testovací materiál (sérum, krevní plazma pacienta atd.), a pokud jsou ve vzorku specifické protilátky, navážou se na proužky antigenních proteinů, které jim striktně odpovídají. V důsledku následných manipulací (jako ELISA) je výsledek této interakce vizualizován - zviditelněn. Přítomnost pruhů v určitých oblastech proužku potvrzuje přítomnost protilátek proti přesně definovaným antigenům HIV ve studovaném séru.

Imunoblotting se nejčastěji používá k potvrzení diagnózy infekce HIV. WHO považuje séra za pozitivní, pokud jsou imunoblotem detekovány protilátky proti kterýmkoli dvěma obalovým proteinům HIV. Podle těchto doporučení, pokud dojde k reakci pouze s jedním z obalových proteinů (gp160, gp120, gp41) v kombinaci nebo bez reakce s jinými proteiny, je výsledek považován za pochybný a doporučuje se druhá studie s použitím soupravy z jiného série nebo od jiné společnosti. Pokud poté výsledek zůstane pochybný, studie pokračují každé 3 měsíce.

Zvláštnosti

Imunoblotová analýza je spolehlivá metoda, která umožňuje určit přítomnost protilátek proti HIV antigenům prvního a druhého typu. Pokud je člověk infikován, do dvou týdnů se objeví protilátky, které lze zjistit mnohem později. Zvláštností HIV je, že počet protilátek se rychle zvyšuje a zůstává v krvi pacienta. I když jsou přítomny, onemocnění se nemusí projevit až za dva a více let. Metoda ELISA ne vždy přesně určí přítomnost onemocnění, proto je v případě pozitivního enzymového imunotestu nutné potvrzení výsledků pomocí imunoblotu a PCR.

Indikace pro schůzku

Co je tento "imunoblot" již bylo zjištěno, ale komu je tato studie předepsána? Důvodem pro provedení testů na virus lidské imunodeficience (HIV) imunoblotováním je pozitivní výsledek ELISA. U pacientů, kteří budou operováni, je nutné absolvovat enzymatický imunotest. Kromě toho by měla být provedena analýza pro ženy plánující těhotenství a také pro všechny sexuálně promiskuitní. Pokud jsou výsledky testu ELISA na pochybách, přiřaďte imunoblotting pacientům s HIV.

Důvodem návštěvy lékaře mohou být následující alarmující příznaky:

• prudký úbytek hmotnosti;
• slabost, ztráta pracovní schopnosti;
• porucha střev (průjem), která trvá tři týdny;
• dehydratace těla;
• horečka;
• oteklé lymfatické uzliny v těle;
• rozvoj kandidózy, tuberkulózy, pneumonie, toxoplazmózy, exacerbace herpesu.

Před darováním žilní krve se pacient nemusí připravovat. 8-10 hodin před studií nemůžete jíst. Den před darováním krve se nedoporučuje pít alkoholické a kávové nápoje, věnovat se těžkým fyzickým cvičením, zažívat vzrušení.

Jak probíhá výzkum?

Z pohledu pacienta se imunoblot neliší od jakéhokoli jiného rozboru: odebere se žilní krev, vyšetří se a získá se výsledek. Ale pokud půjdete o technice trochu podrobněji, pak to není příliš jednoduché, ale přesto se snažte na to přijít.

Nejprve se v továrně na výrobu činidel odebere „referenční“ virus lidské imunodeficience. Poté je pomocí speciálního postupu (elektroforéza) v gelovém médiu virus zničen na jeho nejmenší složky: proteiny (virové antigeny). Poté se pomocí samotného blottingu (z anglického Wetting) částice umístí na speciální materiál - nitrocelulózu nebo nylonový filtr, získá se indikátor připravený k použití, tzv. strip. Proužek je proužek, ve kterém jsou antigeny distribuovány v závislosti na jejich molekulové hmotnosti v jasném pořadí, to znamená, že každému milimetru papíru odpovídá určitý protein.

Jak možná víte, pokud jsou viry přítomny v lidské krvi, tělo začne produkovat protilátky proti jejich schránkám (určité proteiny) a každý virus má svou vlastní individuální sadu antigenních proteinů. Detekce protilátek proti antigenním proteinům v krvi je základem metody imunoblot. Koneckonců, pokud se protilátka srazí s antigenem, pak budou jistě vzájemně interagovat - „přilepí se“.

