Di Rusia, saat ini, prosedur standar untuk diagnosis laboratorium infeksi HIV adalah: deteksi antibodi terhadap HIVmenggunakan enzim immunoassay diikuti dengan konfirmasi kekhususan mereka dalam reaksi blotting imun.

Antibodi terhadap HIV muncul pada 90-95% dari mereka yang terinfeksi dalam waktu 3 bulan setelah infeksi, pada 5-9% - setelah 6 bulan sejak saat infeksi, dan pada 0,5-1% - di kemudian hari. Waktu paling awal untuk mendeteksi antibodi adalah 2 minggu dari saat infeksi.

Deteksi antibodi terhadap HIV melibatkan 2 tahap. Pada tahap pertama deteksi spektrum total antibodi terhadap antigen HIV dilakukan dengan menggunakan berbagai tes: immunoassay enzim, aglutinasi, gabungan, sisir, filter membran atau membran-difusi. Pada tahap kedua immunoblotting digunakan untuk menentukan antibodi terhadap protein individu virus. Dalam pekerjaan, hanya diperbolehkan menggunakan sistem pengujian yang memiliki izin untuk digunakan oleh Kementerian Kesehatan Federasi Rusia. Prosedur diagnostik hanya boleh dilakukan sesuai dengan instruksi yang disetujui untuk penggunaan pengujian yang sesuai.

Pengambilan sampel darah dibuat dari vena cubiti ke dalam tabung reaksi yang bersih dan kering sebanyak 3-5 ml. Darah tali pusat dapat diambil dari bayi baru lahir. Bahan yang diperoleh (whole blood) tidak disarankan untuk disimpan lebih dari 12 jam pada suhu kamar dan lebih dari 1 hari dalam lemari es pada suhu 4-8°C. Hemolisis yang akan datang dapat mempengaruhi hasil analisis. Serum dipisahkan dengan sentrifugasi atau dengan menelusuri darah di sepanjang dinding tabung reaksi dengan pipet Pasteur atau batang kaca. Serum yang telah dipisahkan dipindahkan ke dalam tabung reaksi, vial atau wadah plastik yang bersih (sebaiknya steril), dan dalam bentuk ini dapat disimpan hingga 7 hari pada suhu 4-8°C. Saat bekerja, Anda harus mengikuti aturan keselamatan yang diberikan dalam "Petunjuk tentang rezim anti-epidemi di laboratorium diagnostik AIDS" No. 42-28 / 38-90 tanggal 5 Juli 1990.

Penentuan antibodi total terhadap HIV.

Setelah menerima hasil positif pertama, analisis dilakukan 2 kali lagi (dengan serum yang sama dan dalam sistem pengujian yang sama). Jika setidaknya satu hasil positif diperoleh (dua hasil positif dari tiga tes ELISA), serum dikirim ke laboratorium referensi.

Di laboratorium referensi, serum positif primer (yaitu, yang memberikan dua hasil positif pada sistem pengujian pertama) diperiksa ulang dalam ELISA pada sistem pengujian kedua (lainnya) yang dipilih untuk konfirmasi.

Setelah menerima hasil positif dari analisis dalam sistem pengujian kedua, serum harus diperiksa di IS.

Jika hasil negatif diperoleh pada sistem pengujian kedua, serum diperiksa kembali pada sistem pengujian ketiga.

Jika hasil tes negatif diperoleh pada sistem tes kedua dan ketiga, kesimpulan dikeluarkan tentang tidak adanya antibodi terhadap HIV.

Ketika hasil positif diperoleh dalam sistem tes ketiga, serum juga dikirim untuk analisis dalam blotting imun.

blotting imun.

Prinsip metode ini adalah untuk mendeteksi antibodi terhadap protein tertentu dari virus yang diimobilisasi pada membran nitroselulosa. Protein amplop (env) HIV-1 biasanya disebut sebagai glikoprotein ("gp" atau "gp"), dengan berat molekul dinyatakan dalam kilodalton (cd): 160 kd, 120 kd, 41 kd. Pada HIV-2 glikoprotein memiliki berat 140 kd, 105 kd, 36 kd. Protein inti (gag) (biasa disebut protein - "p" atau "r") pada HIV-1 memiliki berat molekul masing-masing 55 kd, 24 kd, 17 kd, dan HIV-2 -56 kd, 26 kd , 18kd. Enzim HIV-1 (pol) memiliki berat molekul 66 kd, 51 kd, 31 kd, HIV-2-68 kd.

Hasil imunoblotting dimaknai positif, tak tentu, dan negatif.

positif(positif) dianggap sampel di mana antibodi terhadap 2 atau 3 glikoprotein HIV terdeteksi.

negatif(negatif) adalah serum yang tidak mendeteksi antibodi terhadap salah satu antigen (protein) HIV.

Sampel yang mendeteksi antibodi terhadap satu glikoprotein HIV dan/atau salah satu protein HIV dianggap meragukan(tidak terdefinisi atau tidak dapat ditafsirkan).

Ketika hasil tak tentu diperoleh dengan antibodi terhadap protein inti (gag) dalam noda imun dengan antigen HIV-1, tes dengan antigen HIV-2 dilakukan.

