Penggunaan tes combibest dalam diagnosis hiv. Metode terkini untuk mendiagnosis infeksi HIV Apa yang diharapkan dari hasil HIV

Informasi umum tentang studi

HIV (human immunodeficiency virus) adalah virus dari keluarga retrovirus yang menginfeksi sel-sel sistem kekebalan tubuh manusia (CD4, T-helper). Menyebabkan AIDS.

HIV-1 adalah jenis virus yang paling umum, paling sering ditemukan di Rusia, Amerika Serikat, Eropa, Jepang dan Australia (biasanya subtipe B).

HIV-2 adalah jenis yang langka, umum di Afrika Barat.

Untuk diagnosis human immunodeficiency virus, sistem uji generasi keempat gabungan digunakan, yang mampu mendeteksi infeksi HIV sedini 2 minggu setelah virus memasuki darah, sedangkan sistem uji generasi pertama melakukan ini hanya 6-12 minggu setelah infeksi.

Keuntungan dari uji HIV gabungan ini adalah deteksi, berkat penggunaan antibodi terhadap HIV-1 p24 sebagai reagen, antigen p24 spesifik (protein kapsid virus), yang dapat dideteksi dengan tes ini sudah 1-4 minggu setelah infeksi, yaitu bahkan sebelum serokonversi, yang secara signifikan mengurangi "periode jendela".

Selain itu, tes HIV semacam itu mendeteksi antibodi terhadap HIV-1 dan HIV-2 dalam darah (menggunakan reaksi antigen-antibodi), yang diproduksi dalam jumlah yang cukup untuk ditentukan oleh sistem pengujian setelah 2-8 minggu dari saat infeksi.

Setelah serokonversi, antibodi mulai mengikat antigen p24, menghasilkan tes antibodi HIV positif dan tes p24 negatif. Namun, setelah beberapa waktu, antibodi dan antigen akan terdeteksi dalam darah pada saat yang bersamaan. Pada tahap terminal, tes AIDS untuk antibodi terhadap HIV dapat memberikan hasil negatif, karena mekanisme untuk memproduksi antibodi terganggu.

Tahapan infeksi HIV

1. Masa inkubasi, atau “periode jendela seronegatif”, adalah waktu dari saat infeksi sampai produksi antibodi pelindung terhadap virus dalam darah, ketika tes antibodi terhadap HIV negatif, tetapi orang tersebut sudah dapat menularkan virus ke orang lain. Durasi periode ini adalah dari 2 minggu hingga 6 bulan.
2. Masa infeksi HIV akut terjadi rata-rata 2-4 minggu setelah infeksi dan berlangsung kurang lebih 2-3 minggu. Pada tahap ini, beberapa orang mungkin mengalami gejala seperti flu yang tidak spesifik karena replikasi virus yang aktif.
3. Tahap laten tidak menunjukkan gejala, tetapi selama itu terjadi penurunan kekebalan secara bertahap dan peningkatan jumlah virus dalam darah.
4. AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome) adalah tahap akhir dari infeksi HIV, yang ditandai dengan penekanan parah pada sistem kekebalan tubuh, serta penyakit penyerta, ensefalopati atau kanker.

Terlepas dari kenyataan bahwa infeksi HIV tidak dapat disembuhkan, saat ini ada terapi antiretroviral (ART) yang sangat aktif, yang secara signifikan dapat memperpanjang hidup orang yang terinfeksi HIV dan meningkatkan kualitasnya.

Tes ini memiliki nilai diagnostik yang sangat tinggi jika infeksi HIV terjadi sesaat sebelum waktu tes (2-4 minggu).

Untuk apa penelitian digunakan?

Analisis ini digunakan untuk diagnosis dini HIV, yang membantu mencegah penularan virus lebih lanjut ke orang lain, serta inisiasi terapi antiretroviral dan pengobatan penyakit yang berkontribusi pada perkembangan infeksi HIV secara tepat waktu.

Kapan jadwal belajarnya?

• Dengan gejala persisten (selama 2-3 minggu) dengan etiologi yang tidak jelas: suhu subfebrile, diare, keringat malam, penurunan berat badan tiba-tiba, pembengkakan kelenjar getah bening.
• Dengan infeksi herpes berulang, hepatitis virus, pneumonia, TBC, toksoplasmosis.
• Jika pasien menderita penyakit menular seksual (sifilis, klamidia, gonore, herpes genital, vaginosis bakterial).
• Jika pasien telah melakukan hubungan seks vaginal, anal atau oral tanpa kondom dengan banyak pasangan seksual, pasangan baru, atau pasangan yang status HIVnya tidak diketahui oleh pasien.
• Ketika pasien menjalani prosedur transfusi darah (walaupun kasus infeksi dengan cara ini praktis dikecualikan, karena darah secara hati-hati diuji untuk keberadaan partikel virus dan menjalani perlakuan panas khusus).
• Jika pasien telah menyuntikkan obat menggunakan instrumen yang tidak steril.
• Kehamilan/Merencanakan Kehamilan (Mengkonsumsi azidothymidine selama kehamilan, operasi caesar untuk menghindari penularan virus ke bayi pada saat melewati jalan lahir, dan tidak menyusui mengurangi risiko penularan HIV dari ibu ke anak dari 30% menjadi 1%).
• Suntikan yang tidak disengaja dengan jarum suntik atau benda lain (seperti alat medis) yang mengandung darah yang terinfeksi (dalam kasus seperti itu, kemungkinan infeksi sangat rendah).

Diagnosis infeksi HIV yang tepat waktu menjadi ukuran yang sangat penting, karena pengobatan dini dapat sangat menentukan perkembangan penyakit lebih lanjut dan memperpanjang hidup pasien. Dalam beberapa tahun terakhir, telah terjadi kemajuan yang signifikan di bidang pendeteksian penyakit mengerikan ini: sistem pengujian lama digantikan oleh yang lebih canggih, metode pemeriksaan menjadi lebih mudah diakses, dan akurasinya meningkat secara signifikan.

Pada artikel ini, kita akan berbicara tentang metode modern untuk mendiagnosis infeksi HIV, yang berguna untuk mengetahui pengobatan tepat waktu untuk masalah ini dan menjaga kualitas hidup normal pasien.

Metode untuk mendiagnosis HIV

Di Rusia, untuk diagnosis infeksi HIV, prosedur standar dilakukan, yang mencakup dua tingkat:

• sistem uji ELISA (analisis penyaringan);
• blotting imun (IB).

Metode diagnostik lain juga dapat digunakan:

• tes ekspres.

sistem uji ELISA

Pada tahap pertama diagnosis, tes skrining (ELISA) digunakan untuk mendeteksi infeksi HIV, yang didasarkan pada protein HIV yang dibuat di laboratorium yang menangkap antibodi spesifik yang diproduksi dalam tubuh sebagai respons terhadap infeksi. Setelah interaksinya dengan reagen (enzim) dari sistem uji, warna indikator berubah. Selanjutnya, perubahan warna ini diproses pada peralatan khusus, yang menentukan hasil analisis yang dilakukan.