Antigeny jsou tedy na proužku proužku a pokud jsou v krvi testovaného subjektu vhodné antigeny, budou spolu nutně interagovat a na tomto místě na proužku se objeví indikátor - objeví se ploška (jako těhotenský test). Navíc na konkrétním místě proužku lékař tímto způsobem pochopí, zda je v krvi soubor proteinů charakteristických pro konkrétní virus.

Tedy např. pokud je na proužku v místech lokalizace bílkovin ztmavnutí gp160, gp120, gp41 HIV je diagnostikován, u jiných virů to bude úplně jiná sada proteinů.

Je třeba poznamenat, že imunoblot vám umožňuje přesně určit přítomnost viru pouze v případě, že je sada protilátek v krvi kompletní, to znamená, že pokud jsou současně přítomny proteiny gp160, gp120, gp41, pak je to 100% infekce HIV. Pokud však alespoň jeden chybí, například: chybí gp41, ale existují pouze gp160, gp120, pak je test považován za pochybný a vyžaduje opakování.

FAQ

Jaká jsou fáze imunoblotu?

1. Příprava pásu. Virus imunodeficience (HIV), který byl předtím purifikován a zničen na své základní složky, je podroben elektroforéze, zatímco antigeny tvořící HIV jsou odděleny podle molekulové hmotnosti. Poté se blotováním (obdoba vytlačení přebytečného inkoustu na „saje“) antigeny přenesou na proužek nitrocelulózy, který nyní obsahuje spektrum antigenních pásů charakteristických pro HIV, které je okem neviditelné.
2. Ukázková studie. Testovaný materiál (sérum, krevní plazma pacienta atd.) se nanese na nitrocelulózový proužek, a pokud jsou ve vzorku specifické protilátky, navážou se na přesně odpovídající (komplementární) antigenní proužky. V důsledku následných manipulací se výsledek této interakce vizualizuje – zviditelní.
3. Interpretace výsledku. Přítomnost proužků v určitých oblastech nitrocelulózové destičky potvrzuje přítomnost protilátek proti přesně definovaným antigenům HIV ve studovaném séru.

• Dráha A - Pozitivní kontrola
• Dráha B - Slabá pozitivní kontrola
• Dráha C - Negativní kontrola
• Proužek D – Pozitivní vzorek (detekovány protilátky proti HIV-1)

Jak dešifrovat analýzu?

Pokud ELISA prokázala přítomnost všech nebo téměř všech protilátek proti antigenům podle tohoto testovacího systému, znamená to pozitivní HIV test. Pokud je odpověď po druhém sérologickém enzymovém imunotestu pozitivní, měl by být proveden imunoblot. Interpretace jeho výsledků bude správnější. Pokud enzymatická imunoanalýza poskytla pozitivní výsledek, další imunoblotová analýza také ukázala přítomnost HIV, pak je uveden konečný výsledek.

Když jsou analýzy dešifrovány, musíte vědět, že pozitivní test HIV je určen:

• 60 % až 65 % 28 dní po infekci;
• v 80 % - po 42 dnech;
• v 90 % - po 56 dnech;
• v 95 % - po 84 dnech.

Pokud je odpověď na HIV pozitivní, znamená to, že byly detekovány protilátky proti viru. Aby se předešlo falešně pozitivní odpovědi, je nutné provést test znovu, nejlépe dvakrát. Pokud jsou protilátky proti imunodeficienci zjištěny při absolvování dvou testů ze dvou nebo při absolvování 3 testů ve 2 z nich, pak se má za to, že výsledek je pozitivní.

Antigen p24 lze detekovat v krvi již 14 dní od data infekce. Pomocí metody enzymové imunoanalýzy je tento antigen detekován od 14 do 56 dnů. Po 60 dnech již není v krvi. Teprve když se v těle vytvoří AIDS, dojde k opětovnému růstu tohoto proteinu p24 v krvi. Proto se k detekci HIV v prvních dnech infekce nebo k určení, jak nemoc postupuje, a ke sledování procesu léčby se používají testovací systémy enzymové imunoanalýzy. Vysoká analytická citlivost enzymové imunoanalýzy detekuje antigen p24 v biologickém materiálu pro HIV prvního subtypu v koncentraci 5 až 10 pg/ml, pro HIV druhého subtypu od 0,5 ng/ml nebo méně.

Pod pochybný výsledek enzymové imunoanalýzy naznačuje, že se diagnóza někde spletla, zpravidla si zdravotníci něco spletli nebo osoba má známky infekce a výsledek je negativní, což vyvolává podezření, osoba je odeslána na opětovné vyšetření .

