Šiuo metu Rusijoje yra standartinė ŽIV infekcijos laboratorinės diagnostikos procedūra antikūnų prieš ŽIV aptikimasnaudojant fermentinį imunologinį tyrimą po to patvirtinamas jų specifiškumas reakcijoje imuninis blotingas.

Antikūnai prieš ŽIV atsiranda 90-95% užsikrėtusiųjų per 3 mėnesius nuo užsikrėtimo, 5-9% - po 6 mėnesių nuo užsikrėtimo, o 0,5-1% - vėliau. Ankstyviausias antikūnų aptikimo laikas yra 2 savaitės nuo užsikrėtimo momento.

Antikūnų prieš ŽIV aptikimas apima 2 etapus. Pirmajame etape bendras antikūnų prieš ŽIV antigenus spektras nustatomas naudojant įvairius testus: fermentinį imuninį tyrimą, agliutinacijos, kombinuotą, šukinį, membraninį filtrą arba membraninį difuzinį. Antrame etape imunoblotingas naudojamas antikūnams prieš atskirus viruso baltymus nustatyti. Darbe leidžiama naudoti tik testavimo sistemas, kurios turi Rusijos Federacijos sveikatos apsaugos ministerijos leidimą. Diagnostinės procedūros turėtų būti atliekamos tik pagal patvirtintas atitinkamų tyrimų naudojimo instrukcijas.

Kraujo mėginių ėmimas iš kubitalinės venos gaminamas į švarų, sausą mėgintuvėlį 3-5 ml. Virkštelės kraują galima paimti iš naujagimių. Gautos medžiagos (viso kraujo) nerekomenduojama laikyti ilgiau kaip 12 valandų kambario temperatūroje ir ilgiau kaip 1 parą šaldytuve 4-8°C temperatūroje. Artėjanti hemolizė gali turėti įtakos analizės rezultatams. Serumas atskiriamas centrifuguojant arba nubrėžiant kraują palei mėgintuvėlio sienelę Pasteur pipete arba stikline lazdele. Atskirtas serumas perpilamas į švarų (geriausia sterilų) mėgintuvėlį, buteliuką ar plastikinį indą ir tokioje formoje gali būti laikomas iki 7 dienų 4-8°C temperatūroje. Dirbant reikia laikytis saugos taisyklių, pateiktų 1990-07-05 ,,Nurodymai dėl antiepideminio režimo AIDS diagnostikos laboratorijose“ Nr.42-28 / 38-90.

Bendrų antikūnų prieš ŽIV nustatymas.

Gavus pirmąjį teigiamą rezultatą, analizė atliekama dar 2 kartus (su tuo pačiu serumu ir toje pačioje tyrimo sistemoje). Jei gautas bent vienas teigiamas rezultatas (du teigiami rezultatai iš trijų ELISA testų), serumas siunčiamas į etaloninę laboratoriją.

Etaloninėje laboratorijoje pirminiai teigiami serumai (t. y. tie, kurie davė du teigiamus pirmoje bandymų sistemoje rezultatus) pakartotinai tiriami ELISA metodu patvirtinimui pasirinktoje antrojoje (kitoje) tyrimų sistemoje.

Gavus teigiamą antrojo tyrimo sistemos analizės rezultatą, serumas turi būti tiriamas IS.

Jei antroje bandymų sistemoje gaunamas neigiamas rezultatas, serumas pakartotinai tiriamas trečiojoje bandymo sistemoje.

Jei tiek antroje, tiek trečioje tyrimo sistemoje gaunamas neigiamas tyrimo rezultatas, išduodama išvada dėl antikūnų prieš ŽIV nebuvimo.

Kai trečioje tyrimo sistemoje gaunamas teigiamas rezultatas, serumas taip pat siunčiamas analizei imuninio blotingo metu.

imuninis blotingas.

Metodo principas – aptikti antikūnus prieš tam tikrus viruso baltymus, imobilizuotus ant nitroceliuliozės membranos. ŽIV-1 apvalkalo baltymai (env) paprastai vadinami glikoproteinais ("gp" arba "gp"), kurių molekulinė masė išreiškiama kilodaltonais (cd): 160 kd, 120 kd, 41 kd. ŽIV-2 glikoproteinų svoris yra 140 kd, 105 kd, 36 kd. ŽIV-1 pagrindinių baltymų (gag) (paprastai vadinamų baltymais - "p" arba "r") molekulinė masė yra atitinkamai 55 kd, 24 kd, 17 kd, o ŽIV-2 - 56 kd, 26 kd. , 18 kd. Fermentų ŽIV-1 (pol) molekulinė masė yra 66 kd, 51 kd, 31 kd, ŽIV-2-68 kd.

Imunoblotavimo rezultatai interpretuojami kaip teigiami, neapibrėžti ir neigiami.

teigiamas(teigiami) laikomi mėginiais, kuriuose aptinkami antikūnai prieš 2 arba 3 ŽIV glikoproteinus.

neigiamas(neigiami) yra serumai, kurie neaptinka antikūnų prieš bet kurį iš ŽIV antigenų (baltymų).

Atsižvelgiama į mėginius, kurie aptinka antikūnus prieš vieną ŽIV glikoproteiną ir (arba) bet kurį iš ŽIV baltymų. abejotinas(neapibrėžta arba neinterpretuojama).

Jei imunoblotuojant su ŽIV-1 antigenais gaunamas neapibrėžtas rezultatas su antikūnais prieš pagrindinius baltymus (gag), atliekamas tyrimas su ŽIV-2 antigenais.