Setelah menerima hasil positif dari immune blotting, kesimpulan dibuat tentang adanya antibodi terhadap HIV dalam bahan tes.

Setelah menerima hasil tes negatif, IB mengeluarkan kesimpulan bahwa tidak ada antibodi terhadap HIV.

Setelah menerima hasil yang tidak pasti (jika antigen p24 tidak terdeteksi), tes berulang untuk antibodi terhadap HIV dilakukan setelah 3 bulan,

dan sambil mempertahankan hasil yang tidak pasti setelah 3 bulan berikutnya. Jika antigen p24 terdeteksi, pemeriksaan kedua dilakukan 2 minggu setelah menerima hasil tak tentu pertama.

Jika, 6 bulan setelah pemeriksaan pertama, diperoleh kembali hasil yang tidak pasti, dan pasien tidak memiliki faktor risiko infeksi dan gejala klinis infeksi HIV, hasilnya dianggap positif palsu. (Jika ada indikasi epidemiologis dan klinis, studi serologis diulang sesuai resep).

Penghapusan kekebalan menggunakan polipeptida spesifik virus rekombinan "HIV blot" dibedakan oleh fakta bahwa ia tidak menggunakan protein virus itu sendiri, tetapi polipeptida rekombinan - analog antigen HIV ("Env1", "Gag1", "Poll", "Env2 "). Polipeptida Env1 rekombinan mendeteksi antibodi secara langsung terhadap HIV-1 gp120 dan gp41, polipeptida Gag1 pada antigen p17 dan p24, polipeptida Po11 terhadap antigen p51, polipeptida Env2 pada antigen HIV-2 gp110 dan gp38. Serum dianggap positif jika bereaksi dengan Env1 atau Env2 atau keduanya Env (infeksi ganda HIV tipe 1 dan 2). Reaksi hanya dengan Poll dan Gag dianggap sebagai hasil tak tentu, dalam hal ini tindak lanjut dilakukan serupa dengan kasus hasil tak tentu dari imunoblot klasik menggunakan lisat HIV.

Keunikan diagnosis serologis infeksi HIV pada anak yang lahir dari ibu yang terinfeksi HIV adalah bahwa baik anak yang terinfeksi maupun yang tidak terinfeksi dalam 6-12 bulan pertama kehidupan memiliki antibodi terhadap HIV yang berasal dari ibu, yang kemudian dapat menghilang. Kriteria yang menunjukkan adanya infeksi HIV pada anak adalah terdeteksinya antibodi terhadap HIV pada usia 18 bulan atau lebih. Tidak adanya antibodi terhadap HIV pada anak berusia 18 bulan yang lahir dari ibu yang terinfeksi HIV merupakan kriteria terhadap infeksi HIV.

Keterangan

Metode penentuan Imunoblot.

Materi yang sedang dipelajari Serum

Kunjungan rumah tersedia

Antibodi antinuklear adalah keluarga autoantibodi yang mengikat asam ribonukleat dan protein terkaitnya. Mereka terjadi pada lebih dari 90% pasien dengan penyakit jaringan ikat difus, dan juga sering diamati pada penyakit hati autoimun dan sejumlah kondisi lainnya. Sampai saat ini, sekitar 200 varietas dari keluarga autoantibodi ini telah dikarakterisasi, tetapi tidak semuanya dapat digunakan dalam praktik klinis.

Imunoblot antibodi antinuklear memungkinkan dilakukannya studi secara simultan terhadap 15 jenis utama antibodi antinuklear dalam satu tes, yang memastikan diagnosis banding penyakit rematik sistemik utama. Setiap jenis autoantibodi yang dideteksi oleh imunoblot biasanya diamati pada pasien dengan gambaran klinis yang khas, sehingga spektrum autoantibodi memungkinkan tidak hanya untuk mendiagnosis penyakit, tetapi juga untuk menetapkan risiko mengembangkan manifestasi klinis tertentu.

Imunoblot antibodi antinuklear disarankan untuk digunakan pada tahap kedua pemeriksaan serologis dengan hasil positif dari tes lain yang menunjukkan adanya antibodi antinuklear dalam serum subjek. Tes ini termasuk penentuan antibodi antinuklear (skrining ELISA), deteksi faktor antinuklear (ANF) pada sel Hep2 (), antibodi antinuklear dan antibodi terhadap antigen nuklir yang dapat diekstraksi (ENA,).

Metode imunoblot antibodi antinuklear dalam diagnosis penyakit rematik sistemik ditandai dengan spesifisitas klinis yang tinggi. Tetapi spesifisitas antibodi antinuklear, bahkan pada titer ANF () yang tinggi, tidak selalu memungkinkan untuk ditetapkan, karena sejumlah antigen antibodi antinuklear masih belum dikarakterisasi. Hasil imunoblot negatif dalam kasus ini tidak menyingkirkan diagnosis penyakit rematik sistemik. Sejumlah antibodi antinuklear dapat dideteksi menggunakan imunoblot - panel autoantibodi spesifik miositis () dan imunoblot - panel autoantibodi pada skleroderma ().

literatur

1. Lapin S.V. Totolyan A.A. Diagnostik laboratorium imunologi penyakit autoimun / Rumah penerbitan "Chelovek", St. Petersburg - 2010. 272 ​​hlm.
2. Nasonov E.L., Aleksandrova E.N. Standar modern untuk diagnosis laboratorium penyakit rematik. Pedoman Klinis / BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodi pada Penyakit Autoimun Spesifik Organ: Referensi Diagnostik/PABST, Dresden - 2011. 300 p.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodi pada Penyakit Autoimun Sistemik: Referensi Diagnostik/PABST, Dresden - 2007. 300 p.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodi edisi ke-2./ Elsevier Science - 2006. 862 hal.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Kriteria Diagnostik Penyakit Autoimun / Humana Press - 2008. 598 p.
7. Instruksi Kit Reagen.

