Oroszországban jelenleg a HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztizálásának standard eljárása az HIV elleni antitestek kimutatásaenzim immunoassay segítségével majd specifikusságuk megerősítése a reakcióban immunblot.

A HIV-ellenes antitestek a fertőzöttek 90-95%-ánál a fertőzést követő 3 hónapon belül, 5-9%-ban a fertőzés pillanatától számított 6 hónapon belül, 0,5-1%-ánál pedig később jelennek meg. Az antitestek kimutatásának legkorábbi időpontja a fertőzés pillanatától számított 2 hét.

A HIV elleni antitestek kimutatása 2 szakaszból áll. Az első szakaszban a HIV antigének elleni antitestek teljes spektrumát különféle tesztekkel mutatják ki: enzim immunoassay, agglutinációs, kombinált, fésűs, membránszűrős vagy membrán-diffúz tesztekkel. A második szakaszban immunoblot a vírus egyes fehérjéi elleni antitestek meghatározására szolgál. A munkában csak olyan tesztrendszerek használata megengedett, amelyeknek az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériuma engedélye van. A diagnosztikai eljárásokat csak a megfelelő tesztek használatára vonatkozó jóváhagyott utasítások szerint szabad elvégezni.

Vérvétel a cubitalis vénából tiszta, száraz kémcsőbe készítjük 3-5 ml-es mennyiségben. Köldökzsinórvért lehet venni újszülöttektől. A kapott anyagot (teljes vért) nem javasolt 12 óránál tovább szobahőmérsékleten és 1 napnál tovább hűtőszekrényben 4-8°C-on tárolni. A közelgő hemolízis befolyásolhatja az elemzés eredményeit. A szérumot centrifugálással választják el, vagy a kémcső falán Pasteur-pipettával vagy üvegrúddal vért nyomnak. A leválasztott szérum tiszta (lehetőleg steril) kémcsőbe, fiolába vagy műanyag edénybe kerül, és ebben a formában akár 7 napig is tárolható 4-8°C-on. Munkavégzés közben be kell tartania az 1990. július 5-én kelt, 42-28 / 38-90 számú „Útmutató az AIDS diagnosztikai laboratóriumokban a járványellenes rendszerhez” című dokumentumban megadott biztonsági szabályokat.

A HIV elleni teljes antitestek meghatározása.

Az első pozitív eredmény kézhezvétele után az analízist még kétszer elvégzik (ugyanazon szérummal és ugyanabban a tesztrendszerben). Ha legalább egy pozitív eredmény született (három ELISA-tesztből kettő pozitív), a szérumot elküldik a referencialaboratóriumba.

A referencialaboratóriumban az elsődleges pozitív szérumot (azaz az első tesztrendszerben két pozitív eredményt adó) ELISA-val újra megvizsgálják a megerősítésre kiválasztott második (egyéb) tesztrendszerben.

A második vizsgálati rendszerben végzett elemzés pozitív eredményének kézhezvétele után a szérumot meg kell vizsgálni az IS-ben.

Ha a második tesztrendszerben negatív eredmény születik, a szérumot a harmadik tesztrendszerben újra megvizsgálják.

Ha a második és a harmadik tesztrendszerben is negatív eredményt adnak, akkor a HIV elleni antitestek hiányára vonatkozó következtetést adnak ki.

Ha a harmadik tesztrendszerben pozitív eredményt kapunk, a szérumot immunblot-vizsgálatra is elküldjük.

immunblot.

A módszer elve a vírus bizonyos fehérjéi elleni antitestek kimutatása nitrocellulóz membránon rögzítve. A HIV-1 burokfehérjéit (env) általában glikoproteineknek ("gp" vagy "gp") nevezik, molekulatömegük kilodaltonban (cd) van kifejezve: 160 kd, 120 kd, 41 kd. A HIV-2-ben a glikoproteinek tömege 140 kd, 105 kd, 36 kd. A magfehérjék (gag) (amelyeket általában proteineknek neveznek - "p" vagy "r") a HIV-1-ben 55 kd, 24 kd, 17 kd, a HIV-2 molekulatömege pedig -56 kd, 26 kd. , 18 kd. A HIV-1 (pol) enzimek molekulatömege 66 kd, 51 kd, 31 kd, HIV-2-68 kd.

Az immunoblot eredmények pozitívnak, határozatlannak és negatívnak értelmezhetők.

pozitív(pozitív) azok a minták, amelyekben 2 vagy 3 HIV-glikoprotein elleni antitestek kimutathatók.

negatív(negatív) olyan szérumok, amelyek nem mutatnak ki antitesteket a HIV egyik antigénjével (fehérjéjével) szemben sem.

Azok a minták, amelyek egy HIV-glikoprotein és/vagy bármely HIV-fehérje ellen antitesteket mutatnak ki kétes(meghatározatlan vagy értelmezhetetlen).

Ha a HIV-1 antigénekkel végzett immunblot-vizsgálat során meghatározatlan eredményt kapunk a magfehérjék elleni antitestekkel (gag), akkor HIV-2 antigénekkel végzett vizsgálatot kell végezni.

Az immunblot pozitív eredményének kézhezvétele után következtetést vonunk le a HIV elleni antitestek jelenlétéről a vizsgálati anyagban.