Gavus teigiamus imuninio blotingo rezultatus, daroma išvada apie antikūnų prieš ŽIV buvimą tiriamojoje medžiagoje.

Gavusi neigiamą tyrimo rezultatą, IB išduoda išvadą, kad antikūnų prieš ŽIV nėra.

Gavus neapibrėžtą rezultatą (jei neaptiktas p24 antigenas), po 3 mėnesių atliekami pakartotiniai antikūnų prieš ŽIV tyrimai.

ir išlaikant neapibrėžtus rezultatus dar po 3 mėnesių. Jei buvo aptiktas p24 antigenas, antras tyrimas atliekamas praėjus 2 savaitėms po pirmojo neapibrėžto rezultato.

Jei praėjus 6 mėnesiams po pirmojo tyrimo vėl gaunami neapibrėžti rezultatai, o pacientas neturi infekcijos rizikos veiksnių ir klinikinių ŽIV infekcijos simptomų, rezultatas vertinamas kaip klaidingas teigiamas. (Jei yra epidemiologinių ir klinikinių indikacijų, serologiniai tyrimai kartojami taip, kaip nurodyta).

Imuninis blotavimas naudojant rekombinantinius virusui specifinius polipeptidus „ŽIV blot“ išsiskiria tuo, kad jame naudojami ne patys viruso baltymai, o rekombinantiniai polipeptidai – ŽIV antigenų analogai („Env1“, „Gag1“, „Poll“, „Env2“). “). Rekombinantinis Env1 polipeptidas aptinka antikūnus tiesiogiai prieš ŽIV-1 gp120 ir gp41, Gag1 polipeptidą prieš p17 ir p24 antigenus, polipeptidą Po11 prieš p51 antigeną, Env2 polipeptidą prieš ŽIV-2 gp110 ir gp38 antigenus. Serumas laikomas teigiamu, jei jis reaguoja su Env1 arba Env2 arba abiem Env (1 ir 2 tipo ŽIV infekcija). Reakcija tik su Poll ir Gag yra laikoma neapibrėžtu rezultatu, tokiu atveju stebėjimas atliekamas panašiai kaip klasikinio imunobloto, naudojant ŽIV lizatą, neapibrėžtų rezultatų atvejais.

Serologinės ŽIV infekcijos diagnostikos ypatumai vaikams, gimusiems iš ŽIV infekuotų motinų, yra tai, kad tiek užsikrėtę, tiek neužsikrėtę vaikai pirmuosius 6-12 gyvenimo mėnesių turi motininės kilmės antikūnų prieš ŽIV, kurie vėliau gali išnykti. Kriterijus, rodantis, kad vaikas yra užsikrėtęs ŽIV, yra antikūnų prieš ŽIV aptikimas sulaukus 18 mėnesių ir vyresni. Antikūnų prieš ŽIV nebuvimas 18 mėnesių vaikui, gimusiam ŽIV infekuotai motinai, yra ŽIV infekcijos buvimo kriterijus.

apibūdinimas

Nustatymo metodas Imunoblotas.

Tiriama medžiaga Serumas

Galimas vizitas į namus

Antibranduoliniai antikūnai yra autoantikūnų, kurie jungiasi su ribonukleino rūgštimis ir su jomis susijusiais baltymais, šeima. Jie atsiranda daugiau nei 90% pacientų, sergančių difuzinėmis jungiamojo audinio ligomis, taip pat dažnai stebimi sergant autoimuninėmis kepenų ligomis ir daugeliu kitų būklių. Iki šiol buvo apibūdinta apie 200 šios autoantikūnų šeimos atmainų, tačiau ne visos jos gali būti naudojamos klinikinėje praktikoje.

Antibranduolinių antikūnų imunoblotas leidžia vienu metu atlikti 15 pagrindinių antinuklearinių antikūnų tipų tyrimą vienu tyrimu, kuris užtikrina pagrindinių sisteminių reumatinių ligų diferencinę diagnozę. Kiekvienas imunoblotu aptiktas autoantikūnų tipas dažniausiai stebimas pacientams, turintiems būdingą klinikinį vaizdą, todėl autoantikūnų spektras leidžia ne tik diagnozuoti ligą, bet ir nustatyti tam tikrų klinikinių apraiškų atsiradimo riziką.

Antibranduolinių antikūnų imunoblotą patartina naudoti antrajame serologinio tyrimo etape, kai kitų tyrimų rezultatai teigiami, rodantys, kad tiriamojo serume yra antibranduolinių antikūnų. Šie tyrimai apima antinuklearinių antikūnų nustatymą (ELISA atranka), antibranduolinio faktoriaus (ANF) nustatymą ant Hep2 ląstelių (), antibranduolinių antikūnų ir antikūnų prieš ekstrahuojamą branduolinį antigeną (ENA).

Antinuklearinių antikūnų imunoblotinis metodas sisteminių reumatinių ligų diagnostikoje pasižymi dideliu klinikiniu specifiškumu. Tačiau ne visada įmanoma nustatyti antibranduolinių antikūnų specifiškumą, net ir esant dideliems ANF titrai (), nes daugelis antibranduolinių antikūnų antigenų vis tiek lieka neapibūdinti. Neigiamas imunobloto rezultatas šiuo atveju neatmeta sisteminių reumatinių ligų diagnozės. Daugelį antinuklearinių antikūnų galima aptikti naudojant imunoblotą – miozitui specifinių autoantikūnų grupę () ir imunoblotą – sklerodermijos autoantikūnų grupę ().