Pelatihan

Lebih baik bertahan 4 jam setelah makan terakhir, tidak ada persyaratan wajib.

Indikasi untuk janji

Tes ini diindikasikan untuk diagnosis dan diagnosis banding dari kondisi berikut:

• lupus eritematosus sistemik;
• lupus kulit subakut dan jenis lupus kulit lainnya;
• penyakit jaringan ikat campuran;
• Sindrom Sjögren dan penyakit terkait;
• skleroderma difus dan terlokalisasi, sindrom CREST;
• miopati inflamasi (polimiositis dan dermatomiositis);
• radang sendi kronis remaja;
• hepatitis autoimun;
• sirosis bilier primer dan kolangitis sklerosis;
• penggunaan tes ini diindikasikan ketika mendeteksi titer tinggi faktor antinuklear, antibodi antinuklear, antibodi terhadap antigen nuklir yang dapat diekstraksi, antibodi terhadap DNA, antibodi terhadap nukleosom dan antibodi antifosfolipid.

Interpretasi hasil

Interpretasi hasil tes berisi informasi untuk dokter yang hadir dan bukan merupakan diagnosis. Informasi di bagian ini tidak boleh digunakan untuk diagnosis diri atau pengobatan sendiri. Diagnosis yang akurat dibuat oleh dokter, menggunakan hasil pemeriksaan ini dan informasi yang diperlukan dari sumber lain: riwayat, hasil pemeriksaan lain, dll.

Satuan pengukuran: uji kualitatif, hasilnya disajikan dalam bentuk “terdeteksi” atau “tidak ditemukan”.

Ketika pita yang mencirikan keberadaan jenis antibodi apa pun terdeteksi, intensitas warna pita juga dijelaskan dengan jumlah plus ("persilangan") untuk masing-masing jenis antibodi yang diidentifikasi. Peningkatan derajat kepositifan secara tidak langsung mencerminkan isi dan afinitas autoantibodi.

Nilai referensi: antibodi terhadap Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNA, Histone, Nucleosome , Rib P, AMA-M2, Jo-1 tidak ditemukan.

Hasil penentuan autoantibodi disajikan dalam "persilangan" untuk setiap antigen yang sesuai. Peningkatan derajat seropositif secara tidak langsung mencerminkan kandungan dan afinitas autoantibodi. Opsi skor seropositif tercantum di bawah ini:

1. Antibodi tidak ditemukan.
2. +/- - hasil garis batas;
3. + - kandungan autoantibodi yang rendah terhadap antigen tertentu;
4. ++ adalah kandungan rata-rata autoantibodi terhadap antigen tertentu;
5. +++ - kandungan autoantibodi yang tinggi terhadap antigen spesifik.

Penyakit utama yang terkait dengan deteksi antibodi antinuklear:

antigen	Berarti
Sm (Smith)	Penanda spesifik untuk lupus eritematosus sistemik (termasuk dalam kriteria ke-10 untuk SLE dari American College of Rheumatology, ACR)
SS-A (Ro52)	Ini dicatat dalam berbagai penyakit autoimun, lebih sering pada lupus eritematosus sistemik dan bentuk kulitnya, penyakit rematik sistemik, rheumatoid arthritis, penyakit hati autoimun, dll.
SS-A (Ro60)	Lupus eritematosus sistemik, bentuk kulit dari lupus eritematosus, fotosensitifitas pada lupus eritematosus sistemik, risiko tinggi lupus eritematosus kongenital dan penyakit jantung janin. Indikator serologis utama pada sindrom Sjögren. Hal ini sering dicatat bersama dengan antibodi terhadap antigen SS-A (Ro52).
SS-B	Sindrom Sjögren, lupus eritematosus sistemik.
PCNA	Lupus eritematosus sistemik, risiko nefritis lupus.
Ribosom (Ribo P)	Lupus eritematosus sistemik, risiko kerusakan sistem saraf pusat.
Nukleosom	Lupus eritematosus sistemik, risiko tinggi glomerulonefritis lupus.
DNA untai ganda	Penanda spesifik lupus eritematosus sistemik (termasuk dalam kriteria 10 SLE ACR), risiko tinggi lupus nephritis.
snRNP/Sm	Penyakit jaringan ikat campuran, lupus eritematosus sistemik dengan risiko rendah kerusakan ginjal, skleroderma.
histon	Lupus eritematosus sistemik, lupus yang diinduksi obat, skleroderma.
Scl-70	Sklerosis sistemik dengan lesi difus pada kulit dan organ dalam.
PM-Sc	Scleroderma dengan polimiositis.
CENP-B	Sindrom CREST dengan sklerodaktili, telangiektasis, kalsifikasi subkutan, sindrom Raynaud, esofagitis.
Jo-1	Polimiositis berupa sindrom antisintetase.
AMA-M2	Sirosis bilier primer, sindrom Sjögren.