A negatív teszteredmény kézhezvétele után az IB azt a következtetést vonja le, hogy nincs HIV-ellenes antitest.

Határozatlan eredmény (ha a p24 antigént nem észlelték), 3 hónap elteltével ismételt HIV-ellenanyag-tesztet kell végezni.

és miközben további 3 hónap elteltével is fenntartja a határozatlan eredményeket. Ha a p24 antigént kimutatták, az első határozatlan eredmény megérkezése után 2 héttel második vizsgálatot kell végezni.

Ha az első vizsgálat után 6 hónappal ismét határozatlan eredményt kapunk, és a betegnek nincsenek fertőzési kockázati tényezői és a HIV-fertőzés klinikai tünetei, az eredmény hamis pozitívnak minősül. (Epidemiológiai és klinikai indikációk esetén a szerológiai vizsgálatokat az előírás szerint meg kell ismételni).

Immunblot rekombináns vírusspecifikus polipeptidekkel A "HIV blot" abban különbözik, hogy nem magukat a vírusfehérjéket használja, hanem rekombináns polipeptideket - a HIV antigének analógjait ("Env1", "Gag1", "Poll", "Env2"). "). A rekombináns Env1 polipeptid közvetlenül detektálja a HIV-1 gp120 és gp41 elleni antitesteket, a Gag1 polipeptid a p17 és p24 antigénekkel, a Po11 polipeptid a p51 antigénnel, az Env2 polipeptid pedig a HIV-2 gp110 és gp38 antigénekkel szemben. A szérum akkor tekinthető pozitívnak, ha az Env1-gyel vagy Env2-vel vagy mindkettővel reagál (HIV 1. és 2. típusú kettős fertőzés). A csak Poll és Gag reakciója határozatlan eredménynek számít, ebben az esetben a követést a HIV-lizátumot használó klasszikus immunoblot határozatlan eredményéhez hasonlóan végezzük.

A HIV-fertőzött anyától született gyermekek HIV-fertőzésének szerológiai diagnosztikájának sajátossága, hogy mind a fertőzött, mind a nem fertőzött gyermekek életük első 6-12 hónapjában rendelkeznek anyai eredetű HIV-ellenes antitestekkel, amelyek aztán eltűnhetnek. A HIV-fertőzés gyermekben való jelenlétét jelző kritérium a HIV-ellenes antitestek kimutatása 18 hónapos vagy annál idősebb korban. Egy HIV-fertőzött anyától született 18 hónapos gyermekben a HIV elleni antitestek hiánya a HIV-fertőzés elleni kritérium.

Leírás

Meghatározás módja Immunblot.

Vizsgált anyag Szérum

Házi látogatás lehetséges

Az antinukleáris antitestek olyan autoantitestek családját jelentik, amelyek ribonukleinsavakhoz és a kapcsolódó fehérjékhez kötődnek. A diffúz kötőszöveti betegségekben szenvedő betegek több mint 90%-ánál fordulnak elő, és gyakran megfigyelhetők autoimmun májbetegségekben és számos más betegségben is. A mai napig ennek az autoantitest-családnak mintegy 200 fajtáját jellemezték, de nem mindegyik használható a klinikai gyakorlatban.

Az antinukleáris antitestek immunblotja lehetővé teszi az antinukleáris antitestek 15 fő típusának egyidejű vizsgálatát egy tesztben, amely biztosítja a főbb szisztémás reumás betegségek differenciáldiagnózisát. Az immunblottal kimutatott autoantitestek mindegyik típusát általában jellegzetes klinikai képpel rendelkező betegeknél figyelik meg, így az autoantitestek spektruma nemcsak a betegség diagnosztizálását teszi lehetővé, hanem bizonyos klinikai megnyilvánulások kialakulásának kockázatának megállapítását is.

A szerológiai vizsgálat második szakaszában az antinukleáris antitestek immunblot-vizsgálatát célszerű alkalmazni, más tesztek pozitív eredménye mellett, amelyek antinukleáris antitestek jelenlétét jelzik az alany szérumában. Ezek a tesztek magukban foglalják az antinukleáris antitestek meghatározását (ELISA szűrés), az antinukleáris faktor (ANF) kimutatását Hep2 sejteken (), az antinukleáris antitestek és az extrahálható nukleáris antigén (ENA,) elleni antitestek kimutatását.

Az antinukleáris antitestek immunblot módszerét a szisztémás reumás betegségek diagnosztikájában magas klinikai specifitás jellemzi. De az antinukleáris antitestek specifitása még magas ANF () titerek esetén sem mindig állapítható meg, mivel számos antinukleáris antitest antigén továbbra is jellemzetlen marad. A negatív immunblot eredmény ebben az esetben nem zárja ki a szisztémás reumás betegségek diagnózisát. Számos antinukleáris antitest kimutatható immunblot segítségével - myositis-specifikus autoantitestek panelje () és immunblot - autoantitestek panelje sclerodermában ().