Literatūra

1. Lapinas S.V. Totolyanas A.A. Imunologinė laboratorinė autoimuninių ligų diagnostika / Leidykla "Chelovek", Sankt Peterburgas - 2010. 272 ​​p.
2. Nasonovas E.L., Aleksandrova E.N. Šiuolaikiniai reumatinių ligų laboratorinės diagnostikos standartai. Klinikinės gairės / BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantikūnai organų specifinėse autoimuninėse ligose: diagnostikos nuoroda / PABST, Dresdenas - 2011. 300 p.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantikūnai sisteminėse autoimuninėse ligose: diagnostinė nuoroda / PABST, Dresdenas - 2007. 300 p.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2nd ed./ Elsevier Science - 2006. 862 p.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteria in Autoimunne Diseases / Humana Press - 2008. 598 p.
7. Reagentų rinkinio instrukcijos.

Treniruotės

Pageidautina atlaikyti 4 valandas po paskutinio valgio, nėra jokių privalomų reikalavimų.

Indikacijos paskyrimui

Tyrimas skirtas šių būklių diagnozei ir diferencinei diagnozei:

• sisteminė raudonoji vilkligė;
• poūmė odos vilkligė ir kitos odos vilkligės rūšys;
• mišri jungiamojo audinio liga;
• Sjögreno sindromas ir susijusios ligos;
• difuzinė ir lokalizuota sklerodermija, CREST sindromas;
• uždegiminės miopatijos (polimiozitas ir dermatomiozitas);
• nepilnamečių lėtinis artritas;
• autoimuninis hepatitas;
• pirminė tulžies cirozė ir sklerozuojantis cholangitas;
• šio tyrimo naudojimas nurodomas, kai nustatomi aukšti antibranduolinio faktoriaus titrai, antibranduoliniai antikūnai, antikūnai prieš ekstrahuojamą branduolinį antigeną, antikūnai prieš DNR, antikūnai prieš nukleosomas ir antifosfolipidiniai antikūnai.

Rezultatų interpretacija

Tyrimo rezultatų aiškinimas turi informaciją gydančiam gydytojui ir nėra diagnozė. Šiame skyriuje pateikta informacija neturėtų būti naudojama savidiagnostikai ar savęs gydymui. Tikslią diagnozę nustato gydytojas, naudodamasis tiek šio tyrimo rezultatais, tiek reikiama informacija iš kitų šaltinių: istorijos, kitų tyrimų rezultatų ir kt.

Matavimo vienetai: kokybinis testas, rezultatas pateikiamas "aptikta" arba "nerasta" forma.

Kai aptinkama juosta, apibūdinanti bet kokio tipo antikūnų buvimą, juostos spalvos intensyvumas papildomai apibūdinamas pliusų ("kryžių") skaičiumi kiekvienam iš identifikuotų antikūnų tipų. Teigimo laipsnio padidėjimas netiesiogiai atspindi autoantikūnų turinį ir afinitetą.

Pamatinės reikšmės: antikūnai prieš Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNR, histoną, nukleozomą , Rib P, AMA-M2, Jo-1 nerasta.

Kiekvieno atitinkamo antigeno autoantikūnų nustatymo rezultatas pateikiamas „kryžiukais“. Seropozityvumo laipsnio padidėjimas netiesiogiai atspindi autoantikūnų kiekį ir afinitetą. Seropozityvumo balo parinktys pateikiamos toliau:

1. Antikūnų nerasta.
2. +/- - ribinis rezultatas;
3. + - mažas autoantikūnų prieš specifinį antigeną kiekis;
4. ++ – vidutinis autoantikūnų prieš konkretų antigeną kiekis;
5. +++ - didelis autoantikūnų kiekis konkrečiam antigenui.

Pagrindinės ligos, susijusios su antinuklearinių antikūnų nustatymu:

Antigenas	Reikšmė
Sm (Smitas)	Specifinis sisteminės raudonosios vilkligės žymuo (įtrauktas į 10-ąjį Amerikos reumatologijos koledžo SLE kriterijų, ACR)
SS-A (Ro52)	Jis pastebimas sergant įvairiomis autoimuninėmis ligomis, dažniau sergant sistemine raudonąja vilklige ir jos odos formomis, sisteminėmis reumatinėmis ligomis, reumatoidiniu artritu, autoimuninėmis kepenų ligomis ir kt.
SS-A (Ro60)	Sisteminė raudonoji vilkligė, odos formos raudonoji vilkligė, jautrumas šviesai sergant sistemine raudonąja vilklige, didelė įgimtos raudonosios vilkligės ir vaisiaus širdies ligos rizika. Pagrindinis serologinis Sjögreno sindromo rodiklis. Jis dažnai pastebimas kartu su antikūnais prieš SS-A (Ro52) antigeną.
SS-B	Sjögreno sindromas, sisteminė raudonoji vilkligė.
PCNA	Sisteminė raudonoji vilkligė, vilkligės nefrito rizika.
Ribosomos (Ribo P)	Sisteminė raudonoji vilkligė, centrinės nervų sistemos pažeidimo rizika.
Nukleosomos	Sisteminė raudonoji vilkligė, didelė glomerulonefrito rizika.
dvigrandė DNR	Specifinis sisteminės raudonosios vilkligės žymuo (įtrauktas į 10-ąjį SRV ACR kriterijų), didelė rizika susirgti vilkligės nefritu.
snRNP/Sm	Mišri jungiamojo audinio liga, sisteminė raudonoji vilkligė su maža inkstų pažeidimo rizika, sklerodermija.
Histonai	Sisteminė raudonoji vilkligė, vaistų sukelta vilkligė, sklerodermija.
Scl-70	Sisteminė sklerozė su difuziniais odos ir vidaus organų pažeidimais.
PM-Scl	Sklerodermija su polimiozitu.
CENP-B	CREST sindromas su sklerodaktilija, telangiektazijomis, poodinėmis kalcifikacijomis, Raynaud sindromu, ezofagitu.
Jo-1	Polimiozitas antisintetazės sindromo forma.
AMA-M2	Pirminė tulžies cirozė, Sjögreno sindromas.