Tes ELISA tersebut dapat menunjukkan hasil dalam beberapa minggu setelah pengenalan infeksi HIV. Analisis ini tidak menentukan keberadaan virus, tetapi mendeteksi produksi antibodi terhadapnya. Kadang-kadang, dalam tubuh manusia, produksi antibodi terhadap HIV dimulai setelah 2 minggu setelah infeksi, tetapi pada kebanyakan orang, antibodi tersebut diproduksi di kemudian hari, setelah 3-6 minggu.

Ada empat generasi tes ELISA dengan sensitivitas yang berbeda. Dalam beberapa tahun terakhir, sistem uji generasi III dan IV lebih sering digunakan, yang didasarkan pada peptida sintetis atau protein rekombinan dan memiliki spesifisitas dan akurasi yang lebih besar. Mereka dapat digunakan untuk mendiagnosis infeksi HIV, memantau prevalensi HIV, dan memastikan keamanan saat menguji darah yang disumbangkan. Keakuratan sistem pengujian ELISA generasi III dan IV adalah 93-99% (yang lebih sensitif adalah pengujian yang diproduksi di Eropa Barat - 99%).

Untuk melakukan tes ELISA, 5 ml darah diambil dari vena pasien. Antara makan terakhir dan analisis harus setidaknya 8 jam (sebagai aturan, ini dilakukan di pagi hari dengan perut kosong). Tes semacam itu direkomendasikan untuk dilakukan tidak lebih awal dari 3 minggu setelah dugaan infeksi (misalnya, setelah hubungan seksual tanpa kondom dengan pasangan seksual baru).

Hasil tes ELISA diperoleh setelah 2-10 hari:

• hasil negatif: menunjukkan tidak adanya infeksi HIV dan tidak memerlukan rujukan ke spesialis;
• hasil negatif palsu: dapat diamati pada tahap awal infeksi (hingga 3 minggu), pada tahap lanjut AIDS dengan penekanan kekebalan yang parah dan dengan persiapan darah yang tidak tepat;
• hasil positif palsu: dapat diamati pada beberapa penyakit dan dalam kasus persiapan darah yang tidak tepat;
• hasil positif: menunjukkan infeksi HIV, memerlukan IB dan rujukan pasien ke spesialis di pusat AIDS.

Mengapa tes ELISA dapat memberikan hasil positif palsu?

Hasil positif palsu dari tes ELISA untuk HIV dapat diamati dengan pemrosesan darah yang tidak tepat atau pada pasien dengan kondisi dan penyakit seperti itu:

• mieloma multipel;
• penyakit menular yang dipicu oleh virus Epstein-Barr;
• keadaan setelah ;
• penyakit autoimun;
• dengan latar belakang kehamilan;
• kondisi setelah vaksinasi.

Untuk alasan yang dijelaskan di atas, antibodi yang bereaksi silang non-spesifik mungkin ada dalam darah, yang produksinya tidak dipicu oleh infeksi HIV.

Dalam beberapa tahun terakhir, frekuensi hasil positif palsu telah menurun secara signifikan karena penggunaan sistem uji generasi III dan IV, yang mengandung peptida dan protein rekombinan yang lebih sensitif (mereka disintesis menggunakan rekayasa genetika in vitro). Setelah penggunaan tes ELISA tersebut, frekuensi hasil positif palsu telah menurun secara signifikan dan sekitar 0,02-0,5%.

Hasil positif palsu tidak berarti bahwa seseorang terinfeksi HIV. Dalam kasus seperti itu, WHO merekomendasikan tes ELISA lain (generasi IV wajib).

Darah pasien dikirim ke laboratorium rujukan atau arbitrase bertanda "ulangi" dan diuji pada sistem uji ELISA generasi IV. Jika hasil analisis baru negatif, maka hasil pertama diakui salah (positif palsu) dan IB tidak dilakukan. Jika hasilnya positif atau meragukan selama tes kedua, pasien diharuskan menjalani IB dalam 4-6 minggu untuk mengkonfirmasi atau menyangkal infeksi HIV.

blotting kekebalan

Diagnosis definitif infeksi HIV hanya dapat dibuat setelah hasil blotting imun positif (IB) diperoleh. Untuk implementasinya, strip nitroselulosa digunakan, di mana protein virus diterapkan.

Pengambilan sampel darah untuk IB dilakukan dari vena. Kemudian mengalami perlakuan khusus dan protein yang terkandung dalam serumnya dipisahkan dalam gel khusus sesuai dengan muatan dan berat molekulnya (manipulasi dilakukan pada peralatan khusus di bawah pengaruh medan listrik). Strip nitroselulosa diterapkan pada gel serum darah dan blotting ("blotting") dilakukan di ruang khusus. Strip diproses dan jika bahan yang digunakan mengandung antibodi terhadap HIV, mereka mengikat pita antigenik pada IB dan muncul sebagai garis.

IB dianggap positif jika:

• menurut kriteria CDC Amerika - ada dua atau tiga baris gp41, p24, gp120 / gp160 di strip;
• menurut kriteria FDA Amerika - ada dua garis p24, p31 dan garis gp41 atau gp120 / gp160 pada strip.

Pada 99,9% kasus, hasil IB positif menunjukkan infeksi HIV.

Dengan tidak adanya garis - IB negatif.

Saat mengidentifikasi jalur dengan gp160, gp120 dan gp41, IB diragukan. Hasil seperti itu dapat dideteksi ketika:

• penyakit onkologis;
• kehamilan;
• transfusi darah yang sering.

Dalam kasus seperti itu, disarankan untuk melakukan studi kedua menggunakan kit dari perusahaan lain. Jika setelah IB tambahan, hasilnya masih meragukan, maka perlu dilakukan tindak lanjut selama enam bulan (IB dilakukan setiap 3 bulan).

reaksi berantai polimerase

Tes PCR dapat mendeteksi RNA virus. Sensitivitasnya cukup tinggi dan memungkinkan mendeteksi infeksi HIV sedini 10 hari setelah infeksi. Dalam beberapa kasus, PCR dapat memberikan hasil positif palsu, karena sensitivitasnya yang tinggi juga dapat bereaksi terhadap antibodi terhadap infeksi lain.

Teknik diagnostik ini mahal, membutuhkan peralatan khusus dan spesialis yang berkualifikasi tinggi. Alasan-alasan ini tidak memungkinkan untuk dilakukan selama pengujian massal terhadap populasi.

PCR digunakan dalam kasus-kasus seperti:

• untuk mendeteksi HIV pada bayi baru lahir yang lahir dari ibu yang terinfeksi HIV;
• untuk mendeteksi HIV dalam "periode jendela" atau dalam kasus IB yang meragukan;
• untuk mengontrol konsentrasi HIV dalam darah;
• untuk studi donor darah.