Irodalom

1. Lapin S.V. Totolyan A.A. Autoimmun betegségek immunológiai laboratóriumi diagnosztikája / "Chelovek" kiadó, Szentpétervár - 2010. 272. o.
2. Nasonov E.L., Aleksandrova E.N. A reumás betegségek laboratóriumi diagnosztikájának modern szabványai. Klinikai irányelvek / BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantitestek szervspecifikus autoimmun betegségekben: Diagnosztikai referencia/ PABST, Drezda - 2011. 300 p.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantitestek szisztémás autoimmun betegségekben: Diagnosztikai referencia/ PABST, Drezda - 2007. 300 p.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science - 2006. 862 p.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimmune Diseases / Humana Press - 2008. 598 p.
7. A reagenskészlet használati útmutatója.

Kiképzés

Az utolsó étkezés után 4 órát célszerű kibírni, nincs kötelező előírás.

Előjegyzési jelzések

A vizsgálat a következő állapotok diagnosztizálására és differenciáldiagnózisára szolgál:

• szisztémás lupus erythematosus;
• szubakut bőr lupus és más típusú bőr lupus;
• vegyes kötőszöveti betegség;
• Sjögren-szindróma és kapcsolódó betegségek;
• diffúz és lokalizált szkleroderma, CREST szindróma;
• gyulladásos myopathiák (polimiozitisz és dermatomiozitisz);
• fiatalkori krónikus ízületi gyulladás;
• autoimmun hepatitis;
• primer biliáris cirrhosis és szklerotizáló cholangitis;
• ennek a tesztnek a használata akkor javasolt, ha az antinukleáris faktor, antinukleáris antitestek, extrahálható nukleáris antigén elleni antitestek, DNS-ellenes antitestek, nukleoszómák elleni antitestek és antifoszfolipid antitestek magas titereit mutatják ki.

Az eredmények értelmezése

A vizsgálati eredmények értelmezése információkat tartalmaz a kezelőorvos számára, és nem minősül diagnózisnak. Az ebben a részben található információkat nem szabad öndiagnózisra vagy önkezelésre felhasználni. A pontos diagnózist az orvos állítja fel, felhasználva mind ennek a vizsgálatnak az eredményeit, mind a szükséges információkat más forrásokból: anamnézis, egyéb vizsgálatok eredményei stb.

Mértékegységek: kvalitatív teszt, az eredmény "detektált" vagy "nem található" formában jelenik meg.

Ha bármely típusú antitest jelenlétét jellemző sávot detektálunk, a sáv színintenzitását az egyes azonosított antitesttípusok pluszjai ("keresztezései") is leírják. A pozitivitás mértékének növekedése közvetve tükrözi az autoantitestek tartalmát és affinitását.

Referenciaértékek: Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNS, hiszton, nukleoszóma elleni antitestek , Rib P, AMA-M2, Jo-1 nem található.

Az autoantitestek meghatározásának eredményét minden megfelelő antigén esetében „keresztben” mutatjuk be. A szeropozitivitás mértékének növekedése közvetve tükrözi az autoantitestek tartalmát és affinitását. Az alábbiakban felsoroljuk a szeropozitivitási pontszám opciókat:

1. Antitesteket nem találtak.
2. +/- - határvonal eredmény;
3. + - egy specifikus antigén elleni autoantitestek alacsony tartalma;
4. ++ egy specifikus antigén elleni autoantitestek átlagos tartalma;
5. +++ - egy specifikus antigén elleni autoantitestek magas tartalma.

Az antinukleáris antitestek kimutatásával kapcsolatos fő betegségek:

Antigén	Jelentése
Sm (Smith)	A szisztémás lupus erythematosus specifikus markere (az American College of Rheumatology, ACR SLE 10. kritériumában szerepel)
SS-A (Ro52)	Különféle autoimmun betegségekben, gyakrabban szisztémás lupus erythematosusban és bőrformáiban, szisztémás reumás betegségekben, rheumatoid arthritisben, autoimmun májbetegségekben stb.
SS-A (Ro60)	Szisztémás lupus erythematosus, a lupus erythematosus bőr formái, fényérzékenység szisztémás lupus erythematosusban, a veleszületett lupus erythematosus és a magzati szívbetegség magas kockázata. A fő szerológiai indikátor Sjögren-szindrómában. Gyakran az SS-A (Ro52) antigén elleni antitestekkel együtt észlelik.
SS-B	Sjögren-szindróma, szisztémás lupus erythematosus.
PCNA	Szisztémás lupus erythematosus, lupus nephritis kockázata.
Riboszómák (Ribo P)	Szisztémás lupus erythematosus, a központi idegrendszer károsodásának veszélye.
Nukleoszómák	Szisztémás lupus erythematosus, nagy a lupus glomerulonephritis kockázata.
kétszálú DNS	A szisztémás lupus erythematosus specifikus markere (az SLE ACR 10. kritériumában szerepel), a lupus nephritis magas kockázata.
snRNP/Sm	Vegyes kötőszöveti betegség, szisztémás lupus erythematosus alacsony vesekárosodás kockázatával, szkleroderma.
Hisztonok	Szisztémás lupus erythematosus, gyógyszer által kiváltott lupus, szkleroderma.
Scl-70	Szisztémás szklerózis a bőr és a belső szervek diffúz elváltozásaival.
PM-Scl	Szkleroderma polimiozitisszel.
CENP-B	CREST szindróma sclerodactyliával, telangiectasias, subcutan meszesedés, Raynaud-szindróma, nyelőcsőgyulladás.
Jo-1	Polimiozitisz antiszintetáz szindróma formájában.
AMA-M2	Primer biliaris cirrhosis, Sjögren-szindróma.