Imunoblotas (imunoblotas) yra labai specifinis ir labai jautrus pamatinis metodas, patvirtinantis diagnozę pacientams, kuriems gauti teigiami arba neapibrėžti tyrimo rezultatai, įskaitant. naudojant RPHA arba ELISA .

Šis antikūnų prieš atskirus patogeno antigenus nustatymo metodas yra pagrįstas ELISA nitroceliuliozės membranose, ant kurių atskirų juostų pavidalu uždedami specifiniai baltymai, atskirti gelio elektroforeze. Jei yra antikūnų prieš tam tikrus antigenus, atitinkamoje juostelės vietoje atsiranda tamsi linija. Imunobloto išskirtinumas slypi dideliu informacijos kiekiu ir gautų rezultatų patikimumu.

Tyrimo medžiaga yra žmogaus serumas arba plazma. Vienos juostelės tyrimui reikia 1,5-2 ml kraujo arba 15-25 µl serumo.

Pagal PSO rekomendaciją imunoblotavimas (Western blot) ŽIV infekcijos diagnozei taikomas kaip papildomas ekspertinis metodas, kuris turėtų patvirtinti ELISA rezultatus. Šis metodas paprastai naudojamas norint dar kartą patikrinti teigiamą ELISA rezultatą, nes jis laikomas jautresniu ir specifiškesniu, nors ir sudėtingesniu ir brangesniu.

Imunoblotingas apjungia fermentinį imuninį tyrimą (ELISA) su preliminariu elektroforetiniu viruso baltymų atskyrimu gelyje ir jų perkėlimu į nitroceliuliozės membraną. Imunobloto procedūra susideda iš kelių etapų. Pirma, iš anksto išgrynintas ir sunaikintas iki sudedamųjų dalių, ŽIV yra veikiamas elektroforezės, o visi virusą sudarantys antigenai yra atskiriami pagal molekulinę masę. Tada blotuojant antigenai iš gelio perkeliami į nitroceliuliozės juostelę arba nailono filtrą, kuriame dabar yra ŽIV būdingas akiai nematomas baltymų spektras. Toliau ant juostelės uždedama tiriamoji medžiaga (serumas, paciento plazma ir kt.), o jei mėginyje yra specifinių antikūnų, jie jungiasi prie juos griežtai atitinkančių antigeninių baltymų juostelių. Dėl vėlesnių manipuliacijų (pvz., ELISA) šios sąveikos rezultatas yra vizualizuojamas – daromas matomas. Juostelių buvimas tam tikrose juostelės vietose patvirtina, kad tiriamame serume yra antikūnų prieš griežtai apibrėžtus ŽIV antigenus.

Imunoblotavimas dažniausiai naudojamas ŽIV infekcijos diagnozei patvirtinti. PSO mano, kad serumas yra teigiamas, jei imunoblotingu aptinkami antikūnai prieš bet kuriuos du ŽIV apvalkalo baltymus. Remiantis šiomis rekomendacijomis, jei yra reakcija tik su vienu iš apvalkalo baltymų (gp160, gp120, gp41) kartu arba be reakcijos su kitais baltymais, rezultatas laikomas abejotinu ir rekomenduojama atlikti antrą tyrimą naudojant rinkinį iš kitokio. serijos ar kitos firmos. Jei po to rezultatas lieka abejotinas, tyrimai tęsiami kas 3 mėnesius.

Ypatumai

Imunoblotinė analizė yra patikimas metodas, leidžiantis nustatyti, ar yra antikūnų prieš pirmojo ir antrojo tipo ŽIV antigenus. Jei žmogus yra užsikrėtęs, per dvi savaites atsiranda antikūnų, kuriuos galima aptikti daug vėliau. ŽIV ypatumas yra tas, kad antikūnų skaičius greitai didėja ir lieka paciento kraujyje. Net jei jie yra, liga gali nepasireikšti dvejus ar daugiau metų. ELISA metodas ne visada tiksliai nustato ligos buvimą, todėl, jei fermento imunologinis tyrimas yra teigiamas, būtina patvirtinti rezultatus naudojant imunoblotą ir PGR.

Indikacijos paskyrimui

Kas tai per „imunoblotas“, jau išsiaiškinta, bet kam šis tyrimas skirtas? Priežastis atlikti žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV) tyrimus imunoblotavimo būdu yra teigiamas ELISA rezultatas. Pacientams, kurie bus operuojami, būtina atlikti fermentų imunologinį tyrimą. Be to, reikėtų atlikti analizę moterims, planuojančioms nėštumą, taip pat visoms, kurios yra seksualiai išsižadėjusios. Jei abejojate dėl ELISA rezultatų, paskirkite imunoblotingą ŽIV užsikrėtusiems pacientams.

Šie nerimą keliantys simptomai gali būti priežastis kreiptis į gydytoją:

• staigus svorio kritimas;
• silpnumas, darbingumo sumažėjimas;
• žarnyno sutrikimas (viduriavimas), kuris trunka tris savaites;
• kūno dehidratacija;
• karščiavimas;
• limfmazgių padidėjimas organizme;
• kandidozės, tuberkuliozės, pneumonijos, toksoplazmozės vystymasis, herpeso paūmėjimas.