Hanya dengan tes PCR, diagnosis HIV tidak dibuat, tetapi dilakukan sebagai metode diagnostik tambahan untuk menyelesaikan perselisihan.

Metode Ekspres

Salah satu inovasi dalam diagnosa HIV adalah rapid test yang hasilnya dapat dinilai dalam waktu 10-15 menit. Hasil yang paling efisien dan akurat diperoleh dengan tes imunokromatografi berdasarkan prinsip aliran kapiler. Mereka adalah strip khusus di mana darah atau cairan tes lainnya (air liur, urin) diterapkan. Di hadapan antibodi terhadap HIV, setelah 10-15 menit, strip berwarna dan kontrol muncul pada tes - hasil positif. Jika hasilnya negatif, hanya garis kontrol yang muncul.

Seperti tes ELISA, hasil tes cepat harus dikonfirmasi dengan analisis IB. Hanya dengan demikian diagnosis infeksi HIV dapat ditegakkan.

Ada kit ekspres untuk pengujian di rumah. Tes OraSure Technologies1 (USA) disetujui FDA, tersedia tanpa resep, dan dapat digunakan untuk mendeteksi HIV. Setelah tes, jika hasil positif, pasien disarankan untuk menjalani pemeriksaan di pusat khusus untuk memastikan diagnosis.

Tes yang tersisa untuk digunakan di rumah belum disetujui oleh FDA dan hasilnya bisa sangat dipertanyakan.

Terlepas dari kenyataan bahwa tes cepat lebih rendah akurasinya dibandingkan tes ELISA generasi IV, tes ini banyak digunakan untuk pengujian tambahan pada populasi.

Anda dapat dites untuk infeksi HIV di poliklinik manapun, Rumah Sakit Daerah Pusat atau di pusat-pusat AIDS khusus. Di wilayah Rusia, mereka disimpan secara rahasia, atau tanpa nama. Setiap pasien dapat mengharapkan untuk menerima nasihat medis atau psikologis sebelum atau setelah analisis. Anda harus membayar untuk tes HIV hanya di institusi medis komersial, dan di klinik umum dan rumah sakit tes tersebut dilakukan secara gratis.

Untuk informasi tentang bagaimana Anda bisa mendapatkan infeksi HIV dan mitos apa yang ada tentang kemungkinan terinfeksi, baca

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA - English) memasuki kehidupan kedokteran praktis di tempat lain pada tahun 60-an abad terakhir. Tugas awalnya adalah penelitian histologis untuk tujuan ilmiah, yang bermuara pada pencarian dan identifikasi struktur antigenik sel-sel organisme hidup.

Metode ELISA didasarkan pada interaksi antigen spesifik (AT) dan antigen terkait (AG) dengan pembentukan kompleks antigen-antibodi, yang dideteksi menggunakan enzim. Fakta ini membawa para ilmuwan pada gagasan bahwa metode ini dapat digunakan untuk tujuan diagnostik untuk mengidentifikasi imunoglobulin spesifik dari berbagai kelas yang terlibat dalam respon imun terhadap infeksi tertentu. Dan itu adalah terobosan dalam diagnostik laboratorium klinis!

Metode ini mulai digunakan secara aktif hanya pada awal 80-an, dan kemudian terutama di lembaga-lembaga khusus. Pusat dan stasiun transfusi darah, penyakit menular dan rumah sakit venereologi disuplai dengan penganalisis enzim immunoassay pertama, karena AIDS yang mengerikan, lahir di benua Afrika, muncul di cakrawala bersama kami dan segera bergabung dengan infeksi "lama", diperlukan tindakan segera untuk mendiagnosis dan mencari obat terapeutik yang mempengaruhi dirinya.

Lingkup metode ELISA

Kemungkinan enzim immunoassay benar-benar luas. Sekarang sulit untuk membayangkan bagaimana seseorang dapat melakukannya tanpa studi semacam itu, yang digunakan secara harfiah di semua cabang kedokteran. Tampaknya ELISA dapat dilakukan dalam onkologi? Ternyata bisa. Dan banyak. Kemampuan analisis untuk menemukan ciri-ciri penanda dari jenis neoplasma ganas tertentu mendasari deteksi dini suatu tumor, ketika tumor tersebut belum terdeteksi dengan metode lain karena ukurannya yang kecil.

Diagnostik laboratorium klinis modern (CDL), selain penanda tumor, memiliki gudang panel yang signifikan untuk ELISA dan menggunakannya untuk mendiagnosis berbagai kondisi patologis (proses infeksi, gangguan hormonal) dan memantau obat-obatan farmasi untuk mengidentifikasi efeknya pada pasien. tubuh dan, omong-omong, tidak hanya manusia. Saat ini, enzim immunoassay banyak digunakan dalam layanan veteriner, karena "saudara kita yang lebih kecil" juga rentan terhadap banyak penyakit, yang terkadang mereka sangat menderita.

Dengan demikian, ELISA, karena sensitivitas dan spesifisitasnya, dapat menentukan dari sampel darah yang diambil dari vena:

• Status hormonal (hormon tiroid dan adrenal, hormon seks);
• Adanya infeksi virus dan bakteri (HIV, B dan C, klamidia, sifilis, dan, dan, serta banyak penyakit lain yang disebabkan oleh mikroorganisme patogen);
• Jejak aktivitas vital mikroorganisme yang memulai proses infeksi, yang berakhir dengan sukses dan pindah ke tahap pembentukan respons imun terhadap patogen ini. Jejak seperti itu, yaitu antibodi, dalam banyak kasus tetap beredar dalam darah seumur hidup, yang melindungi seseorang dari infeksi ulang.

Apa inti dari JIKA?

Metode enzim immunoassay memungkinkan untuk menentukan tidak hanya keberadaan patogen itu sendiri (analisis kualitatif), tetapi juga kandungan kuantitatifnya dalam serum darah pasien.

Dosis virus atau bakteri secara signifikan mempengaruhi jalannya proses infeksi dan hasilnya, sehingga analisis kuantitatif memainkan peran penting dalam diagnosis dan pengobatan penyakit dalam berbagai bentuk dan tahapan.

Namun, mengetahui uji imunosorben terkait-enzim sebagai metode ELISA, kami bahkan tidak berpikir tentang bagaimana cara itu berhasil mencakup begitu banyak mikroorganisme yang menghuni planet kita, banyak di antaranya menimbulkan ancaman langsung terhadap kesehatan dan kehidupan manusia dan hewan. Faktanya adalah bahwa ELISA memiliki banyak pilihan (non-kompetitif dan kompetitif - langsung dan tidak langsung), yang masing-masing memecahkan masalahnya sendiri dan, dengan demikian, memungkinkan pencarian yang ditargetkan.

Untuk mendeteksi imunoglobulin dari satu atau kelas lain, panel polistiren tradisional (tablet) 96-sumur digunakan, di dalam sumur di mana protein rekombinan teradsorpsi terkonsentrasi dalam fase padat. Antibodi atau antigen yang masuk ke dalam sumur dengan serum darah menemukan objek "akrab" dan membentuk kompleks dengannya (AG - AT), yang, difiksasi oleh enzim konjugasi, akan memanifestasikan dirinya sebagai perubahan warna sumur. saat membaca hasilnya.