Az immunblot (immunoblot) egy rendkívül specifikus és nagyon érzékeny referenciamódszer, amely megerősíti a diagnózist olyan betegek esetében, akiknél pozitív vagy határozatlan vizsgálati eredmények születtek. RPHA vagy ELISA segítségével .

A kórokozó egyedi antigénjeivel szembeni antitestek kimutatásának ez a módszere a nitrocellulóz membránokon végzett ELISA-vizsgálaton alapul, amelyre specifikus fehérjéket alkalmaznak külön sávok formájában, amelyeket gélelektroforézissel választanak el. Ha bizonyos antigének ellen antitestek vannak, akkor a megfelelő csíkhelyen sötét vonal jelenik meg. Az immunblot egyedisége magas információtartalmában és a kapott eredmények megbízhatóságában rejlik.

Kutatási anyag emberi szérum vagy plazma. Egy csíkon végzett kutatáshoz 1,5-2 ml vér vagy 15-25 µl szérum szükséges.

A WHO ajánlása szerint a HIV-fertőzés diagnosztizálásában további szakértői módszerként az immunblot (western blot) módszert alkalmazzák, amely az ELISA eredményeit igazolja. Ezt a módszert általában a pozitív ELISA eredmény kétszeres ellenőrzésére használják, mivel érzékenyebbnek és specifikusabbnak tartják, bár összetettebb és drágább.

Az immunoblot az enzim immunoassay-t (ELISA) kombinálja a vírusfehérjék előzetes elektroforetikus szétválasztásával egy gélben, és nitrocellulóz membránra történő átvitelével. Az immunblot eljárás több szakaszból áll. Először is, az előtisztított és alkotóelemeire bontott HIV-t elektroforézisnek vetik alá, miközben a vírust alkotó összes antigént molekulatömeg alapján választják el. Ezután blottolással az antigéneket a gélből egy nitrocellulóz csíkra vagy egy nejlonszűrőre visszük át, amely immár a HIV-re jellemző, szem számára láthatatlan fehérjespektrumot tartalmaz. Ezt követően a tesztanyagot (szérum, beteg vérplazmája stb.) felvisszük a csíkra, és ha specifikus antitestek vannak a mintában, akkor azok a nekik szigorúan megfelelő antigénfehérjék csíkjaihoz kötődnek. A későbbi manipulációk (például ELISA) eredményeként ennek a kölcsönhatásnak az eredménye láthatóvá válik – láthatóvá válik. A csíkok bizonyos területein a csíkok jelenléte megerősíti a szigorúan meghatározott HIV antigének elleni antitestek jelenlétét a vizsgált szérumban.

Az immunblot vizsgálatot leggyakrabban a HIV-fertőzés diagnózisának megerősítésére használják. A WHO akkor tekinti pozitívnak a szérumot, ha bármely két HIV-burokfehérje ellen antitestet mutatnak ki immunoblottal. Ezen ajánlások szerint, ha a burokfehérjék közül csak az egyikkel (gp160, gp120, gp41) van reakció más fehérjékkel kombinációban vagy anélkül, hogy reakcióba lépne más fehérjékkel, az eredmény kétségesnek tekinthető, és egy másik vizsgálat elvégzése javasolt egy másik készlet felhasználásával. sorozatból vagy más cégtől. Ha ezt követően az eredmény kétséges marad, a vizsgálatok 3 havonta folytatódnak.

Sajátosságok

Az immunblot elemzés megbízható módszer, amely lehetővé teszi az első és második típusú HIV-antigénekkel szembeni antitestek jelenlétének meghatározását. Ha egy személy fertőzött, két héten belül megjelennek az antitestek, amelyeket jóval később lehet kimutatni. A HIV sajátossága, hogy az antitestek száma gyorsan növekszik, és a beteg vérében marad. Még ha jelen vannak is, a betegség két vagy több évig nem jelentkezik. Az ELISA módszer nem mindig határozza meg pontosan a betegség jelenlétét, ezért az enzim immunoassay pozitív eredmény esetén az eredmények megerősítése immunblot és PCR segítségével szükséges.

Előjegyzési jelzések

Mi ez az "immunblot", már kiderült, de kinek írják fel ezt a vizsgálatot? A humán immundeficiencia vírus (HIV) kimutatására szolgáló immunblot-tesztek elvégzésének oka az ELISA pozitív eredménye. A műtéten átesett betegeknél enzim-immunoassay-n kell átesni. Emellett elemzést kell készíteni a terhességet tervező nőkről, valamint mindenkiről, aki szexuálisan szokatlan. Ha az ELISA eredménye kétséges, rendelje hozzá az immunoblotot a HIV-fertőzött betegekhez.

A következő riasztó tünetek okozhatják az orvoshoz fordulást:

• éles fogyás;
• gyengeség, munkaképesség elvesztése;
• bélrendszeri rendellenesség (hasmenés), amely három hétig tart;
• a test kiszáradása;
• láz;
• duzzadt nyirokcsomók a testben;
• candidiasis, tuberkulózis, tüdőgyulladás, toxoplazmózis kialakulása, herpesz exacerbációja.