Prieš duodamas veninį kraują pacientui ruoštis nereikia. 8-10 valandų prieš tyrimą negalima valgyti. Nerekomenduojama dieną prieš kraujo davimą gerti alkoholinių ir kavos gėrimų, užsiimti sunkiais fiziniais pratimais, patirti jaudulį.

Kaip atliekamas tyrimas?

Paciento požiūriu imunoblotas niekuo nesiskiria nuo bet kurios kitos analizės: paimamas veninis kraujas, ištiriamas ir gaunamas rezultatas. Bet jei papasakosite šiek tiek išsamiau apie techniką, tai nėra labai paprasta, bet vis tiek pabandykite tai išsiaiškinti.

Pirma, reagentų gamybos įmonėje paimamas „referencinis“ žmogaus imunodeficito virusas. Tada specialia procedūra (elektroforeze) gelio terpėje virusas sunaikinamas iki smulkiausių jo komponentų: baltymų (viruso antigenų). Tada, naudojant patį blotavimą (iš angliško wetting), dalelės dedamos ant specialios medžiagos - nitroceliuliozės arba nailono filtro, gaunamas paruoštas naudoti indikatorius, vadinamoji juostelė. Juostelė yra juostelė, kurioje antigenai pasiskirsto priklausomai nuo jų molekulinės masės, aiškia seka, tai yra, kiekvieną milimetrą popieriaus atitinka tam tikras baltymas.

Galbūt žinote, jei žmogaus kraujyje yra virusų, tada organizmas pradeda gaminti antikūnus prieš jų apvalkalus (tam tikrus baltymus), ir kiekvienas virusas turi savo individualų antigeninių baltymų rinkinį. Antikūnų prieš antigeninius baltymus nustatymas kraujyje yra imunobloto metodo pagrindas. Galų gale, jei antikūnas susiduria su antigenu, jie tikrai sąveikaus vienas su kitu - jie „prilimpa“.

Taigi, antigenai yra ant juostelės juostelės ir, jei tiriamojo kraujyje yra tinkamų antigenų, jie būtinai sąveikaus vienas su kitu, o šioje vietoje ant juostelės juostelės pasirodys indikatorius - atsiras plokščia. (kaip nėštumo testas). Be to, konkrečioje juostelės vietoje tokiu būdu gydytojas supras, ar kraujyje yra tam tikram virusui būdingų baltymų rinkinys.

Taigi, pavyzdžiui, jei baltymų lokalizacijos vietose yra patamsėjimas ant juostelės gp160, gp120, gp41ŽIV diagnozuojamas, kitiems virusams tai bus visiškai kitoks baltymų rinkinys.

Reikėtų pažymėti, kad imunoblotas leidžia tiksliai nustatyti viruso buvimą tik tuo atveju, jei kraujyje yra pilnas antikūnų rinkinys, tai yra, jei tuo pačiu metu yra baltymų gp160, gp120, gp41, tai yra 100% ŽIV infekcija. Bet jei trūksta bent vieno, pvz.: gp41 nėra, bet yra tik gp160, gp120, tai testas vertinamas kaip abejotinas ir jį reikia kartoti.

DUK

Kokie yra imunobloto etapai?

1. Juostos paruošimas. Imunodeficito virusas (ŽIV), kuris anksčiau buvo išgrynintas ir sunaikintas iki sudedamųjų dalių, yra veikiamas elektroforezės, o antigenai, sudarantys ŽIV, atskiriami pagal molekulinę masę. Tada blotuojant (analogiškai išspaudžiant rašalo perteklių ant „bloterio“), antigenai perkeliami į nitroceliuliozės juostelę, kurioje dabar yra ŽIV būdingų antigeninių juostų spektras, kuris akiai nematomas.
2. Pavyzdinis tyrimas. Ant nitroceliuliozės juostelės užtepama tiriamoji medžiaga (serumas, paciento kraujo plazma ir kt.), o jei mėginyje yra specifinių antikūnų, jie jungiasi prie griežtai atitinkamų (papildomų) antigeninių juostų. Dėl vėlesnių manipuliacijų šios sąveikos rezultatas vizualizuojamas – daromas matomas.
3. Rezultato interpretacija. Juostų buvimas tam tikrose nitroceliuliozės plokštelės vietose patvirtina, kad tiriamame serume yra antikūnų prieš griežtai apibrėžtus ŽIV antigenus.

• A juosta – teigiamas valdymas
• B juosta – silpna teigiama kontrolė
• C juosta – neigiama kontrolė
• D juostelė – teigiamas mėginys (aptikti antikūnai prieš ŽIV-1)

Kaip iššifruoti analizę?

Jei pagal šią testų sistemą ELISA parodė, kad yra visi arba beveik visi antikūnai prieš antigenus, tai rodo teigiamą ŽIV testą. Jei atsakas po antrojo serologinio fermento imunologinio tyrimo yra teigiamas, reikia atlikti imunoblotą. Jo rezultatų interpretacija bus teisingesnė. Jei su fermentu susijęs imunosorbentinis tyrimas davė teigiamą rezultatą, kita imunoblotinė analizė taip pat parodė ŽIV buvimą, tada pateikiamas galutinis rezultatas.

Kai analizės iššifruojamos, turite žinoti, kad teigiamą ŽIV testą lemia:

• nuo 60% iki 65% 28 dienas po užsikrėtimo;
• 80% - po 42 dienų;
• 90% - po 56 dienų;
• 95% - po 84 dienų.