Immunoassay enzim dilakukan pada sistem pengujian dengan kekhususan tertentu, dibuat di laboratorium khusus dan dilengkapi dengan semua komponen reaksi yang diperlukan. Studi dapat dilakukan dengan menggunakan mesin cuci ("pencuci") dan membaca spektrofotometer, di mana sebagian besar tenaga kerja manual terlibat. Pada mesin otomatis penuh, yang membebaskan asisten laboratorium dari penanaman monoton, mencuci dan tugas rutin lainnya, tentu saja, lebih cepat dan lebih nyaman untuk bekerja, tetapi tidak semua laboratorium mampu membeli kemewahan seperti itu dan terus bekerja dengan cara lama. - pada perangkat semi-otomatis.

Interpretasi hasil ELISA berada dalam kompetensi dokter diagnostik laboratorium, sementara sifat yang melekat pada hampir semua reaksi imunokimia untuk memberikan jawaban positif palsu atau negatif palsu harus diperhitungkan.

Video: immunoassay enzim modern

Hasil ELISA pada contoh sifilis

ELISA cocok untuk mendeteksi semua bentuk, dan, di samping itu, digunakan dalam studi skrining. Untuk analisis, darah vena pasien yang diambil saat perut kosong digunakan. Dalam pekerjaan, pelat dengan spesifisitas tertentu (AT kelas A, M, G) atau antibodi total digunakan.

Mengingat antibodi pada sifilis diproduksi dalam urutan tertentu, ELISA dapat dengan mudah menjawab pertanyaan kapan infeksi terjadi dan pada tahap apa prosesnya, dan penguraian hasil yang diperoleh dapat disajikan dalam bentuk berikut:

• IgM menunjukkan durasi proses infeksi (mungkin muncul selama eksaserbasi penyakit inflamasi kronis);
• IgA menyatakan bahwa infeksi terjadi lebih dari sebulan yang lalu;
• IgG menunjukkan bahwa infeksi sedang berjalan atau pengobatan baru-baru ini, yang mudah ditemukan saat mengumpulkan anamnesis.

Saat pengujian sifilis, sumur negatif (dan kontrol negatif) akan tetap tidak berwarna, sedangkan positif (seperti kontrol positif) akan menunjukkan warna kuning cerah karena perubahan warna kromogen yang ditambahkan selama pengujian. Namun, intensitas warna tidak selalu sesuai dengan kontrol, yaitu mungkin sedikit lebih pucat atau agak kekuningan. Ini adalah hasil yang meragukan, yang, sebagai suatu peraturan, tunduk pada pemeriksaan ulang dengan pertimbangan wajib indikator kuantitatif yang diperoleh pada spektrofotometer, tetapi secara umum, warnanya berbanding lurus dengan jumlah kompleks imun (antigen dan antibodi terkait satu sama lain).

Enzim immunoassays yang paling menarik - ELISA untuk HIV

Analisis tentang, mungkin lebih dari yang lain, menarik bagi sebagian besar populasi, karena belum mungkin untuk mengatakan dengan pasti bahwa banyak masalah sosial (prostitusi, kecanduan narkoba, dll.) telah hilang. Sayangnya, HIV tidak hanya mempengaruhi bagian-bagian masyarakat manusia ini, Anda dapat terinfeksi dalam berbagai keadaan yang tidak terkait dengan pergaulan bebas atau penggunaan narkoba. Tetapi jika ada kebutuhan untuk tes HIV, maka Anda tidak perlu takut bahwa semua orang di sekitar akan mengetahui tentang mengunjungi laboratorium semacam itu. Sekarang orang yang terinfeksi HIV dilindungi oleh hukum, dan mereka yang memiliki keraguan dapat beralih ke kantor anonim di mana mereka dapat memecahkan masalah tanpa takut publisitas dan kecaman.

Enzim immunoassay yang digunakan untuk mendiagnosis infeksi HIV adalah salah satu studi standar utama, yang, bagaimanapun, memerlukan kondisi khusus, karena topiknya sangat sensitif.

Masuk akal untuk melakukan ELISA untuk HIV setelah kontak seksual, transfusi darah, prosedur medis lain yang melibatkan infeksi, dan pada akhir masa inkubasi ("jendela seronegatif"), tetapi harus diingat bahwa periode waktu ini tidak konstan. Itu bisa berakhir dalam 14-30 hari, atau bisa bertahan hingga enam bulan, sehingga nilai rata-rata dianggap sebagai interval 45 hingga 90 hari. Darah disumbangkan untuk HIV dengan cara yang sama seperti untuk infeksi lain - dari pembuluh darah saat perut kosong. Hasilnya akan siap tergantung pada akumulasi bahan di laboratorium dan beban kerjanya (dari 2 hingga 10 hari), meskipun sebagian besar laboratorium memberikan respons pada hari yang sama atau berikutnya.

Apa yang bisa diharapkan dari hasil HIV?

ELISA untuk infeksi HIV mendeteksi antibodi terhadap dua jenis virus: HIV-1 (lebih umum di Rusia dan negara-negara Eropa dan Asia lainnya) dan HIV-2 (lebih umum di Afrika Barat).

Tugas ELISA HIV adalah mencari antibodi kelas G, yang terdeteksi pada semua sistem pengujian, tetapi pada periode berikutnya, dan antibodi kelas A dan M, yang terdeteksi pada alat uji rekombinan generasi baru, yang memungkinkan untuk mendeteksi antibodi di tahap paling awal (masa inkubasi adalah jendela seronegatif). Jawaban berikut dapat diharapkan dari ELISA:

1. Hasil positif primer: darah harus diperiksa ulang pada sistem pengujian dari jenis yang sama, tetapi, jika mungkin, dari seri yang berbeda dan oleh orang lain (asisten laboratorium);
2. Berulang (+) melibatkan pengambilan sampel darah baru dari pasien dengan studi serupa dengan analisis primer;
3. Hasil positif berikutnya tunduk pada analisis referensi, yang menggunakan alat tes yang sangat spesifik (2-3 pcs.);
4. Hasil positif pada kedua (atau tiga) sistem dikirim untuk imunoblotting (ELISA yang sama, tetapi dilakukan secara individual pada kit uji dengan spesifisitas yang sangat tinggi).

Kesimpulan tentang infeksi HIV dibuat hanya atas dasar imunoblotting. Percakapan diadakan dengan orang yang terinfeksi dalam kerahasiaan penuh. Pengungkapan rahasia medis di Rusia, serta di negara lain, dapat dikenakan hukuman pidana.

Tes untuk klamidia dan cytomegalovirus oleh enzim immunoassay juga mendapatkan popularitas tertentu, karena fakta bahwa mereka memungkinkan Anda untuk menentukan waktu infeksi, stadium penyakit dan efektivitas tindakan terapeutik.