Pod falešně pozitivní Výsledek je chápán jako výsledek, kdy byly provedeny krevní testy za následujících podmínek pacienta:

• těhotenství;
• pokud má člověk hormonální nerovnováhu;
• s prodlouženou imunosupresí.

Jak v tomto případě rozluštit analýzu? Falešně pozitivní výsledek je dán, pokud je detekován alespoň jeden protein. Vzhledem k tomu, že antigen p24 je velmi závislý na individuálních variacích, je touto metodou detekováno 20 % až 30 % pacientů v prvním období infekce.

Jak spolehlivý je pozitivní výsledek testu?

Někdy má ELISA falešně pozitivní výsledky (asi v 1 % případů), důvodem tohoto výsledku může být těhotenství, různé virové infekce, ale i obyčejná nehoda. Po obdržení pozitivního výsledku je zapotřebí přesnější test - imunoblot, podle jehož výsledků se stanoví diagnóza. Pozitivní výsledek imunoblotu po pozitivní ELISA je 99,9% spolehlivý – to je maximální přesnost pro jakýkoli lékařský test. Pokud je imunoblot negativní, pak byl první test falešně pozitivní a ve skutečnosti daná osoba nemá HIV.

Co je neurčitý (pochybný) výsledek?

Pokud je ELISA pozitivní nebo negativní, pak imunoblot může být pozitivní, negativní nebo neurčitý. Neurčitý výsledek imunoblotu, tzn. přítomnost alespoň jednoho proteinu viru v imunoblotu lze pozorovat, pokud k infekci došlo nedávno a v krvi je stále málo protilátek proti HIV, v takovém případě bude imunoblot po chvíli pozitivní. Rovněž neurčitý výsledek se může objevit v nepřítomnosti infekce HIV s hepatitidou, některými chronickými metabolickými onemocněními nebo během těhotenství. V tomto případě bude imunoblot negativní nebo bude nalezena příčina neurčitého výsledku.

Kolik stojí analýza?

Imunoblot pro HIV se nevztahuje na levný výzkum. V průměru stojí screeningové vyšetření enzymovým imunotestem od 500 do 900 rublů. Imunoblotting je ověřovací studie, jejíž náklady jsou od tří do pěti tisíc rublů. Složitější metody jsou mnohem dražší. Například za analýzu polymerázové řetězové reakce (PCR) budete muset zaplatit asi 12 000 rublů.

Kde provést analýzu?

Kde se mohu nechat otestovat na HIV? ELISA, imunoblotové studie se provádějí na městských soukromých klinikách, výsledky se vydávají do jednoho dne. Okamžitá diagnóza je také možná. Ve státních zdravotnických zařízeních se testy ELISA a imunoblotting provádějí zdarma v souladu s legislativou Ruské federace. Těhotné ženy, ale i pacientky, které mají být hospitalizovány nebo mají podstoupit operaci, musí být vyšetřeny na infekční onemocnění.

hypotenze, tachykardie, dušnost, cyanóza. V těžkých případech onemocnění je možné krvácení, zvracení s příměsí krve. Játra a slezina jsou zvětšené. Všimněte si oligurie. Teplota zůstává trvale vysoká po dobu 3–10 dnů. V periferní krvi - neutrofilní leukocytóza s posunem vzorce doleva. Kromě popsaných celkových projevů moru vznikají léze charakteristické pro jednotlivé klinické formy onemocnění.

Kožní forma je vzácná (3–5 %). V místě vstupní brány infekce se objeví skvrna, poté papule, vezikula (konflikt), naplněná serózním hemoragickým obsahem, obklopená infiltrovanou zónou s hyperémií a edémem. Flikten se vyznačuje silnou bolestí. Po otevření tvoří vřed s tmavým strupem na dně. Morový vřed se vyznačuje dlouhým průběhem, hojí se pomalu, tvoří jizvu. Pokud je tato forma komplikována septikémií, dochází k sekundárním pustulám a vředům. Možná vývoj regionálního bubo (skin-bubonická forma).