Immunoblotting (immunoblot) adalah metode referensi yang sangat spesifik dan sangat sensitif yang mengkonfirmasi diagnosis untuk pasien dengan hasil tes positif atau tidak pasti yang diperoleh, termasuk. menggunakan RPGA atau ELISA .

Metode pendeteksian antibodi terhadap antigen individu patogen ini didasarkan pada ELISA pada membran nitroselulosa, di mana protein spesifik diterapkan dalam bentuk pita terpisah, dipisahkan oleh elektroforesis gel. Jika ada antibodi terhadap antigen tertentu, garis gelap muncul di lokus strip yang sesuai. Keunikan imunoblot terletak pada kandungan informasinya yang tinggi dan keandalan hasil yang diperoleh.

bahan penelitian adalah serum atau plasma manusia. Untuk penelitian pada satu strip, diperlukan 1,5-2 ml darah atau 15-25 l serum.

Menurut rekomendasi WHO, immunoblotting (western blot) digunakan dalam diagnosis infeksi HIV sebagai metode ahli tambahan, yang seharusnya mengkonfirmasi hasil ELISA. Metode ini biasanya digunakan untuk memeriksa ulang hasil ELISA positif, karena dianggap lebih sensitif dan spesifik, meskipun lebih kompleks dan mahal.

Immunoblotting menggabungkan enzyme immunoassay (ELISA) dengan pemisahan elektroforesis awal protein virus dalam gel dan transfernya ke membran nitroselulosa. Prosedur imunoblot terdiri dari beberapa tahap. Pertama, pra-pemurnian dan penghancuran komponen penyusunnya, HIV dikenai elektroforesis, sementara semua antigen yang membentuk virus dipisahkan berdasarkan berat molekul. Kemudian, dengan blotting, antigen dipindahkan dari gel ke strip nitroselulosa atau filter nilon, yang sekarang mengandung spektrum protein yang tidak terlihat oleh mata, karakteristik HIV. Selanjutnya, bahan uji (serum, plasma darah pasien, dll.) Dioleskan ke strip, dan jika ada antibodi spesifik dalam sampel, mereka mengikat strip protein antigen yang benar-benar sesuai dengannya. Sebagai hasil dari manipulasi berikutnya (seperti ELISA), hasil interaksi ini divisualisasikan - dibuat terlihat. Kehadiran garis-garis di area tertentu dari strip menegaskan adanya antibodi dalam serum yang dipelajari untuk antigen HIV yang didefinisikan secara ketat.

Imunoblotting paling sering digunakan untuk mengkonfirmasi diagnosis infeksi HIV. WHO menganggap serum positif jika antibodi terhadap dua protein amplop HIV terdeteksi dengan imunoblotting. Menurut rekomendasi ini, jika ada reaksi dengan hanya satu protein amplop (gp160, gp120, gp41) dalam kombinasi atau tanpa reaksi dengan protein lain, hasilnya dianggap meragukan dan studi kedua direkomendasikan menggunakan kit dari yang berbeda. seri atau dari perusahaan lain. Jika setelah itu hasilnya masih meragukan, penelitian dilanjutkan setiap 3 bulan.

Keunikan

Analisis imunoblot adalah metode andal yang memungkinkan Anda menentukan keberadaan antibodi terhadap antigen HIV tipe pertama dan kedua. Jika seseorang terinfeksi, antibodi muncul dalam waktu dua minggu, yang dapat dideteksi jauh kemudian. Keunikan HIV adalah jumlah antibodi meningkat dengan cepat dan tetap berada dalam darah pasien. Bahkan jika ada, penyakit ini mungkin tidak muncul selama dua tahun atau lebih. Metode ELISA tidak selalu akurat menentukan keberadaan penyakit, oleh karena itu, konfirmasi hasil menggunakan imunoblotting dan PCR diperlukan jika enzim immunoassay positif.

Indikasi untuk janji

Apa "imunoblot" ini telah ditemukan, tetapi kepada siapa penelitian ini ditentukan? Alasan untuk melakukan tes human immunodeficiency virus (HIV) dengan immunoblotting adalah hasil ELISA positif. Untuk pasien yang akan dioperasi perlu dilakukan enzyme immunoassay. Selain itu, analisis harus dilakukan untuk wanita yang merencanakan kehamilan, serta untuk semua orang yang melakukan hubungan seks bebas. Tetapkan imunoblotting untuk pasien dengan HIV, jika hasil ELISA diragukan.

Gejala mengkhawatirkan berikut mungkin menjadi alasan untuk pergi ke dokter:

• penurunan berat badan yang tajam;
• kelemahan, hilangnya kapasitas kerja;
• gangguan usus (diare) yang berlangsung selama tiga minggu;
• dehidrasi tubuh;
• demam;
• pembengkakan kelenjar getah bening di tubuh;
• perkembangan kandidiasis, tuberkulosis, pneumonia, toksoplasmosis, eksaserbasi herpes.