Selama pengenalan, dimungkinkan juga untuk mengamati penampilan antibodi dari berbagai kelas. dalam fase yang berbeda dari kondisi patologis yang disebabkan oleh agen infeksi:

• IgM dapat dideteksi sedini tujuh hari setelah infeksi;
• IgA menunjukkan bahwa infeksi telah hidup dalam tubuh selama lebih dari sebulan;
• IgG mengkonfirmasi diagnosis klamidia, membantu memantau pengobatan dan menentukan efektivitasnya. Perlu dicatat bahwa antibodi kelas G tetap dan beredar di dalam tubuh terlepas dari durasi penyakit, oleh karena itu, untuk interpretasi analisis yang benar, nilai referensi (norma) harus diperhitungkan, yang, dengan cara, berbeda untuk setiap CDL: dengan mempertimbangkan merek sistem pengujian dan kekhususan reagen yang termasuk dalam set. Nilai norma dimasukkan ke dalam formulir di sebelah hasil ELISA.

Adapun, ini sedikit berbeda: antibodi kelas M muncul dalam waktu sekitar satu setengah bulan, yaitu, hasil positif (IgM +) menjadi fase infeksi primer atau selama reaktivasi infeksi laten dan tetap demikian dari 4 bulan hingga enam bulan.

Kehadiran antibodi kelas G adalah karakteristik untuk timbulnya infeksi akut primer atau reinfeksi. Analisis menyatakan bahwa virus ada, tetapi tidak memberikan informasi tentang tahap proses infeksi. Sementara itu, penentuan norma titer IgG juga menyebabkan kesulitan, karena sepenuhnya tergantung pada status kekebalan orang tertentu, yang, bagaimanapun, ditentukan oleh deteksi imunoglobulin kelas G. Mengingat perilaku antibodi ini, ketika mendiagnosis CMVI, menjadi diperlukan untuk menilai kemampuan antibodi kelas G untuk berinteraksi dengan CMV, untuk “menetralisirnya” nanti (AT aviditas). Pada tahap awal penyakit, IgG mengikat sangat buruk pada antigen virus (aviditas rendah) dan baru kemudian mulai menunjukkan aktivitas, oleh karena itu, kita dapat berbicara tentang peningkatan aviditas antibodi.

Kita dapat berbicara tentang keuntungan enzim immunoassay untuk waktu yang lama, karena metode ini telah berhasil memecahkan banyak masalah diagnostik hanya dengan menggunakan darah vena. Tidak perlu menunggu lama, khawatir dan kesulitan dalam mengambil bahan untuk penelitian. Selain itu, sistem pengujian untuk ELISA terus meningkat dan hari ketika pengujian akan memberikan hasil yang 100% reliabel tidak lama lagi.

Video: film pendidikan Universitas Kedokteran Negeri Moskow. Sechenov tentang dasar-dasar ELISA

Pemilik paten RU 2283497:

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang bioteknologi dan kedokteran. Sistem uji immunoassay enzim untuk mengidentifikasi spektrum antibodi terhadap human immunodeficiency virus (HIV) tipe pertama dan kedua, tipe pertama dari grup O dan deteksi antigen terhadap human immunodeficiency virus tipe pertama p24 termasuk berbasis imunosorben pada antigen human immunodeficiency virus yang mewakili gp41 (env HIV-1 dan HIV-2 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antibodi terhadap antigen HIV 1 p24 , dan reagen pendeteksi, sedangkan antigen HIV dan antibodi HIV di atas diserap dalam lubang pelat yang berbeda untuk pemeriksaan enzim, dan pelat polistiren yang dapat dilipat atau tidak dapat dilipat digunakan untuk penyerapan. Invensi ini memberikan peningkatan sensitivitas, penyederhanaan, mengesampingkan subjektivitas evaluasi hasil. 1 z.p. f-ly, 10 tab., 1 sakit.

Penemuan tersebut berkaitan dengan bidang bioteknologi dan kedokteran. Penggunaan: deteksi yang berbeda dari semua kelas antibodi spesifik terhadap protein human immunodeficiency virus 1 dan 2, HIV 1 kelompok O dan HIV 1 p24 antigen.

Esensi: memperoleh sistem uji immunoassay enzim untuk mengidentifikasi spektrum antibodi dari semua kelas untuk protein individu dan HIV 1 dan 2, HIV 1 kelompok O dan HIV 1 p24 antigen dalam serum darah (plasma), imunoglobulin dan produk darah untuk mengidentifikasi spektrum antibodi terhadap HIV 1 dan 2, HIV 1 kelompok O, deteksi antigen HIV 1 p24 dan konfirmasi hasil skrining positif atau tidak pasti untuk antibodi terhadap HIV 1 dan 2, HIV 1 kelompok O dan HIV 1 antigen p24.

DESKRIPSI INVENSI

Diagnosis laboratorium infeksi HIV didasarkan pada tiga bidang: a) indikasi HIV dan komponennya; b) deteksi antibodi terhadap HIV; c) penentuan perubahan dalam sistem kekebalan tubuh. Di antara metode diagnostik laboratorium yang ada, metode serologis adalah yang paling umum - deteksi antibodi terhadap antigen virus.

Untuk mendeteksi antibodi pada infeksi HIV, biasanya digunakan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) dan immunoblotting (IB). ELISA didasarkan pada imobilisasi antigen virus pada pelat, yang mengikat antibodi pasien, dan kompleks antigen-antibodi dideteksi menggunakan antibodi monoklonal tikus terkonjugasi peroksidase lobak terhadap imunoglobulin manusia G dan M. Metode ini cukup spesifik dan sensitif dan memungkinkan untuk mendeteksi antibodi spesifik virus pada 95% pasien. Sisanya 5% dari kasus terjadi pada tahap awal infeksi, ketika antibodi dalam serum darah masih sedikit, atau pada fase terminal penyakit, ketika tubuh tidak lagi dapat mensintesis antibodi karena penurunan tajam jumlah antibodi. sistem kekebalan tubuh. Hasil ELISA positif palsu juga dimungkinkan, terutama pada pasien dengan penyakit autoimun dan onkologis, serta pada infeksi yang disebabkan oleh virus Eshptein-Barr. Dalam hal ini, terjadi reaksi silang antibodi terhadap faktor rheumatoid, virus Epstein-Barr atau terhadap determinan antigenik yang serupa dengan protein kompleks histokompatibilitas utama kelas 1 dan 2 (HLA-4 dan DQW3) dan memiliki kemampuan untuk berikatan dengan antigen HIV. Hasil positif palsu sering terlihat pada wanita hamil dan orang tua. Hemolisis, lipemia, kontaminasi bakteri serum juga bisa menjadi penyebab hasil yang tidak dapat diandalkan.