Nejčastěji se vyskytuje bubonická forma (asi 80 %) a vyznačuje se relativně benigním průběhem. Od prvních dnů onemocnění se v oblasti regionálních lymfatických uzlin objevuje ostrá bolest, která ztěžuje pohyb a nutí pacienta zaujmout nucenou polohu. Primární bubo je zpravidla osamělé, více bubo jsou méně často pozorovány. Ve většině případů jsou postiženy lymfatické uzliny tříselné a stehenní, o něco méně časté jsou lymfatické uzliny axilární a krční. Velikosti bubo se liší od vlašského ořechu po středně velké jablko. Jasné rysy jsou ostrá bolest, hustá konzistence, adheze k podkladovým tkáním, hladkost obrysů v důsledku vývoje periadenitidy. Bubo se začíná tvořit druhý den nemoci. Jak se vyvíjí, kůže nad ním zčervená, leskne se, často cyanotická. Ze začátku je hutný, pak změkne, objeví se kolísání, kontury se rozplývají. 10-12 den nemoci se otevírá - píštěl, tvoří se ulcerace. S benigním průběhem onemocnění a moderní antibiotickou terapií je pozorována jeho resorpce nebo skleróza. V důsledku hematogenního zavedení patogenu se mohou tvořit sekundární bubliny, které se objevují později a jsou malé velikosti, méně bolestivé a zpravidla nehnisají. Velkou komplikací této formy může být rozvoj sekundární plicní nebo sekundární septické formy, která prudce zhorší stav pacienta až do smrti.

Primární plicní forma je vzácná, v obdobích epidemií v 5-10 % případů a je epidemiologicky nejnebezpečnější a nejzávažnější klinickou formou onemocnění. Začíná ostře, násilně. Na pozadí výrazného syndromu intoxikace se od prvních dnů objevuje suchý kašel, těžká dušnost, řezné bolesti na hrudi. Kašel se pak stává produktivním a produkuje sputum, jehož množství se může lišit od několika plivnutí až po obrovské množství, které zřídka vůbec chybí. Sputum, nejprve pěnivé, skelné, průhledné, pak získává krvavý vzhled, později se stává čistě krvavým, obsahuje obrovské množství bakterií moru. Obvykle se jedná o tekutou konzistenci - jeden z diagnostických znaků. Fyzikální údaje jsou vzácné: mírné zkrácení poklepového zvuku nad postiženým lalokem, při auskultaci, málo hojné jemné bublání, které zjevně neodpovídá celkovému vážnému stavu pacienta. Terminální období je charakterizováno nárůstem dušnosti, cyanózou, rozvojem strnulosti, plicního edému a TSS. Krevní tlak klesá, puls se zrychluje a stává se vláknitým, srdeční ozvy jsou tlumené, hypertermie je nahrazena hypotermií. Při absenci léčby je onemocnění smrtelné během 2–6 dnů. Při časném užívání antibiotik je průběh onemocnění benigní, málo se liší

Reagenční souprava MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 je určena k potvrzení průkazu protilátek proti jednotlivým proteinům (antigenům) HIV-1 a/nebo HIV-1 skupiny O a/nebo HIV-2 v lidském séru popř. plazma metodou imunitní blot.

Charakteristické rysy:

• Sada činidel "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" obsahuje purifikované lyzátové virové proteiny HIV 1 a peptid - HIV-2 gp36 antigenní determinát;
• Poskytuje detekci protilátek proti HIV-1, HIV-1 skupiny O, HIV 2 na jednom proužku;
• Jednoduchý postup pro přípravu a provádění analýz;
• Interní kontrola kvality reakce*
• Maximální rychlost analýzy (3 hodiny);
• Malý objem zkušebního vzorku - 20 µl;
• Nevyžaduje další vybavení pro výzkum;
• Kvalita soupravy je zaručena použitím ruských a mezinárodních standardních vzorků**

* Vnitřní kontrola kvality je zajištěna přítomností:

• vnitřní kontrolní proužky, poskytuje kontrolu zavádění vzorku séra nebo plazmy;
• kontrolní negativní sérum (K-);
• kontrolní pozitivní sérum (K+), které umožňuje identifikovat proužky detekované na proužku;
• kontrolní slabě pozitivní sérum (K + cl), které zajišťuje kontrolu citlivosti reagenční soupravy.

**Zajištění kvality:

Charakteristiky soupravy činidel MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 byly stanoveny testováním vzorků od náhodného vzorku dárců, pacientů s diagnózou HIV infekce, komerčních panelů sérokonverze, standardních panelů a vzorků s „potenciálně interferujícími s určovací“ složky.

Souprava činidel nedává falešně pozitivní výsledky při studiu sér standardního panelu, která neobsahují protilátky proti HIV 1.2 a HIV-1 antigenu („Standard AT (-) HIV“, č. FSR 2007/00953 ze dne 10.25. .2007). Specifičnost - 100%.