Pasien tidak perlu melakukan persiapan sebelum mendonorkan darah vena. 8-10 jam sebelum belajar, Anda tidak bisa makan. Tidak dianjurkan untuk minum minuman beralkohol dan kopi sehari sebelum mendonorkan darah, untuk melakukan latihan fisik yang berat, untuk mengalami kegembiraan.

Bagaimana penelitian dilakukan?

Dari sudut pandang pasien, imunoblot tidak berbeda dengan analisis lain: darah vena diambil, diperiksa dan hasilnya diperoleh. Tetapi jika Anda membahas sedikit lebih detail tentang tekniknya, maka itu tidak terlalu sederhana, tetapi tetap mencoba untuk mencari tahu.

Pertama, virus human immunodeficiency "referensi" diambil di pabrik pembuatan reagen. Kemudian, dengan menggunakan prosedur khusus (elektroforesis) dalam media gel, virus dihancurkan hingga komponen terkecilnya: protein (antigen virus). Kemudian, menggunakan blotting itu sendiri (dari bahasa Inggris pembasahan), partikel ditempatkan pada bahan khusus - nitroselulosa atau filter nilon, indikator siap pakai, yang disebut strip, diperoleh. Strip adalah strip di mana antigen didistribusikan tergantung pada berat molekulnya, dalam urutan yang jelas, yaitu protein tertentu sesuai dengan setiap milimeter kertas.

Seperti yang Anda ketahui, jika virus ada dalam darah manusia, maka tubuh mulai memproduksi antibodi terhadap cangkangnya (protein tertentu), dan setiap virus memiliki kumpulan protein antigennya sendiri. Deteksi antibodi terhadap protein antigen dalam darah adalah dasar dari metode imunoblot. Lagi pula, jika antibodi bertabrakan dengan antigen, maka mereka pasti akan berinteraksi satu sama lain - mereka "menempel".

Jadi, antigen ada di strip strip dan jika ada antigen yang cocok dalam darah subjek tes, mereka pasti akan berinteraksi satu sama lain, dan di tempat ini, di strip strip, indikator akan muncul - sebuah flat akan muncul (seperti tes kehamilan). Selain itu, di tempat strip tertentu, dengan cara ini dokter akan memahami apakah ada serangkaian protein yang menjadi ciri virus tertentu dalam darah.

Jadi, misalnya, jika ada penggelapan pada strip di tempat-tempat lokalisasi protein gp160, gp120, gp41 HIV didiagnosis, untuk virus lain itu akan menjadi satu set protein yang sama sekali berbeda.

Perlu dicatat bahwa imunoblot memungkinkan Anda untuk secara akurat menentukan keberadaan virus hanya jika set antibodi dalam darah lengkap, yaitu, jika protein gp160, gp120, gp41 hadir pada saat yang sama, maka ini adalah 100% infeksi HIV. Tetapi jika paling tidak ada satu yang hilang, misalnya gp41 tidak ada, tetapi hanya ada gp160, gp120, maka tes tersebut dianggap diragukan dan perlu diulang.

FAQ

Apa saja tahapan imunoblot?

1. Persiapan strip. Virus immunodeficiency (HIV), yang sebelumnya telah dimurnikan dan dihancurkan menjadi komponen penyusunnya, dikenai elektroforesis, sedangkan antigen yang membentuk HIV dipisahkan berdasarkan berat molekul. Kemudian, dengan blotting (analog dengan memeras kelebihan tinta pada “blotter”), antigen ditransfer ke strip nitroselulosa, yang sekarang berisi spektrum pita antigenik karakteristik HIV yang tidak terlihat oleh mata.
2. Studi sampel. Bahan uji (serum, plasma darah pasien, dll.) diaplikasikan pada strip nitroselulosa, dan jika ada antibodi spesifik dalam sampel, mereka mengikat pita antigenik (pelengkap) yang sesuai. Sebagai hasil dari manipulasi selanjutnya, hasil interaksi ini divisualisasikan - dibuat terlihat.
3. Interpretasi hasil. Kehadiran pita di area tertentu dari pelat nitroselulosa menegaskan keberadaan antibodi dalam serum yang dipelajari untuk antigen HIV yang ditentukan secara ketat.

• Jalur A - Kontrol Positif
• Jalur B - Kontrol positif yang lemah
• Jalur C - Kontrol Negatif
• Stripe D - Sampel positif (antibodi terhadap HIV-1 terdeteksi)

Bagaimana cara menguraikan analisis?

Jika ELISA menunjukkan adanya semua atau hampir semua antibodi terhadap antigen menurut sistem tes ini, ini menunjukkan tes HIV positif. Jika respons setelah pemeriksaan enzim serologis kedua positif, maka imunoblot harus dilakukan. Interpretasi hasil nya akan lebih benar. Jika uji imunosorben terkait-enzim memberikan hasil positif, analisis imunoblot berikutnya juga menunjukkan adanya HIV, maka hasil akhir dimasukkan.

Ketika analisis diuraikan, Anda perlu tahu bahwa tes HIV positif ditentukan oleh:

• 60% sampai 65% 28 hari setelah infeksi;
• dalam 80% - setelah 42 hari;
• dalam 90% - setelah 56 hari;
• dalam 95% - setelah 84 hari.