Jei atsakas į ŽIV yra teigiamas, tai reikš, kad buvo aptikti viruso antikūnai. Norint išvengti klaidingai teigiamo atsakymo, būtina atlikti pakartotinį testą, geriausia du kartus. Jei imunodeficito antikūnai aptinkami išlaikius du tyrimus iš dviejų arba 3 testus iš 2, laikoma, kad rezultatas yra teigiamas.

P24 antigenas kraujyje gali būti aptiktas jau po 14 dienų nuo užsikrėtimo. Taikant fermentų imunologinio tyrimo metodą, šis antigenas aptinkamas nuo 14 iki 56 dienų. Po 60 dienų jo kraujyje nebėra. Tik tada, kai organizme susiformuoja AIDS, šis p24 baltymas atsinaujina kraujyje. Todėl ŽIV aptikimui pirmosiomis užsikrėtimo dienomis arba ligos progresavimui ir gydymo procesui stebėti naudojamos fermentų imuninės analizės sistemos. Didelis analitinis fermento imunologinio tyrimo jautrumas aptinka p24 antigeną biologinėje medžiagoje pirmojo potipio ŽIV atveju, kai koncentracija yra nuo 5 iki 10 pg/ml, o antrojo potipio ŽIV – nuo ​​0,5 ng/ml ar mažesnė.

Pagal abejotinas fermento imunologinio tyrimo rezultatas reiškia, kad diagnozė kažkur buvo klaidinga, paprastai medicinos darbuotojai kažką sumaišė arba žmogus turi infekcijos požymių, o rezultatas yra neigiamas, todėl kyla įtarimų, asmuo siunčiamas pakartotiniam tyrimui. .

Pagal klaidingai teigiamas Rezultatas suprantamas kaip rezultatas, kai kraujo tyrimai buvo paimti tokiomis paciento sąlygomis:

• nėštumas;
• jei žmogus turi hormonų disbalansą;
• su ilgalaikiu imunosupresija.

Kaip tokiu atveju iššifruoti analizę? Klaidingai teigiamas rezultatas pateikiamas, jei aptinkamas bent vienas baltymas. Kadangi p24 antigenas labai priklauso nuo individualių variacijų, taikant šį metodą, pirmuoju infekcijos periodu nustatoma nuo 20% iki 30% pacientų.

Kiek patikimas yra teigiamas testo rezultatas?

Kartais ELISA rezultatai būna klaidingai teigiami (apie 1% atvejų), tokio rezultato priežastis gali būti nėštumas, įvairios virusinės infekcijos, taip pat paprastas nelaimingas atsitikimas. Gavus teigiamą rezultatą, reikalingas tikslesnis tyrimas – imunoblotas, pagal kurio rezultatus nustatoma diagnozė. Teigiamas imunobloto rezultatas po teigiamo ELISA tyrimo yra 99,9% patikimas – tai didžiausias bet kurio medicininio tyrimo tikslumas. Jei imunoblotas yra neigiamas, tada pirmasis testas buvo klaidingai teigiamas, o iš tikrųjų žmogus neturi ŽIV.

Kas yra neapibrėžtas (abejotinas) rezultatas?

Jei ELISA yra teigiama arba neigiama, imunoblotas gali būti teigiamas, neigiamas arba neapibrėžtas. Neapibrėžtas imunobloto rezultatas, t.y. bent vieno viruso baltymo imunoblote galima pastebėti, jei infekcija įvyko neseniai, o kraujyje vis dar yra mažai antikūnų prieš ŽIV, tokiu atveju imunoblotas po kurio laiko bus teigiamas. Taip pat neapibrėžtas rezultatas gali pasirodyti nesant ŽIV užsikrėtimo hepatitu, kai kuriomis lėtinėmis medžiagų apykaitos ligomis arba nėštumo metu. Tokiu atveju imunoblotas taps neigiamas arba bus nustatyta neapibrėžto rezultato priežastis.

Kiek kainuoja analizė?

ŽIV imunoblotas netaikomas pigiems tyrimams. Vidutiniškai atrankos tyrimas naudojant fermentinį imuninį tyrimą kainuoja nuo 500 iki 900 rublių. Imunoblotavimas yra patikrinimo tyrimas, kurio kaina yra nuo trijų iki penkių tūkstančių rublių. Sudėtingesni metodai yra daug brangesni. Pavyzdžiui, už polimerazės grandininės reakcijos (PGR) analizę turėsite sumokėti apie 12 000 rublių.

Kur atlikti analizę?

Kur galiu išsitirti dėl ŽIV? ELISA, imunoblotiniai tyrimai atliekami miesto privačiose klinikose, rezultatai išduodami per dieną. Taip pat galima nedelsiant diagnozuoti. Valstybinėse gydymo įstaigose ELISA tyrimai ir imunoblotingas atliekami nemokamai, remiantis Rusijos Federacijos teisės aktais. Nėščios moterys, taip pat pacientai, kuriuos ketinama hospitalizuoti ar operuoti, privalo pasitikrinti dėl infekcinių ligų.

hipotenzija, tachikardija, dusulys, cianozė. Sunkiais ligos atvejais galimas kraujavimas, vėmimas su kraujo priemaiša. Padidėja kepenys ir blužnis. Atkreipkite dėmesį į oliguriją. Nuolat aukšta temperatūra išlieka 3–10 dienų. Periferiniame kraujyje - neutrofilinė leukocitozė su formulės poslinkiu į kairę. Be aprašytų bendrųjų maro apraiškų, išsivysto ir atskiroms klinikinėms ligos formoms būdingi pažeidimai.