Berkaitan dengan itu, sejumlah metode telah diusulkan dan digunakan untuk menguji spesifisitas hasil deteksi antibodi. Dari metode ini, reaksi yang paling umum digunakan adalah "imun blot" dalam modifikasi "Western Blot". Inti dari metode ini adalah sebagai berikut: pada tahap pertama, protein HIV dipisahkan berdasarkan berat molekul menggunakan elektroforesis gel poliakrilamida. Ini diikuti oleh transfer elektroforesis dari gel poliakrilamida ke permukaan membran nitroselulosa. Antigen yang ditransfer dengan cara ini dideteksi pada membran menggunakan analisis tidak langsung: membran diinkubasi dengan bahan uji; antibodi yang terkandung mengikat antigen HIV ditransfer ke membran nitroselulosa, kemudian strip membran diinkubasi dengan konjugat; ketika kompleks antigen-antibodi terbentuk, konjugat menempel padanya, setelah dicuci dari konjugat dan inkubasi dengan substrat, pewarnaan bagian-bagian nitroselulosa itu terjadi, di mana pembentukan kompleks antigen-antibodi-konjugat terjadi. Gambar tersebut menunjukkan contoh hasil imunoblot positif, positif lemah dan negatif.

Dalam serum orang yang terinfeksi HIV-1 dan HIV-2, ditemukan antibodi terhadap protein (p) dan glikoprotein (gp) berikut: Tabel A.

Tabel B menyajikan kriteria untuk menilai hasil blotting imun yang direkomendasikan oleh WHO dan Pusat Pencegahan dan Pengendalian AIDS Rusia.

Berdasarkan kriteria WHO, serum dianggap positif di mana antibodi terhadap dua protein amplop HIV-1 terdeteksi dengan metode IB. Jika ada reaksi dengan hanya satu protein selubung (gp160, gp120, gp41), dikombinasikan dengan reaksi dengan protein lain atau tanpanya, hasilnya dianggap meragukan. Menurut Pusat Ilmiah dan Metodologi Federal Kementerian Kesehatan Federasi Rusia untuk Pencegahan dan Pengendalian AIDS, serum dapat diartikan sebagai positif bahkan dengan adanya antibodi terhadap hanya satu lapisan protein.

Deteksi antibodi terhadap antigen p24 dapat menunjukkan periode permulaan serokonversi, karena antibodi terhadap protein ini muncul lebih dulu. Reaksi positif dengan protein gag dan pol tanpa reaksi dengan protein env dapat mencerminkan tahap serokonversi awal, serta menunjukkan adanya infeksi HIV-2 atau reaksi non-spesifik.

Penggunaan imunoblotting sebagai metode ahli untuk mendiagnosis HIV memiliki sejumlah kelemahan yang signifikan:

1. Ketidakmungkinan untuk mengkonfirmasi deteksi antigen p24 HIV 1 dalam kasus menggunakan tes yang secara bersamaan menentukan antigen dan antibodi terhadap HIV, yang membuatnya tidak tepat (tidak berarti) untuk menggunakan tes skrining untuk deteksi antigen dan antibodi secara simultan to HIV (Perintah Kementerian Kesehatan Federasi Rusia No. 292 tanggal 30.07. 2001: "untuk memeriksa donor di stasiun transfusi darah, perlu menggunakan sistem pengujian yang mendeteksi antigen dan antibodi terhadap HIV").

2. Deteksi antibodi hanya dari kelas IgG. Tidak mungkin untuk sepenuhnya mengkonfirmasi hasil positif yang diperoleh dengan menggunakan tes generasi ke-3 dan ke-4 (mendeteksi antibodi IgG dan IgM).

3. Subyektivitas interpretasi skor tes, terutama dalam kasus hasil "diragukan" dan "tidak pasti" dan pada tahap awal serokonversi (pita yang terdeteksi pada membran nitroselulosa dalam kasus ini kabur, nyaris tidak terlihat dengan mata telanjang , dan sering terjadi perbedaan pendapat ketika dinilai oleh orang yang berbeda).

4. Ketidakmungkinan evaluasi kuantitatif otomatis dari hasil analisis.

5. Sensitivitas lebih rendah dibandingkan dengan ELISA.

6. Kerapuhan penyimpanan (selama penyimpanan, strip membran nitroselulosa memudar dan tidak dapat menjadi konfirmasi objektif dari deteksi atau tidak deteksi HIV dalam kasus kontroversial).

7. Kesulitan dalam menyiapkan reaksi dan penyimpanan (strip membran nitroselulosa sangat rapuh dan sering pecah).

8. Biaya kit IS yang tinggi.

Reagen yang dikenal, yang merupakan kit untuk penentuan antigen dan antibodi secara simultan terhadap patogen yang sama, termasuk HIV (DE 4236189 F1, 28.04.1994). Namun, sistem pengujian tidak diungkapkan yang memungkinkan diagnosis infeksi HIV pada berbagai tahap.

Tujuan dari invensi ini adalah untuk mendapatkan sistem pengujian yang memungkinkan untuk mengkonfirmasi hasil positif atau meragukan dari tes skrining untuk antibodi terhadap HIV 1 dan 2, HIV 1 kelompok O dan HIV 1 p24 antigen menggunakan tes untuk deteksi simultan dari antigen dan antibodi.

Solusi teknis yang diusulkan dicapai dengan sistem uji immunoassay enzim untuk mengidentifikasi spektrum antibodi terhadap human immunodeficiency virus (HIV) tipe pertama dan kedua, tipe pertama dari grup O dan deteksi antigen p24 terhadap human immunodeficiency virus. p24 tipe pertama, yang dicirikan termasuk imunosorben berbasis antigen human immunodeficiency virus, yaitu gp41 (env HIV-1 dan HIV-2 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), antibodi terhadap antigen HIV 1 p24, dan reagen pendeteksi, di mana antigen HIV dan antibodi HIV di atas diadsorbsi dalam lubang pelat yang berbeda untuk enzim immunoassay.

Selain itu, pelat polystyrene yang dapat dilipat atau tidak dapat dilipat 96 sumur untuk enzim immunoassay digunakan untuk penyerapan.

Hasil teknis yang dicapai oleh penemuan ini adalah kemungkinan konfirmasi hasil positif untuk antibodi terhadap HIV 1 dan 2, HIV 1 kelompok O dan HIV 1 p24 antigen, sensitivitas tinggi, kemungkinan interpretasi otomatis dari hasil, yang menghilangkan subjektivitas penilaian, kemudahan melakukan tes, lebih sedikit dibandingkan dengan set IS biaya yang ada.

Solusi teknis ini berbeda dari yang diketahui:

1. Gunakan sebagai pelat pembawa fase padat untuk reaksi imunologis.

2. Penggunaan simultan antibodi terhadap p 24 HIV dan satu set antigen HIV sebagai sorben.

Penemuan ini diilustrasikan dengan contoh berikut.