A páciensnek nem kell felkészülnie a vénás véradás előtt. 8-10 órával a vizsgálat előtt nem lehet enni. Nem ajánlott egy nappal véradás előtt alkoholos és kávéitalokat inni, nehéz fizikai gyakorlatokat végezni, izgalmat tapasztalni.

Hogyan történik a kutatás?

A páciens szempontjából az immunoblot nem különbözik minden más elemzéstől: vénás vért vesznek, megvizsgálnak, és megkapják az eredményt. De ha egy kicsit részletesebben foglalkozik a technikával, akkor ez nem túl egyszerű, de próbálja meg kitalálni.

Először egy „referencia” humán immunhiány vírust vesznek a reagensgyártó üzemben. Ezután egy speciális eljárással (elektroforézis) gél közegben a vírust a legkisebb komponensekre: fehérjékre (vírus antigének) elpusztítják. Ezután magával a blottolással (az angol nedvesítésből) a részecskéket egy speciális anyagra - nitrocellulózra vagy nejlonszűrőre - helyezik, felhasználásra kész indikátort, az úgynevezett csíkot kapnak. A csík egy olyan csík, amelyben az antigének molekulatömegüktől függően, világos sorrendben oszlanak el, vagyis egy bizonyos fehérje megfelel minden papírmilliméternek.

Amint azt Ön is tudja, ha vírusok jelen vannak az emberi vérben, akkor a szervezet elkezd antitesteket termelni a héjaik (bizonyos fehérjék) ellen, és minden vírusnak megvan a saját, egyedi antigén fehérjekészlete. Az antigénfehérjék elleni antitestek kimutatása a vérben az immunblot módszer alapja. Végül is, ha egy antitest ütközik egy antigénnel, akkor minden bizonnyal kölcsönhatásba lépnek egymással - „megtapadnak”.

Tehát az antigének a szalagcsíkon vannak, és ha megfelelő antigének vannak a vizsgálati alany vérében, akkor szükségszerűen kölcsönhatásba lépnek egymással, és ezen a helyen, a szalagcsíkon, megjelenik egy jelző - lapos jelenik meg. (mint egy terhességi teszt). Ezenkívül a csík egy adott helyén az orvos ily módon megérti, hogy van-e egy adott vírusra jellemző fehérjekészlet a vérben.

Tehát például, ha a csíkon sötétedés van a fehérje lokalizációjának helyein gp160, gp120, gp41 A HIV-t diagnosztizálják, más vírusok esetében ez egy teljesen más fehérjekészlet.

Meg kell jegyezni, hogy az immunoblot csak akkor teszi lehetővé a vírus jelenlétének pontos meghatározását, ha a vérben az antitestek készlete teljes, vagyis ha a gp160, gp120, gp41 fehérjék egyidejűleg jelen vannak, akkor ez 100%-os HIV fertőzés. De ha legalább egy hiányzik, például: gp41 hiányzik, de csak gp160, gp120 van, akkor a teszt kétségesnek minősül, és ismétlést igényel.

GYIK

Melyek az immunblot fázisai?

1. Csík előkészítése. A korábban megtisztított és alkotóelemeire bontott immunhiányos vírust (HIV) elektroforézisnek vetik alá, míg a HIV-t alkotó antigéneket molekulatömeg alapján választják el. Ezután blottolással (hasonlóan a felesleges tinta „blotteren” történő kipréseléséhez) az antigéneket egy nitrocellulózcsíkra visszük át, amely immár a HIV-re jellemző antigén sávok spektrumát tartalmazza, amely a szem számára láthatatlan.
2. Minta vizsgálat. A vizsgálati anyagot (szérum, beteg vérplazmája stb.) a nitrocellulóz csíkra visszük fel, és ha a mintában specifikus antitestek vannak, akkor azok a szigorúan megfelelő (komplementer) antigén sávokhoz kötődnek. A későbbi manipulációk eredményeként ennek az interakciónak az eredménye vizualizálódik - láthatóvá válik.
3. Az eredmény értelmezése. A sávok jelenléte a nitrocellulóz lemez bizonyos területein megerősíti a szigorúan meghatározott HIV antigének elleni antitestek jelenlétét a vizsgált szérumban.

• A sáv – pozitív vezérlés
• B sáv – Gyenge pozitív kontroll
• C sáv – negatív kontroll
• D csík – Pozitív minta (HIV-1 elleni antitesteket észleltek)

Hogyan lehet megfejteni az elemzést?

Ha az ELISA e tesztrendszer szerint az összes vagy majdnem az összes antigén antitest jelenlétét mutatta ki, ez pozitív HIV-tesztet jelez. Ha a második szerológiai enzim immunoassay után a válasz pozitív, akkor immunblotot kell végezni. Eredményeinek értelmezése helyesebb lesz. Ha az enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálat pozitív eredményt adott, a következő immunblot analízis is kimutatta a HIV jelenlétét, akkor kerül a végeredmény.

Az elemzések megfejtésekor tudnia kell, hogy a pozitív HIV-tesztet a következők határozzák meg:

• 60-65% 28 nappal a fertőzés után;
• 80% -ban - 42 nap után;
• 90% -ban - 56 nap után;
• 95%-ban - 84 nap után.