Odos forma yra reta (3–5%). Infekcijos įėjimo vartų vietoje atsiranda dėmė, tada papulė, pūslelė (konfliktas), užpildyta seroziniu hemoraginiu turiniu, apsupta infiltruotos zonos su hiperemija ir edema. Fliktenui būdingas stiprus skausmas. Atidarius susidaro opa su tamsiu šašu ​​apačioje. Maro opa pasižymi ilga eiga, gyja lėtai, susidaro randas. Jei šią formą komplikuoja septicemija, atsiranda antrinių pustulių ir opų. Galbūt regioninio bubo (odos-buboninės formos) išsivystymas.

Buboninė forma pasitaiko dažniausiai (apie 80%) ir jai būdinga gana gerybinė eiga. Nuo pirmųjų ligos dienų regioninių limfmazgių srityje atsiranda aštrus skausmas, dėl kurio sunku judėti ir pacientas užima priverstinę padėtį. Pirminis bubo, kaip taisyklė, yra pavienis, daugybiniai bubo pastebimi rečiau. Daugeliu atvejų pažeidžiami kirkšnies ir šlaunikaulio limfmazgiai, kiek rečiau – pažasties ir kaklo limfmazgiai. Bubo dydžiai skiriasi nuo graikinio riešuto iki vidutinio dydžio obuolio. Ryškios savybės yra aštrus skausmas, tanki konsistencija, sukibimas su apatiniais audiniais, kontūrų lygumas dėl periadenito vystymosi. Bubo pradeda formuotis antrą ligos dieną. Jai vystantis, oda virsta raudona, blizga, dažnai melsva. Pradžioje tankus, vėliau suminkštėja, atsiranda svyravimas, kontūrai tampa neryškūs. 10-12 ligos dieną atsidaro - fistulė, susidaro išopėjimas. Esant gerybinei ligos eigai ir šiuolaikinei antibiotikų terapijai, stebima jos rezorbcija arba sklerozė. Dėl hematogeninio patogeno įvedimo gali susidaryti antriniai burbuliukai, kurie atsiranda vėliau ir yra mažo dydžio, mažiau skausmingi ir, kaip taisyklė, nesupūliuoja. Didžiulė šios formos komplikacija gali būti antrinės plaučių ar antrinės septinės formos išsivystymas, kuris smarkiai pablogina paciento būklę iki mirties.

Pirminis plaučių forma yra reta, epidemijų laikotarpiu 5-10% atvejų ir yra epidemiologiškai pavojingiausia ir sunkiausia klinikinė ligos forma. Prasideda staigiai, audringai. Atsižvelgiant į ryškų intoksikacijos sindromą, nuo pirmųjų dienų atsiranda sausas kosulys, stiprus dusulys, pjovimo skausmai krūtinėje. Tada kosulys tampa produktyvus, išsiskiriantis skrepliais, kurių kiekis gali skirtis nuo kelių spjaudymų iki didžiulių kiekių, kurių retai visai nėra. Skrepliai iš pradžių putoja, stikliniai, skaidrūs, vėliau įgauna kruviną išvaizdą, vėliau tampa grynai kruvini, juose yra didžiulis kiekis maro bakterijų. Dažniausiai tai būna skystos konsistencijos – vienas iš diagnostinių požymių. Fizinių duomenų nedaug: šiek tiek sutrumpėjęs perkusijos garsas virš pažeistos skilties, auskultacijos metu, negausūs smulkūs burbuliuojantys karkalai, akivaizdžiai neatitinkantys bendros sunkios ligonio būklės. Galutiniam laikotarpiui būdingas padidėjęs dusulys, cianozė, stuporas, plaučių edema ir TSS. Krinta kraujospūdis, padažnėja ir tampa sriegiuotas pulsas, duslūs širdies garsai, hipertermiją pakeičia hipotermija. Negydant liga mirtina per 2–6 dienas. Anksti pradėjus vartoti antibiotikus, ligos eiga yra gerybinė, mažai skiriasi

MPBA-Blot-HIV-1, ŽIV-2 reagentų rinkinys skirtas patvirtinti antikūnų prieš atskirus ŽIV-1 ir (arba) ŽIV-1 grupės O ir (arba) ŽIV-2 baltymus (antigenus) aptikimą žmogaus serume arba plazma imuninio bloto metodu.

Skiriamieji bruožai:

• Reagentų rinkinyje "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" yra išgryninti lizato viruso baltymai ŽIV 1 ir peptidas - antigeninis determinuotas ŽIV-2 gp36;
• Suteikia antikūnų prieš ŽIV-1, ŽIV-1 grupės O, ŽIV 2 aptikimą vienoje juostoje;
• Paprasta analizės rengimo ir atlikimo procedūra;
• Vidinė reakcijos kokybės kontrolė*
• Maksimalus analizės greitis (3 valandos);
• Nedidelis tiriamojo mėginio tūris - 20 µl;
• Nereikalauja papildomos įrangos tyrimams;
• Rinkinio kokybę garantuoja rusiškų ir tarptautinių standartų pavyzdžiai**

* Vidinę kokybės kontrolę užtikrina:

• vidinės kontrolės juostelės, užtikrina serumo ar plazmos mėginio įvedimo kontrolę;
• kontrolinis neigiamas serumas (K-);
• kontrolinis teigiamas serumas (K+), leidžiantis identifikuoti juostelėje aptiktas juosteles;
• kontrolinis silpnai teigiamas serumas (K + cl), kuris užtikrina reagento rinkinio jautrumo kontrolę.