Diagnostická specificita byla stanovena vyšetřením náhodného vzorku 200 dárců z různých krevních center a klinik s předběžně potvrzenou nepřítomností infekce HIV-1, HIV-2. Specificita ve studii náhodného vzorku dárců byla 100%;

Specifičnost reagenční soupravy byla stanovena ve studii 250 vzorků, včetně vzorků séra nebo plazmy získaných od těhotných žen, hospitalizovaných pacientů, pacientů s hepatitidou C a E a vzorků se složkami "potenciálně rušícími stanovení". Při použití soupravy MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 nebyly u těchto vzorků zjištěny žádné falešně pozitivní výsledky.

Diagnostická citlivost byla stanovena pomocí:
- Boston Biomedica, Inc. vzorky plazmy panelu HIV-1 (WWRB 301) z různých oblastí obsahujících různé podtypy HIV-1: skupina M (podtypy A, B, C, D, E, F) a skupina O; citlivost reagenční soupravy byla 100 %;

Citlivost reagenční soupravy byla stanovena ve studii mezinárodních sérokonverzních panelů Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), kat. č. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932

Souprava reagencií detekuje protilátky proti HIV-1 v séru standardního panelu obsahujícího protilátky proti HIV-1 („Standard AT (+) HIV-1“, č. FSR 2007/00953 ze dne 25. října 2007), detekuje protilátky na HIV-2 v séru standardního panelu obsahujícího protilátky proti HIV-2 („Standardní AT (+) HIV-2“, č. FSR 2007/00953 ze dne 25. 10. 2007). Citlivost - 100%.

Osvědčení o registraci č. FSR 2010/07958 ze dne 13. července 2011 (platnost není omezena)

Sloučenina:

• Imunosorbent. Bílé nitrocelulózové membránové proužky s jednotlivými HIV-1 proteiny (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) adsorbovanými na nich metodou elektropřenosu a nanesenými na proužek se syntetickým HIV-2 peptidem, analog proteinu gp36 a lidská anti-IgG (interní kontrola) - 18 ks;
• K- - kontrolní negativní sérum. Lidské krevní sérum, které neobsahuje protilátky proti HIV-1,2, HCV, HIV antigen, HBsAg, se inaktivuje zahřátím na 560C; průhledná světle žlutá kapalina - 1 zkumavka (0,08 ml). Obsahuje konzervační látky: thimerosal a azid sodný;
• K+ - kontrolní pozitivní sérum. Lidské krevní sérum obsahující protilátky proti HIV-1,2 (titr ne méně než 1:10000), neobsahující HBsAg, HIV antigen, protilátky proti HCV, inaktivované zahřátím na 560C; průhledná světle žlutá tekutina - 1 zkumavka (0,08 ml).Obsahuje konzervační látky: thimerosal a azid sodný;
• K+sl - kontrolní slabě pozitivní sérum. Lidské krevní sérum obsahující protilátky proti HIV-1,2 (titr ne více než 1:200), neobsahující HBsAg, HIV antigen, protilátky proti HCV, inaktivované zahřátím na 560C; průhledná světle žlutá kapalina - 1 zkumavka (0,08 ml). Obsahuje konzervační látky: thimerosal a azid sodný;
• RROKk (x10) - roztok pro ředění vzorků a konjugátu. Koncentrát - Tris pufr obsahující předem upravené normální kozí sérum; neprůhledná šedá tekutina - 1 lahvička (10 ml). Obsahuje konzervační látku: thimerosal;
• PRk (x20) - promývací roztok. Koncentrát - Tris pufr obsahující Tween-20; čirá bezbarvá kapalina - 1 lahvička (70 ml). Obsahuje konzervační látku: thimerosal;
• Sdružené. Kozí protilátky proti lidskému IgG, konjugované s alkalickou fosfatázou; čirá bezbarvá kapalina - 1 zkumavka (0,06 ml);
• Substrát (barvicí roztok). Roztok 5-brom-4-fluor-indolyl-fosfátu (BCIP) a nitrosintetrazolium (NBT); průhledná světle žlutá kapalina - 1 lahvička (50 ml);
• Prášek pro imunitní blotting. Sušené odstředěné mléko - amorfní bílý nebo světle žlutý prášek - 5 balení x 1g;
• Tableta s víčkem pro nastavení reakce - 2 kusy;
• Plastová pinzeta - 1 kus.