Ha a HIV-re adott válasz pozitív, az azt jelenti, hogy kimutatták a vírus elleni antitesteket. A hamis pozitív válasz elkerülése érdekében újra kell tesztelni, lehetőleg kétszer. Ha az immunhiány elleni antitesteket két tesztből kettő vagy 3 teszt sikeres teljesítésekor észlelik, akkor az eredmény pozitívnak tekintendő.

A p24 antigén már a fertőzés időpontjától számított 14 napon belül kimutatható a vérben. Az enzim immunoassay módszerrel ezt az antigént 14-56 nap között detektálják. 60 nap után már nincs a vérben. Csak amikor AIDS képződik a szervezetben, akkor ez a p24 fehérje újranövekedik a vérben. Ezért enzim immunoassay tesztrendszereket használnak a HIV kimutatására a fertőzés első napjaiban, vagy a betegség előrehaladásának meghatározására és a kezelési folyamat nyomon követésére. Az enzim immunoassay nagy analitikai érzékenysége kimutatja a p24 antigént a biológiai anyagban az első altípus HIV esetében 5-10 pg/ml koncentrációban, a második altípus HIV esetében 0,5 ng/ml vagy annál kisebb koncentrációban.

Alatt kétes az enzim immunoassay eredménye arra utal, hogy valahol tévedett a diagnózis, általában az egészségügyi dolgozók összekevertek valamit, vagy az illetőnek fertőzésre utaló jelei vannak, és az eredmény negatív, ami gyanút kelt, az érintettet ismételt vizsgálatra küldik. .

Alatt álpozitív Az eredmény alatt azt az eredményt értjük, amikor vérvizsgálatot végeztek a páciens alábbi körülményei között:

• terhesség;
• ha egy személynek hormonális egyensúlyhiánya van;
• elhúzódó immunszuppresszióval.

Hogyan lehet megfejteni az elemzést ebben az esetben? Hamis pozitív eredményt ad, ha legalább egy fehérjét észlel. Tekintettel arra, hogy a p24 antigén erősen függ az egyéni eltérésektől, ezzel a módszerrel a betegek 20-30%-át mutatják ki a fertőzés első periódusában.

Mennyire megbízható a pozitív teszteredmény?

Az ELISA néha hamis pozitív eredményeket ad (az esetek körülbelül 1% -ában), ennek oka lehet terhesség, különféle vírusfertőzések, valamint egyszerű baleset. A pozitív eredmény megszerzése után pontosabb tesztre van szükség - immunoblotra, amelynek eredményei alapján diagnózist készítenek. A pozitív ELISA után kapott pozitív immunblot eredmény 99,9%-ban megbízható – ez minden orvosi vizsgálat maximális pontossága. Ha az immunblot negatív, akkor az első teszt álpozitív volt, és valójában az embernek nincs HIV-fertőzése.

Mi a határozatlan (kétes) eredmény?

Ha az ELISA pozitív vagy negatív, akkor az immunblot lehet pozitív, negatív vagy határozatlan. Meghatározatlan immunblot eredmény, azaz. legalább egy vírusfehérje jelenléte megfigyelhető, ha a fertőzés a közelmúltban történt, és még mindig kevés a HIV elleni antitest a vérben, ebben az esetben az immunblot egy idő után pozitív lesz. Határozatlan eredmény jelenhet meg hepatitisszel járó HIV-fertőzés, egyes krónikus anyagcsere-betegségek hiányában vagy terhesség alatt is. Ebben az esetben vagy az immunblot negatív lesz, vagy megkeresik a határozatlan eredmény okát.

Mennyibe kerül az elemzés?

A HIV-re vonatkozó immunblot nem vonatkozik az olcsó kutatásokra. Átlagosan az enzim immunoassay szűrővizsgálata 500-900 rubelbe kerül. Az immunoblot egy ellenőrző vizsgálat, amelynek költsége három-ötezer rubel. A bonyolultabb módszerek sokkal drágábbak. Például a polimeráz láncreakció (PCR) elemzéséhez körülbelül 12 000 rubelt kell fizetnie.

Hol kell elvégezni az elemzést?

Hol végezhetek HIV-tesztet? ELISA, immunoblot vizsgálatokat városi magánklinikákon végeznek, az eredményeket egy napon belül adják ki. Azonnali diagnózis is lehetséges. Az állami egészségügyi intézményekben az ELISA-teszteket és az immunoblot-vizsgálatot ingyenesen végzik az Orosz Föderáció jogszabályaival összhangban. A terhes nőket, valamint a kórházi kezelésre vagy műtétre váró betegeket fertőző betegségek vizsgálatára kötelezik.

hipotenzió, tachycardia, légszomj, cianózis. A betegség súlyos eseteiben vérzés, hányás vérkeverékkel lehetséges. A máj és a lép megnagyobbodott. Megjegyzés: oliguria. A hőmérséklet állandóan magas marad 3-10 napig. A perifériás vérben - neutrofil leukocitózis a képlet balra tolásával. A pestis leírt általános megnyilvánulásai mellett a betegség egyes klinikai formáira jellemző elváltozások is kialakulnak.