Jika respons terhadap HIV positif, ini berarti antibodi terhadap virus telah terdeteksi. Untuk menghindari jawaban positif palsu, perlu dilakukan tes ulang, sebaiknya dua kali. Jika antibodi terhadap imunodefisiensi terdeteksi ketika melewati dua tes dari dua atau ketika melewati 3 tes dalam 2 di antaranya, maka dianggap hasilnya positif.

Antigen p24 dapat dideteksi dalam darah sedini 14 hari dari tanggal infeksi. Menggunakan metode enzim immunoassay, antigen ini terdeteksi 14-56 hari. Setelah 60 hari, itu tidak lagi dalam darah. Hanya ketika AIDS terbentuk di dalam tubuh, pertumbuhan kembali protein p24 ini dalam darah terjadi. Oleh karena itu, sistem tes immunoassay enzim digunakan untuk mendeteksi HIV pada hari-hari pertama infeksi atau untuk menentukan bagaimana penyakit berkembang dan memantau proses pengobatan. Sensitivitas analitik yang tinggi dari enzyme immunoassay mendeteksi antigen p24 dalam bahan biologis untuk HIV subtipe pertama pada konsentrasi 5 hingga 10 pg/ml, untuk HIV subtipe kedua dari 0,5 ng/ml atau kurang.

Di bawah meragukan hasil enzim immunoassay menyiratkan bahwa diagnosis salah di suatu tempat, sebagai suatu peraturan, petugas medis mencampuradukkan sesuatu, atau orang tersebut memiliki tanda-tanda infeksi, dan hasilnya negatif, yang menyebabkan kecurigaan, orang tersebut dikirim untuk pengujian ulang .

Di bawah positif palsu Hasilnya dipahami sebagai hasil ketika tes darah dilakukan dalam kondisi pasien sebagai berikut:

• kehamilan;
• jika seseorang memiliki ketidakseimbangan hormon;
• dengan imunosupresi berkepanjangan.

Bagaimana menguraikan analisis dalam kasus ini? Hasil positif palsu diberikan jika setidaknya satu protein terdeteksi. Karena fakta bahwa antigen p24 sangat tergantung pada variasi individu, dengan menggunakan metode ini, dari 20% hingga 30% pasien terdeteksi pada periode pertama infeksi.

Seberapa andalkah hasil tes positif?

Terkadang ELISA memiliki hasil positif palsu (pada sekitar 1% kasus), alasan untuk hasil ini bisa jadi karena kehamilan, berbagai infeksi virus, serta kecelakaan sederhana. Setelah menerima hasil positif, diperlukan tes yang lebih akurat - imunoblot, yang menurut hasil diagnosis dibuat. Hasil imunoblot positif setelah ELISA positif adalah 99,9% dapat diandalkan - ini adalah akurasi maksimum untuk tes medis apa pun. Jika imunoblotnya negatif, maka tes pertama adalah positif palsu, dan sebenarnya orang tersebut tidak mengidap HIV.

Apa yang dimaksud dengan hasil tak tentu (diragukan)?

Jika ELISA positif atau negatif, maka imunoblot bisa positif, negatif, atau tak tentu. Hasil imunoblot tak tentu, yaitu kehadiran di immunoblot setidaknya satu protein virus dapat diamati jika infeksi baru saja terjadi dan masih ada sedikit antibodi terhadap HIV dalam darah, dalam hal immunoblot akan menjadi positif setelah beberapa saat. Juga, hasil yang tidak pasti mungkin muncul tanpa adanya infeksi HIV dengan hepatitis, beberapa penyakit metabolik kronis, atau selama kehamilan. Dalam hal ini, imunoblot akan menjadi negatif atau penyebab hasil yang tidak pasti akan ditemukan.

Berapa biaya analisisnya?

Immunoblot untuk HIV tidak berlaku untuk penelitian murahan. Rata-rata, pemeriksaan skrining dengan enzim immunoassay berharga 500 hingga 900 rubel. Immunoblotting adalah studi verifikasi, yang biayanya dari tiga hingga lima ribu rubel. Metode yang lebih kompleks jauh lebih mahal. Misalnya, untuk analisis reaksi berantai polimerase (PCR), Anda harus membayar sekitar 12.000 rubel.

Dimana melakukan analisis?

Di mana saya bisa melakukan tes HIV? ELISA, studi imunoblot dilakukan di klinik swasta perkotaan, hasilnya dikeluarkan dalam sehari. Diagnosis segera juga dimungkinkan. Di lembaga medis negara, tes ELISA dan imunoblotting dilakukan secara gratis, sesuai dengan undang-undang Federasi Rusia. Wanita hamil, serta pasien yang akan dirawat di rumah sakit atau menjalani operasi, harus menjalani tes penyakit menular.

hipotensi, takikardia, sesak napas, sianosis. Dalam kasus penyakit yang parah, pendarahan, muntah dengan campuran darah mungkin terjadi. Hati dan limpa membesar. Perhatikan oliguria. Suhu tetap tinggi secara konsisten selama 3-10 hari. Dalam darah tepi - leukositosis neutrofilik dengan pergeseran formula ke kiri. Selain manifestasi umum wabah yang dijelaskan, karakteristik lesi dari bentuk klinis individu penyakit berkembang.