**Kokybės užtikrinimas:

MPBA-Blot-HIV-1, ŽIV-2 reagentų rinkinio charakteristikos buvo nustatytos tiriant mėginius iš atsitiktinės donorų imties, pacientų, kuriems diagnozuota ŽIV infekcija, komercines serokonversijos grupes, standartines grupes ir mėginius, kurie gali "trukdyti" nustatymas“ komponentai.

Reagentų rinkinys neduoda klaidingai teigiamų rezultatų tiriant standartinės grupės serumus, kuriuose nėra antikūnų prieš ŽIV 1.2 ir ŽIV-1 antigeną ("Standartinis AT (-) HIV", Nr. FSR 2007/00953, 10.25 d. .2007). Specifiškumas – 100%.

Diagnostinis specifiškumas nustatytas ištyrus atsitiktinę 200 donorų atranką iš įvairių kraujo centrų ir klinikų, kurių preliminariai patvirtinta, kad nėra ŽIV-1, ŽIV-2 infekcijos. Specifiškumas tiriant atsitiktinę donorų imtį buvo 100 %;

Reagentų rinkinio specifiškumas buvo nustatytas tiriant 250 mėginių, įskaitant serumo ar plazmos mėginius, paimtus iš nėščių moterų, hospitalizuotų pacientų, pacientų, sergančių hepatitu C ir E, ir mėginius su „galimai trukdančiais nustatymui“ komponentais. Naudojant MPBA-Blot-HIV-1, ŽIV-2 rinkinį, šių mėginių klaidingai teigiamų rezultatų nerasta.

Diagnostinis jautrumas buvo nustatytas naudojant:
- Plazmos mėginiai iš Boston Biomedica, Inc. ŽIV-1 grupės (WWRB 301) iš skirtingų regionų, kuriuose yra skirtingų ŽIV-1 potipių: M grupės (A, B, C, D, E, F potipiai) ir O grupės; reagento rinkinio jautrumas buvo 100 %;

Reagentų rinkinio jautrumas buvo nustatytas tiriant tarptautines serokonversijos plokštes Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), kat. nrs. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 930

Reagentų rinkinys aptinka antikūnus prieš ŽIV-1 standartinio skydelio, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1 („Standartinis AT (+) HIV-1“, Nr. FSR 2007/00953, 2007 m. spalio 25 d.), serume, aptinka antikūnus. į ŽIV-2 standartinės grupės, kurioje yra antikūnų prieš ŽIV-2, serume ("Standartinis AT (+) HIV-2", Nr. FSR 2007/00953, 2007-10-25). Jautrumas – 100%.

2011 m. liepos 13 d. registracijos liudijimas Nr. FSR 2010/07958 (galiojimas neribojamas)

Junginys:

• Imunosorbentas. Baltos nitroceliuliozės membranos juostelės su atskirais ŽIV-1 baltymais (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17), adsorbuotos ant jų elektrotransferiniu būdu ir užteptos ant juostelės sintetiniu ŽIV-2 peptidu, gp36 baltymo ir anti-IgG žmogaus analogas (vidinė kontrolė) - 18 vnt.;
• K- – kontrolinis neigiamas serumas. Žmogaus kraujo serumas, kuriame nėra antikūnų prieš ŽIV-1,2, HCV, ŽIV antigeną, HBsAg, inaktyvuojamas kaitinant 560C temperatūroje; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 mėgintuvėlis (0,08 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio ir natrio azido;
• K+ – kontrolinis teigiamas serumas. Žmogaus kraujo serumas, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1,2 (titras ne mažesnis kaip 1:10000), neturintis HBsAg, ŽIV antigeno, antikūnų prieš HCV, inaktyvuotas kaitinant 560C temperatūroje; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 mėgintuvėlis (0,08 ml) Sudėtyje yra konservantų: timerosalio ir natrio azido;
• K+sl – kontrolinis silpnai teigiamas serumas. Žmogaus kraujo serumas, kuriame yra antikūnų prieš ŽIV-1,2 (titras ne didesnis kaip 1:200), neturintis HBsAg, ŽIV antigeno, antikūnų prieš HCV, inaktyvuotas kaitinant 560C temperatūroje; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 mėgintuvėlis (0,08 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio ir natrio azido;
• RROKk (x10) – tirpalas mėginiams ir konjugatui skiesti. Koncentratas – Tris buferis, kuriame yra iš anksto apdorotas normalus ožkos serumas; nepermatomas pilkas skystis - 1 buteliukas (10 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio;
• PRk (x20) - plovimo tirpalas. Koncentratas – Tris buferis, kuriame yra Tween-20; skaidrus bespalvis skystis - 1 buteliukas (70 ml). Sudėtyje yra konservantų: timerosalio;
• Konjugatas. Ožkos antikūnai prieš žmogaus IgG, konjuguoti su šarmine fosfataze; skaidrus bespalvis skystis - 1 mėgintuvėlis (0,06 ml);
• Substratas (dažymasis tirpalas). 5-brom-4-fluor-indolil-fosfato (BCIP) ir nitrozintetrazolio (NBT) tirpalas; skaidrus šviesiai geltonas skystis - 1 buteliukas (50 ml);
• Milteliai imuniniam blotingui. Nugriebto pieno milteliai - amorfiniai balti arba šviesiai geltoni milteliai - 5 pak. x 1g;
• Tabletė su dangteliu reakcijai nustatyti - 2 vnt;
• Plastikiniai pincetai - 1 vnt.