Rusya'da şu anda HIV enfeksiyonunun laboratuvar teşhisi için standart prosedür HIV antikorlarının tespitienzim immunoassay kullanarak ardından reaksiyondaki özgüllüklerinin doğrulanması bağışıklık lekelenmesi.

HIV antikorları, enfekte olanların %90-95'inde enfeksiyondan sonraki 3 ay içinde, %5-9'unda - enfeksiyon anından 6 ay sonra ve %0.5-1'inde - daha sonraki bir tarihte ortaya çıkar. Antikorların saptanması için en erken zaman, enfeksiyon anından itibaren 2 haftadır.

HIV antikorlarının tespiti 2 aşamadan oluşur. ilk aşamada HIV antijenlerine karşı toplam antikor spektrumunun tespiti, çeşitli testler kullanılarak gerçekleştirilir: enzim immünoassay, aglütinasyon, kombine, tarak, membran filtresi veya membran difüzyonu. ikinci aşamada immünoblotlama, virüsün tek tek proteinlerine karşı antikorları belirlemek için kullanılır. Çalışmada, yalnızca Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı tarafından kullanım iznine sahip test sistemlerinin kullanılmasına izin verilmektedir. Teşhis prosedürleri, yalnızca uygun testlerin kullanımına ilişkin onaylanmış talimatlara uygun olarak gerçekleştirilmelidir.

Kan örneklemesi Kübital damardan temiz, kuru bir test tüpüne 3-5 ml miktarında yapılır. Yeni doğanlardan kordon kanı alınabilir. Elde edilen materyalin (tam kan) oda sıcaklığında 12 saatten fazla, buzdolabında 4-8°C'de 1 günden fazla saklanması önerilmez. Yaklaşan hemoliz analiz sonuçlarını etkileyebilir. Serum, santrifüjleme yoluyla veya bir Pasteur pipeti veya cam çubukla test tüpünün duvarı boyunca kanın izlenmesiyle ayrılır. Ayrılan serum temiz (tercihen steril) bir test tüpüne, flakon veya plastik kaba aktarılır ve bu formda 4-8°C sıcaklıkta 7 güne kadar saklanabilir. Çalışırken, 5 Temmuz 1990 tarih ve 42-28 / 38-90 sayılı "AIDS tanı laboratuvarlarında anti-salgın rejime ilişkin talimatlar" da verilen güvenlik kurallarına uymalısınız.

HIV'e karşı toplam antikorların belirlenmesi.

İlk pozitif sonucun alınması üzerine, analiz 2 kez daha yapılır (aynı serumla ve aynı test sisteminde). En az bir pozitif sonuç alınmışsa (üç ELISA testinden iki pozitif sonuç), serum referans laboratuvara gönderilir.

Referans laboratuvarda, birincil pozitif serumlar (yani, ilk test sisteminde iki pozitif sonuç verenler), doğrulama için seçilen ikinci (diğer) test sisteminde ELISA'da yeniden incelenir.

İkinci test sisteminde analizin pozitif bir sonucu alındığında, serum IS'de incelenmelidir.

İkinci test sisteminde negatif sonuç alınırsa üçüncü test sisteminde serum tekrar incelenir.

Hem ikinci hem de üçüncü test sistemlerinde negatif bir test sonucu elde edilirse, HIV'e karşı antikorların bulunmadığına dair bir sonuca varılır.

Üçüncü test sisteminde pozitif bir sonuç elde edildiğinde, serum ayrıca immün blotlamada analize gönderilir.

bağışıklık lekelenmesi.

Yöntemin prensibi, bir nitroselüloz zar üzerinde hareketsiz hale getirilmiş virüsün belirli proteinlerine karşı antikorları tespit etmektir. HIV-1'in zarf proteinleri (env) yaygın olarak glikoproteinler ("gp" veya "gp") olarak adlandırılır ve moleküler ağırlıkları kilodalton (cd) olarak ifade edilir: 160 kd, 120 kd, 41 kd. HIV-2'de glikoproteinlerin ağırlığı 140 kd, 105 kd, 36 kd'dir. HIV-1'deki çekirdek proteinler (gag) (genelde proteinler - "p" veya "r" olarak anılır) sırasıyla 55 kd, 24 kd, 17 kd ve HIV-2 -56 kd, 26 kd moleküler ağırlığa sahiptir. , 18kd. HIV-1 (pol) enzimlerinin moleküler ağırlığı 66 kd, 51 kd, 31 kd, HIV-2-68 kd'dir.

İmmünoblotlama sonuçları pozitif, belirsiz ve negatif olarak yorumlanır.

pozitif(pozitif), 2 veya 3 HIV glikoproteinine karşı antikorların tespit edildiği örnekler olarak kabul edilir.

olumsuz(negatif), HIV'in herhangi bir antijenine (protein) karşı antikor tespit etmeyen serumlardır.

Bir HIV glikoproteinine ve/veya HIV proteinlerinden herhangi birine karşı antikorları saptayan numuneler kabul edilir. şüpheli(tanımsız veya yorumlanamaz).

HIV-1 antijenleri ile bağışıklık lekesinde çekirdek proteinlere (gag) karşı antikorlarla belirsiz bir sonuç elde edildiğinde, HIV-2 antijenleri ile bir test yapılır.

İmmün lekelemenin pozitif sonuçlarının alınması üzerine, test materyalinde HIV'e karşı antikorların varlığı hakkında bir sonuca varılır.

Negatif bir test sonucunun alınması üzerine, IB, HIV'e karşı antikor bulunmadığına dair bir karar verir.