Prinsip aktif dari sistem pengujian yang dikembangkan "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" adalah:

Imunosorben - antigen rekombinan yang mirip dengan protein struktural HIV-1: gp41 (env HIV-1 dan HIV 1 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) dan monoklonal antibodi tikus terhadap antigen HIV 1(p24) yang diadsorpsi secara terpisah pada strip pelat polistiren yang dapat dilipat.

Untuk persiapan penggunaan imunosorben:

1. HIV-1 gp41 adalah protein yang diproduksi oleh strain E. Coli No. AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 adalah protein yang diproduksi oleh strain E. Coli No. AHIV 109.

3. HIV-1 p24 - protein yang diproduksi oleh strain E. Coli No. AHIV 105.

4. HIV-1 p31 - protein yang diproduksi oleh strain E. Coli No. AHIV 108.

5. HIV-2 p36 - protein yang diproduksi oleh strain E. Coli No. AHIV 106.

Antibodi monoklonal tikus terkonjugasi 1, terliofilisasi atau cair, terhadap antigen p24 HIV1, terkonjugasi dengan biotin.

1. Konjugat 2, terliofilisasi atau cair, campuran antigen rekombinan yang mirip dengan protein struktural HIV-1: gp41 (env HIV-1 dan HIV 1 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1 ); HIV-2: gp36 (env) terkonjugasi dengan biotin;

2. Konjugat 3, 4 - lyophilized atau cair - streptavidin berlabel dengan lobak peroksidase;

Selama studi pendahuluan, desain sistem pengujian dipilih, teknologi untuk menyiapkan komponennya dikerjakan, dan kondisi untuk melakukan uji imunoenzim dioptimalkan.

Saat menyiapkan ELISA dalam sistem pengujian "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1", 25 l konjugat-1 ditambahkan ke lubang pelat dengan antibodi teradsorpsi ke p24, dan ke dalam sumur dengan antigen teradsorpsi - 25 l konjugat-2. Skema reaksi ditunjukkan di bawah ini. Selanjutnya, 25 l sampel uji ditambahkan ke setiap sumur. Pada saat yang sama, di sumur dengan antigen, warnanya berubah dari oranye menjadi merah muda, dan di sumur dengan antibodi, dari hijau menjadi abu-abu. Campuran diinkubasi selama 45 menit pada suhu 37°C pada shaker (atau 1 jam pada suhu 37°C dalam termostat). Kemudian, tanpa pencucian, 50 l konjugat-3 ditambahkan ke lubang pelat untuk penentuan antigen p24, dan 50 l konjugat-4 ditambahkan ke lubang untuk penentuan antibodi. Setelah inkubasi selama 20 menit pada 37°C pada shaker (atau 30 menit pada 37°C dalam termostat), pelat dicuci dan dikembangkan dengan campuran substrat. Total waktu reaksi 1 jam 25 menit (atau 1 jam 50 menit). Antigen p24 yang ada dalam sampel uji berikatan dengan antibodi monoklonal pada p24, dan antibodi spesifik membentuk kompleks dengan antigen rekombinan pada pelat. Kompleks imun yang dihasilkan anti-p24 dengan p24 dideteksi dengan konjugat anti-p24-biotin, kemudian dengan streptavidin-peroksidase, dan kompleks imun Ag-HIV dengan At-HIV dideteksi dengan konjugat Ag-biotin, kemudian dengan streptavidin-peroksidase .

Skema pengaturan reaksi.

Perhitungan hasil dilakukan secara spektrofotometri pada dua panjang gelombang: 450 /620-680 nm dengan instrumen disetel ke "udara". Mari kita memperhitungkan hasil pada satu panjang gelombang 450 nm.

Hasil analisis diperhitungkan jika nilai rata-rata kerapatan optik (OD) di sumur dengan K- tidak lebih dari 0,2, di sumur dengan K+ - tidak kurang dari 1,0. kritik OP. dihitung dengan rumus:

kritik OP. gp41 = lih. nilai OP K-(gp41)+0.15

kritik OP. gp120 = lih. nilai OP K-(gp120)+0,15

kritik OP. hal 24 = lih. nilai OP K-(р24)+0,15

kritik OP. hal.31 = lih. nilai OP K-(р31)+0,15

kritik OP. gp36 = lih. nilai OP K-(gp36)+0.15

kritik OP. Ag p24 = lih. nilai OD ke- (Ag p24)+0,04

di mana 0,15 dan 0,04 adalah koefisien yang ditetapkan dengan metode pemrosesan statistik di pabrikan. Dalam proses pengembangan sistem pengujian, berikut ini digunakan:

1. Sampel serum darah dari donor sehat (n=610).

2. Sampel serum darah pasien dengan berbagai penyakit infeksi yang tidak berhubungan dengan HIV (ISPA, pneumonia, tonsilitis, infeksi herpes dan cytomegalovirus, sifilis, klamidia, virus hepatitis A, B dan C (n=224)).

3. Sampel serum darah pasien dengan berbagai penyakit tidak menular - cedera, penyakit pada sistem kardiovaskular, onkologi (n=35).

4. Sampel serum darah ibu hamil (n=40).

5. Sampel serum darah, seropositif pada ELISA dan dikonfirmasi pada imunoblot (n=428).

6. Sampel serum dengan hasil positif diperoleh dalam sistem uji immunoassay enzim untuk penentuan simultan antibodi HIV 1,2 dan antigen p24, dan hasil imunoblot tak tentu (n=123).

Gambar 7. Panel internal serum yang mengandung dan tidak mengandung antibodi terhadap HIV 1.2, diuji pada sistem uji ELISA dan imunoblot yang didaftarkan oleh Kementerian Kesehatan Federasi Rusia (n=21).

8. Standar "HIV 1 ANTIGEN STANDAR", "BIO RAD", Prancis, cat. 72217, yang merupakan antigen yang diperoleh dari lisat virus.

9. Standar internal perusahaan. Sampel yang mengandung antigen p 24 pada konsentrasi 200 pg/ml, diperoleh dari lisat virus dan dititrasi menurut perusahaan "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" "BIO RAD", France, cat. 72217.

10. Panel standar serum yang mengandung antibodi terhadap human immunodeficiency virus tipe pertama (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, Medico-Biological Union, Novosibirsk.

11. Panel standar serum yang mengandung antibodi terhadap human immunodeficiency virus tipe kedua (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, Medico-Biological Union, Novosibirsk.

12. Panel standar serum yang tidak mengandung antibodi terhadap human immunodeficiency virus tipe pertama dan kedua (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, Medico-Biological Union, Novosibirsk.

Evaluasi sensitivitas sistem pengujian untuk mendeteksi antigen p24 dilakukan dengan menggunakan Standar "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Standar Internal perusahaan. Menggunakan Standar Internal, 4 pengenceran 2 kali lipat berturut-turut dari 40 pg/mL menjadi 5 pg/mL disiapkan dengan plasma donor normal yang bebas antibodi terhadap HIV 1, 2 sebagai pengencer. Jumlah terkecil antigen terdeteksi diambil sebagai kriteria sensitivitas. Data yang diperoleh disajikan pada tabel 1.