A bőrforma ritka (3-5%). A fertőzés bejárati kapujának helyén folt jelenik meg, majd papula, vezikula (konfliktus), savós vérzéses tartalommal töltve, körülvéve egy beszivárgott zónával, hiperémiával és ödémával. A Fliktent erős fájdalom jellemzi. Felnyitva fekélyt képez, alján sötét varasodás. A pestises fekélyt hosszú lefolyás jellemzi, lassan gyógyul, heget képezve. Ha ezt a formát vérmérgezés bonyolítja, másodlagos pustulák és fekélyek lépnek fel. Talán egy regionális bubo (bőr-bubó forma) kialakulása.

Leggyakrabban (körülbelül 80%) a bubós forma fordul elő, és viszonylag jóindulatú lefolyás jellemzi. A betegség első napjaitól kezdve éles fájdalom jelentkezik a regionális nyirokcsomók régiójában, ami megnehezíti a mozgást, és kényszerhelyzetbe hozza a beteget. Az elsődleges bubó általában magányos, többszörös bubo ritkábban figyelhető meg. A legtöbb esetben az inguinalis és a femorális nyirokcsomók érintettek, a hónalj és a nyaki nyirokcsomók valamivel ritkábban fordulnak elő. A bubo mérete a diótól a közepes méretű almáig változhat. Fényes jellemzők: éles fájdalom, sűrű konzisztencia, tapadás az alatta lévő szövetekhez, a kontúrok simasága a periadenitis kialakulása miatt. A bubo a betegség második napján kezd kialakulni. Fejlődése során a bőr felette kipirosodik, fényes, gyakran cianotikus lesz. Eleinte sűrű, majd felpuhul, fluktuáció jelenik meg, a kontúrok elmosódottá válnak. A betegség 10-12. napján kinyílik - fisztula, fekély keletkezik. A betegség jóindulatú lefolyásával és a modern antibiotikum-terápiával felszívódása vagy szklerózisa figyelhető meg. A kórokozó hematogén bejutása következtében másodlagos bubók képződhetnek, amelyek később jelennek meg, kis méretűek, kevésbé fájdalmasak, és általában nem gennyesednek. Ennek a formának egy félelmetes szövődménye lehet egy másodlagos pulmonalis vagy másodlagos szeptikus forma kialakulása, amely élesen rontja a beteg állapotát, akár halálig is.

Elsődleges tüdő a forma ritka, járványos időszakokban az esetek 5-10%-ában, és a betegség epidemiológiailag legveszélyesebb és legsúlyosabb klinikai formája. Élesen, hevesen kezdődik. A kifejezett mérgezési szindróma hátterében az első napoktól kezdve száraz köhögés, súlyos légszomj, vágó fájdalmak jelentkeznek a mellkasban. A köhögés ezután produktívvá válik, és köpet képződik, amelynek mennyisége néhány köpettől a hatalmas mennyiségig változhat, és ritkán hiányzik. A köpet először habos, üveges, átlátszó, majd véres megjelenést kölcsönöz, később tisztán véres lesz, hatalmas mennyiségű pestisbaktériumot tartalmaz. Általában ez egy folyékony konzisztencia - az egyik diagnosztikai jel. Fizikai adatok szűkösek: az ütőhang enyhe rövidülése az érintett lebeny felett, auskultáció során, nem bőséges finom bugyborékolás, ami egyértelműen nem felel meg a beteg általános súlyos állapotának. A terminális időszakot a légszomj fokozódása, a cianózis, a stupor, a tüdőödéma és a TSS kialakulása jellemzi. Csökken a vérnyomás, a pulzus felgyorsul és fonalassá válik, a szívhangok tompulnak, a hipertermiát hipotermia váltja fel. Kezelés hiányában a betegség 2-6 napon belül halálos kimenetelű. Az antibiotikumok korai alkalmazása esetén a betegség lefolyása jóindulatú, alig különbözik

Az MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 reagenskészlet célja a HIV-1 és/vagy HIV-1 O és/vagy HIV-2 csoportba tartozó egyedi fehérjék (antigénjei) elleni antitestek kimutatásának megerősítése humán szérumban, ill. plazma immunblot módszerrel.

Megkülönböztető jellegzetességek:

• Az "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" reagenskészlet HIV 1 tisztított lizátum vírusfehérjéket és HIV-2 gp36 antigén-determinátumot tartalmaz;
• Egy csíkon biztosítja a HIV-1, HIV-1 O csoport, HIV 2 elleni antitestek kimutatását;
• Egyszerű eljárás az elemzések elkészítéséhez és lefolytatásához;
• A reakció belső minőségellenőrzése*
• Az elemzés maximális sebessége (3 óra);
• A vizsgálati minta kis térfogata - 20 µl;
• Nem igényel további felszerelést a kutatáshoz;
• A készlet minőségét az orosz és nemzetközi szabványos minták használata garantálja**

* A belső minőségellenőrzést a következők jelenléte biztosítja:

• belső kontrollcsíkok, szérum- vagy plazmaminta bejuttatásának ellenőrzését biztosítják;
• kontroll negatív szérum (K-);
• kontroll pozitív szérum (K+), amely lehetővé teszi a csíkon észlelt sávok azonosítását;
• kontroll gyengén pozitív szérum (K + cl), amely biztosítja a reagenskészlet érzékenységének szabályozását.