Bentuk kulit jarang (3-5%). Sebuah tempat muncul di lokasi gerbang masuk infeksi, kemudian papula, vesikel (konflik), diisi dengan isi hemoragik serosa, dikelilingi oleh zona infiltrasi dengan hiperemia dan edema. Flikten ditandai dengan rasa sakit yang parah. Saat dibuka, membentuk borok dengan keropeng gelap di bagian bawah. Ulkus wabah ditandai dengan perjalanan yang panjang, sembuh perlahan, membentuk bekas luka. Jika bentuk ini diperumit oleh septikemia, pustula dan borok sekunder terjadi. Mungkin pengembangan bubo regional (bentuk kulit-bubonic).

Bentuk bubonic paling sering terjadi (sekitar 80%) dan ditandai dengan perjalanan yang relatif jinak. Dari hari-hari pertama penyakit, rasa sakit yang tajam muncul di daerah kelenjar getah bening regional, yang membuatnya sulit untuk bergerak dan membuat pasien mengambil posisi paksa. Bubo utama, sebagai suatu peraturan, adalah soliter; beberapa bubo lebih jarang diamati. Dalam kebanyakan kasus, kelenjar getah bening inguinal dan femoralis terpengaruh, kelenjar getah bening aksila dan leher agak kurang umum. Ukuran bubo bervariasi dari kenari hingga apel berukuran sedang. Ciri-ciri cerah adalah rasa sakit yang tajam, konsistensi padat, perlekatan pada jaringan di bawahnya, kehalusan kontur karena perkembangan periadenitis. Bubo mulai terbentuk pada hari kedua sakit. Saat berkembang, kulit di atasnya berubah menjadi merah, mengkilat, seringkali sianosis. Pada awalnya padat, kemudian melunak, muncul fluktuasi, kontur menjadi kabur. Pada hari ke 10-12 penyakit, itu terbuka - fistula, ulserasi terbentuk. Dengan perjalanan penyakit yang jinak dan terapi antibiotik modern, resorpsi atau sklerosisnya diamati. Sebagai hasil dari pengenalan patogen secara hematogen, bubo sekunder dapat terbentuk, yang muncul kemudian dan berukuran kecil, kurang menyakitkan dan, sebagai suatu peraturan, tidak bernanah. Komplikasi yang mengerikan dari bentuk ini dapat berupa perkembangan bentuk paru sekunder atau septik sekunder, yang secara tajam memperburuk kondisi pasien, hingga kematian.

paru primer bentuknya jarang, selama periode epidemi pada 5-10% kasus dan merupakan bentuk klinis penyakit yang paling berbahaya secara epidemiologis dan parah. Ini dimulai dengan tajam, dengan kekerasan. Dengan latar belakang sindrom keracunan yang diucapkan, batuk kering, sesak napas parah, rasa sakit di dada muncul sejak hari-hari pertama. Batuk kemudian menjadi produktif, menghasilkan sputum yang jumlahnya dapat bervariasi dari beberapa ludah hingga jumlah besar, jarang tidak ada sama sekali. Dahak, pada awalnya berbusa, seperti kaca, transparan, kemudian menjadi berdarah, kemudian menjadi berdarah murni, mengandung sejumlah besar bakteri wabah. Biasanya itu adalah konsistensi cair - salah satu tanda diagnostik. Data fisik langka: sedikit pemendekan suara perkusi di atas lobus yang terkena, selama auskultasi, ronki menggelegak halus yang tidak banyak, yang jelas tidak sesuai dengan kondisi serius umum pasien. Periode terminal ditandai dengan peningkatan sesak napas, sianosis, perkembangan pingsan, edema paru, dan TSS. Tekanan darah turun, denyut nadi menjadi lebih cepat dan menjadi seperti benang, bunyi jantung teredam, hipertermia digantikan oleh hipotermia. Dengan tidak adanya pengobatan, penyakit ini berakibat fatal dalam 2-6 hari. Dengan penggunaan antibiotik dini, perjalanan penyakitnya jinak, sedikit berbeda

Kit reagen MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 dirancang untuk mengkonfirmasi deteksi antibodi terhadap protein individu (antigen) dari HIV-1 dan/atau HIV-1 kelompok O dan/atau HIV-2 dalam serum manusia atau plasma dengan metode immune blot.

Fitur khas:

• Set reagen "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" mengandung protein virus lisat murni dari HIV 1 dan gp36 determinate antigenik dari HIV-2;
• Menyediakan deteksi antibodi terhadap HIV-1, HIV-1 grup O, HIV 2 pada satu strip;
• Prosedur sederhana untuk mempersiapkan dan melakukan analisis;
• Kontrol kualitas internal reaksi*
• Kecepatan analisis maksimum (3 jam);
• Sejumlah kecil sampel uji - 20 l;
• Tidak memerlukan peralatan tambahan untuk penelitian;
• Kualitas kit dijamin dengan penggunaan sampel standar Rusia dan internasional**

* Kontrol kualitas internal dipastikan dengan adanya:

• strip kontrol internal, memberikan kontrol pengenalan sampel serum atau plasma;
• kontrol serum negatif (K-);
• mengontrol serum positif (K+), yang memungkinkan untuk mengidentifikasi pita yang terdeteksi pada strip;
• kontrol serum positif lemah (K + cl), yang memberikan kontrol sensitivitas kit reagen.