Untuk menilai sensitivitas sistem uji untuk mendeteksi antibodi spesifik, panel standar sampel yang mengandung antibodi terhadap virus human immunodeficiency (HIV 1, 2) digunakan (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-28-216- 02P (HIV 2) hal.003).

Data yang diperoleh disajikan dalam tabel 3, 4.

Efisiensi diagnostik sistem pengujian "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" dibandingkan dengan sistem pengujian "Jenscrin-HIV-Ag/Am" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1 /2" (Diaprof-Med), "Vironostics of HIV Uniform II Ag/Am" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1.2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1.2 K" (Amercard) , " HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Untuk tujuan ini, sampel serum dari panel dalam diuji di semua tes yang ditunjukkan. Hasil yang disajikan pada Tabel 5 menunjukkan efisiensi diagnostik yang tinggi dari "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1".

Studi sensitivitas dari sistem tes "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" juga dilakukan dengan serum darah pasien yang dikonfirmasi dalam imunoblot sebagai HIV positif. Sebanyak 428 sampel serum tersebut diuji. Beberapa pilihan untuk mendeteksi antibodi terhadap berbagai protein HIV dan antigen p24 telah diperoleh. Hasilnya disajikan pada tabel 6.

Saat menguji sampel positif HIV 1, 3% serum menunjukkan reaksi positif dengan gp36 (env HIV 2). MP/OPcrit dalam sampel ini tidak melebihi 2.0. Data kami tentang reaktivitas silang protein selubung luar HIV 1 (gp41) dan HIV 2 (gp36) konsisten dengan data literatur.

Interpretasi hasil

Analisis pengujian serum HIV-positif dan sampel dari panel standar dan internal dalam "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" memungkinkan untuk mengembangkan kriteria untuk menginterpretasikan hasil tes ini. Kriteria yang direkomendasikan ditunjukkan pada Tabel 7.

Berdasarkan kriteria ini, semua sampel serum HIV positif (n=428) diidentifikasi positif pada "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1". Dari 16 sampel panel standar yang mengandung antibodi terhadap HIV 1, 14 ditentukan sebagai positif dan 2 sebagai tidak tentu. Semua 8 sampel dari panel standar yang mengandung antibodi terhadap HIV 2 dinyatakan positif. Dari 10 sampel dari panel dalam yang mengandung antibodi terhadap HIV 1, 7 diidentifikasi sebagai positif dan 3 tidak dapat ditentukan.

Studi sensitivitas sistem pengujian "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" juga dilakukan dengan serum darah pasien dengan hasil positif dalam sistem pengujian enzim immunoassay yang secara bersamaan mendeteksi antibodi dan antigen p24 , dan tak tentu dalam imunoblot . Sebanyak 123 sampel tersebut diuji. Data tersebut disajikan pada tabel 8.

Saat menguji serum dengan hasil imunoblot tak tentu (n=123) pada "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1", 72 sampel (58,5%) menunjukkan hasil positif. Dari jumlah tersebut, 26 serum (21,1%) positif hanya untuk p24, 20 (16,3%) - hanya untuk antibodi, 16 (13%) - untuk p24 dengan antibodi terhadap salah satu protein, 10 (8,1%) - pada p24 dengan antibodi terhadap dua atau lebih protein. Jadi, pengujian antibodi saja (tidak ada deteksi p24) akan menghasilkan 30 sampel (24,4%) menjadi positif. Deteksi antigen p24 dalam tes memungkinkan untuk menentukan sebagai positif tambahan 42 sampel (34,1%).

Untuk menilai spesifisitas sistem pengujian, panel standar serum yang tidak mengandung antibodi terhadap HIV 1, 2 (n=20) digunakan; sampel serum darah dari donor sehat (n=610), sampel serum darah dari pasien dengan berbagai penyakit menular (n=224) yang tidak terkait dengan HIV; sampel serum darah pasien dengan berbagai penyakit tidak menular - cedera, penyakit pada sistem kardiovaskular, onkologi (n=35); sampel serum darah ibu hamil (n=40). Sebanyak 929 sampel yang diuji. Satu sampel dari serum darah donor sehat menunjukkan hasil positif palsu - antibodi terhadap gp41 dan p24 terdeteksi. 7 sampel serum darah dari pendonor sehat dan 2 sampel serum darah dari pasien penyakit menular yang tidak berhubungan dengan HIV menunjukkan hasil positif palsu untuk p24.

Untuk menilai spesifisitas sistem uji, panel standar sampel negatif digunakan (OSO 42-28-214-94-02p, hal. 009). Spesifisitasnya adalah 100%.

Dengan demikian, penelitian telah menunjukkan bahwa spesifisitas sistem pengujian "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" adalah 99% dalam penelitian sampel serum darah dari donor normal dan pasien dengan berbagai infeksi dan penyakit somatik.

Data yang diperoleh menunjukkan efisiensi diagnostik yang tinggi dari sistem pengujian yang dikembangkan "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1". Sistem pengujian dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap protein individu HIV tipe 1 dan 2 dan antigen HIV1 p24 untuk mengkonfirmasi hasil skrining positif dengan sistem pengujian yang mendeteksi antibodi, atau sistem pengujian yang secara bersamaan mendeteksi antibodi dan antigen HIV1 p24. Sistem tes dapat digunakan sebagai tes imunoblot alternatif untuk mengkonfirmasi hasil positif, serta untuk mempelajari dinamika antibodi terhadap HIV dan antigen p24 pada berbagai tahap infeksi.

MANFAAT TES

1. Format pelat imunoassay enzim konfirmasi

2. Tes konfirmasi yang menggabungkan spektrum antibodi HIV 1, 2 dan antigen HIV 1 p24

3. Deteksi antibodi dari semua kelas Ig

4. Sensitivitas untuk mendeteksi p24 tidak kurang dari 5 pg/ml

5. Mengurangi hasil yang tidak pasti dibandingkan dengan imunoblot

6. Waktu analisis - 1 jam 25 menit (imunoblot - dari 3 hingga 20 jam)

7. Penilaian visual pengenalan semua komponen dan sampel.

1. Sistem uji ELISA untuk mengidentifikasi spektrum antibodi terhadap human immunodeficiency virus (HIV) tipe pertama dan kedua, tipe pertama grup O dan deteksi antigen p24 terhadap human immunodeficiency virus tipe pertama p24, dicirikan bahwa itu termasuk imunosorben berdasarkan antigen virus imunodefisiensi gp41 (env HIV-1 dan HIV-2 grup O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antibodi terhadap antigen HIV 1 p24, dan reagen pendeteksi, sedangkan antigen HIV dan antibodi HIV di atas diadsorbsi dalam sumur pelat yang berbeda untuk enzim immunoassay.

2. Sistem uji ELISA menurut klaim 1, dicirikan bahwa pelat polistiren yang dapat dilipat atau tidak dapat dilipat 96 sumur untuk enzim immunoassay digunakan untuk penyerapan.