**Minőségbiztosítás:

Az MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 reagenskészlet jellemzőit donorok, HIV-fertőzéssel diagnosztizált betegek véletlenszerű mintájából, kereskedelmi szerokonverziós panelekből, standard panelekből és „potenciálisan interferálható meghatározás" összetevői.

A reagenskészlet nem ad hamis pozitív eredményeket a standard panel azon szérumainak vizsgálatában, amelyek nem tartalmaznak HIV 1.2 és HIV-1 antigén elleni antitesteket ("Standard AT (-) HIV", FSR 2007/00953, 10.25. .2007). Specificitás - 100%.

A diagnosztikai specifitást 200 olyan donor véletlenszerű mintájának vizsgálatával határozták meg, amelyek különböző vérközpontoktól és klinikáktól származtak, akiknél előzetesen igazolt HIV-1, HIV-2 fertőzés hiánya. A donorok véletlenszerű mintájának vizsgálata során a specifitás 100% volt;

A reagenskészlet specifitását 250 minta vizsgálata során határozták meg, köztük terhes nőktől, kórházi betegektől, hepatitis C-ben és E-ben szenvedő betegektől vett szérum- vagy plazmamintákat, valamint "potenciálisan zavaró meghatározást" tartalmazó mintákat. Az MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 kit használatakor ezeknél a mintáknál nem találtak álpozitív eredményeket.

A diagnosztikai érzékenységet a következők segítségével határoztuk meg:
- Boston Biomedica, Inc. HIV-1 panel plazmaminták (WWRB 301) különböző régiókból, amelyek különböző HIV-1 altípusokat tartalmaznak: M csoport (A, B, C, D, E, F altípusok) és O csoport; a reagenskészlet érzékenysége 100% volt;

A reagenskészlet érzékenységét a Boston Biomedica, Inc. (SeraCare Life Sciences), kat. nemzetközi szerokonverziós panelek vizsgálata során határozták meg. nrs. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 930

A reagenskészlet kimutatja a HIV-1 elleni antitesteket egy standard panel szérumában, amely HIV-1 elleni antitesteket tartalmaz ("Standard AT (+) HIV-1", FSR 2007/00953 sz., 2007. október 25.), kimutatja az antitesteket. HIV-2-re a HIV-2 elleni antitesteket tartalmazó standard panel szérumában ("Standard AT (+) HIV-2", No. FSR 2007/00953, 2007.10.25.). Érzékenység - 100%.

2011. július 13-án kelt FSR 2010/07958 számú regisztrációs bizonyítvány (érvényessége nincs korlátozva)

Összetett:

• Immunszorbens. Fehér nitrocellulóz membráncsíkok egyedi HIV-1 fehérjékkel (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) elektrotranszfer módszerrel adszorbeálva és szintetikus HIV-2 peptiddel a csíkra felvitve, a gp36 fehérje és anti-IgG humán analógja (belső kontroll) - 18 db;
• K- - kontroll negatív szérum. A HIV-1,2, HCV, HIV antigén, HBsAg elleni antitesteket nem tartalmazó humán vérszérum inaktiválódik 560 °C-on történő melegítéssel; átlátszó világossárga folyadék - 1 kémcső (0,08 ml). Tartósítószereket tartalmaz: timerosalt és nátrium-azidot;
• K+ - kontroll pozitív szérum. HIV-1,2 elleni antitesteket tartalmazó humán vérszérum (titer legalább 1:10000), nem tartalmaz HBsAg-t, HIV antigént, HCV elleni antitesteket, 560 °C-on melegítéssel inaktiválva; átlátszó világossárga folyadék - 1 kémcső (0,08 ml) Tartósítószert tartalmaz: timerosál és nátrium-azid;
• K+sl - kontroll gyengén pozitív szérum. HIV-1,2 elleni antitesteket tartalmazó humán vérszérum (titer legfeljebb 1:200), nem tartalmaz HBsAg-t, HIV antigént, HCV elleni antitesteket, 560 °C-on melegítéssel inaktiválva; átlátszó világossárga folyadék - 1 kémcső (0,08 ml). Tartósítószereket tartalmaz: timerosalt és nátrium-azidot;
• RROKk (x10) - oldat a minták és a konjugátum hígításához. Koncentrátum – előkezelt normál kecskeszérumot tartalmazó Tris puffer; átlátszatlan szürke folyadék - 1 injekciós üveg (10 ml). Tartósítószert tartalmaz: timerosalt;
• PRk (x20) - mosóoldat. Koncentrátum - Tween-20-at tartalmazó Tris-puffer; tiszta színtelen folyadék - 1 injekciós üveg (70 ml). Tartósítószert tartalmaz: timerosalt;
• Konjugált. Humán IgG elleni kecske antitestek, alkalikus foszfatázzal konjugálva; tiszta színtelen folyadék - 1 kémcső (0,06 ml);
• Szubsztrát (színező oldat). 5-bróm-4-fluor-indolil-foszfát (BCIP) és nitrozin-tetrazólium (NBT) oldata; átlátszó világossárga folyadék - 1 injekciós üveg (50 ml);
• Por immunblothoz. Sovány tejpor - amorf fehér vagy világossárga por - 5 csomag x 1g;
• Egy tabletta fedővel a reakció beállításához - 2 darab;
• Műanyag csipesz - 1 db.