**Kualitas asuransi:

Karakteristik kit reagen MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 ditentukan dengan menguji sampel dari sampel acak donor, pasien yang didiagnosis dengan infeksi HIV, panel serokonversi komersial, panel standar, dan sampel dengan "berpotensi mengganggu komponen penentuan.

Kit reagen tidak memberikan hasil positif palsu dalam penelitian serum panel standar yang tidak mengandung antibodi terhadap HIV 1.2 dan antigen HIV-1 ("Standar AT (-) HIV", No. FSR 2007/00953 tanggal 10.25 .2007). Spesifisitas - 100%.

Spesifisitas diagnostik ditentukan dengan memeriksa sampel acak 200 donor dari berbagai pusat darah dan klinik dengan konfirmasi awal tidak adanya infeksi HIV-1, HIV-2. Spesifisitas dalam studi sampel acak dari donor adalah 100%;

Spesifisitas kit reagen ditentukan dalam studi 250 sampel, termasuk sampel serum atau plasma yang diperoleh dari wanita hamil, pasien rawat inap, pasien hepatitis C dan E, dan sampel dengan komponen "yang berpotensi mengganggu determinasi". Saat menggunakan kit MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2, tidak ada hasil positif palsu yang ditemukan untuk sampel ini.

Sensitivitas diagnostik ditentukan dengan menggunakan:
- Sampel plasma dari panel Boston Biomedica, Inc HIV-1 (WWRB 301) dari berbagai daerah yang mengandung subtipe HIV-1 yang berbeda: grup M (subtipe A, B, C, D, E, F), dan grup O; sensitivitas kit reagen adalah 100%;

Sensitivitas kit reagen ditentukan dalam studi panel serokonversi internasional Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), cat. nrs. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932, PRB 940

Kit reagen mendeteksi antibodi terhadap HIV-1 dalam serum panel standar yang mengandung antibodi terhadap HIV-1 (“Standar AT (+) HIV-1”, No. FSR 2007/00953 tanggal 25 Oktober 2007), mendeteksi antibodi terhadap HIV-2 dalam serum panel standar yang mengandung antibodi terhadap HIV-2 ("Standar AT (+) HIV-2", No. FSR 2007/00953 tanggal 25/10/2007). Sensitivitas - 100%.

Sertifikat Pendaftaran No. FSR 2010/07958 tanggal 13 Juli 2011 (masa berlaku tidak terbatas)

Menggabungkan:

• Imunosorben. Strip membran nitroselulosa putih dengan protein HIV-1 individu (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) diadsorpsi pada mereka dengan metode transfer listrik dan diterapkan pada strip dengan peptida HIV-2 sintetis, analog dari protein gp36 dan manusia anti-IgG (kontrol internal) - 18 pcs;
• K- - kontrol serum negatif. Serum darah manusia yang tidak mengandung antibodi terhadap HIV-1,2, HCV, antigen HIV, HBsAg, dinonaktifkan dengan pemanasan pada 560C; cairan kuning muda transparan - 1 tabung reaksi (0,08 ml). Mengandung pengawet: thimerosal dan natrium azida;
• K+ - kontrol serum positif. Serum darah manusia yang mengandung antibodi terhadap HIV-1,2 (titer tidak kurang dari 1:10000), tidak mengandung HBsAg, antigen HIV, antibodi terhadap HCV, diinaktivasi dengan pemanasan pada 560C; cairan kuning muda transparan - 1 tabung reaksi (0,08 ml) Mengandung pengawet: thimerosal dan natrium azida;
• K+sl - mengontrol serum positif lemah. Serum darah manusia yang mengandung antibodi terhadap HIV-1,2 (titer tidak lebih dari 1:200), tidak mengandung HBsAg, antigen HIV, antibodi terhadap HCV, diinaktivasi dengan pemanasan pada 560C; cairan kuning muda transparan - 1 tabung reaksi (0,08 ml). Mengandung pengawet: thimerosal dan natrium azida;
• RROKk (x10) - solusi untuk pengenceran sampel dan konjugasi. Konsentrat - Buffer Tris yang mengandung serum kambing normal yang telah diolah sebelumnya; cairan abu-abu buram - 1 botol (10 ml). Mengandung pengawet: thimerosal;
• PRk (x20) - larutan pencuci. Konsentrat - buffer Tris yang mengandung Tween-20; cairan bening tidak berwarna - 1 botol (70 ml). Mengandung pengawet: thimerosal;
• Mengkonjugasikan. Antibodi kambing terhadap IgG manusia, terkonjugasi dengan alkaline phosphatase; cairan bening tidak berwarna - 1 tabung reaksi (0,06 ml);
• Substrat (larutan pewarna). Larutan 5-bromo-4-fluoro-indolyl-phosphate (BCIP) dan nitrosine tetrazolium (NBT); cairan kuning muda transparan - 1 botol (50 ml);
• Bedak untuk blotting imun. Susu bubuk skim - bubuk putih atau kuning muda amorf - 5 bungkus x 1g;
• Tablet dengan penutup untuk menyiapkan reaksi - 2 buah;
• Pinset plastik - 1 buah.