Belirsiz bir sonuç alındıktan sonra (p24 antijeni tespit edilmediyse), 3 ay sonra HIV antikorları için tekrarlanan testler yapılır,

ve 3 ay sonra belirsiz sonuçları korurken. p24 antijeni tespit edilirse, ilk belirsiz sonucu aldıktan 2 hafta sonra ikinci bir inceleme yapılır.

İlk muayeneden 6 ay sonra tekrar belirsiz sonuçlar alınırsa ve hasta enfeksiyon için risk faktörleri ve HIV enfeksiyonunun klinik semptomları yoksa, sonuç yanlış pozitif olarak kabul edilir. (Epidemiyolojik ve klinik endikasyonlar varsa serolojik çalışmalar reçete edildiği şekilde tekrarlanır).

Rekombinant virüse özgü polipeptitler "HIV blot" kullanılarak immün lekeleme, viral proteinlerin kendilerini değil, rekombinant polipeptitleri - HIV antijenlerinin analoglarını ("Env1", "Gag1", "Anket", "Env2") kullanması bakımından farklılık gösterir. Rekombinant Env1 polipeptidi, HIV-1 gp120 ve gp41'e karşı antikorları, Gag1 polipeptidini p17 ve p24 antijenlerine, Po11 polipeptidini p51 antijenine, Env2 polipeptidini HIV-2 gp110 ve gp38 antijenlerine karşı doğrudan tespit eder. Serum, Env1 veya Env2 veya her iki Env (HIV tip 1 ve 2 ikili enfeksiyon) ile reaksiyona girerse pozitif olarak kabul edilir. Yalnızca Poll ve Gag ile bir reaksiyon belirsiz bir sonuç olarak kabul edilir, bu durumda takip, HIV lizatı kullanan klasik bir immünoblotun belirsiz sonuçları vakalarına benzer şekilde gerçekleştirilir.

HIV ile enfekte annelerden doğan çocuklarda HIV enfeksiyonunun serolojik tanısının özellikleri, hem enfekte hem de enfekte olmayan çocukların yaşamın ilk 6-12 ayında anne kaynaklı HIV'e karşı antikorlara sahip olmaları ve bu antikorların daha sonra kaybolabilmesidir. Bir çocukta HIV enfeksiyonunun varlığını gösteren kriter, 18 aylık veya daha büyük yaşta HIV'e karşı antikorların saptanmasıdır. HIV ile enfekte bir anneden doğan 18 aylık bir çocukta HIV antikorlarının bulunmaması HIV enfeksiyonuna karşı bir kriterdir.

Tanım

belirleme yöntemiİmmünoblot.

İncelenen malzeme Serum

Ev ziyareti mevcut

Antinükleer antikorlar, ribonükleik asitlere ve bunlarla ilişkili proteinlere bağlanan bir otoantikor ailesidir. Yaygın bağ dokusu hastalıkları olan hastaların %90'ından fazlasında ortaya çıkarlar ve sıklıkla otoimmün karaciğer hastalıklarında ve bir dizi başka durumda da gözlenirler. Bugüne kadar, bu otoantikor ailesinin yaklaşık 200 çeşidi karakterize edilmiştir, ancak hepsi klinik uygulamada kullanılamaz.

Antinükleer antikorların immünoblotu, ana sistemik romatizmal hastalıkların ayırıcı tanısını sağlayan bir testte aynı anda 15 ana antinükleer antikor tipini incelemeye izin verir. İmmünoblot tarafından tespit edilen her bir otoantikor tipi genellikle karakteristik bir klinik tabloya sahip hastalarda gözlenir, bu nedenle otoantikorların spektrumu sadece hastalığı teşhis etmekle kalmaz, aynı zamanda belirli klinik belirtileri geliştirme riskini de belirler.

Bir antinükleer antikor immünoblotunun, deneğin serumunda antinükleer antikorların varlığını gösteren diğer testlerin pozitif sonucu ile serolojik muayenenin ikinci aşamasında kullanılması tavsiye edilir. Bu testler, antinükleer antikorların belirlenmesini (ELISA taraması), Hep2 hücrelerinde antinükleer faktörün (ANF) saptanmasını (), antinükleer antikorları ve ekstrakte edilebilir nükleer antijene (ENA,) karşı antikorları içerir.

Sistemik romatizmal hastalıkların tanısında antinükleer antikorların immünoblot yöntemi, yüksek klinik özgüllük ile karakterize edilir. Ancak, ANF'nin () yüksek titrelerinde bile antinükleer antikorların özgüllüğünü belirlemek her zaman mümkün değildir, çünkü bir dizi antinükleer antikor antijeni hala karakterize edilmemiştir. Bu durumda negatif bir immünoblot sonucu, sistemik romatizmal hastalıkların tanısını dışlamaz. Bir immünoblot - miyozite özgü otoantikorlar paneli () ve bir immünoblot - sklerodermada () bir otoantikor paneli kullanılarak bir dizi antinükleer antikor tespit edilebilir.

Edebiyat

1. Lapin S.V. Totolyan A.A. Otoimmün hastalıkların immünolojik laboratuvar teşhisi / "Chelovek" Yayınevi, St. Petersburg - 2010. 272 ​​​​s.
2. Nasonov E.L., Aleksandrova E.N. Romatizmal hastalıkların laboratuvar teşhisi için modern standartlar. Klinik kılavuzlar / BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Organa Özgü Otoimmün Hastalıklarda Otoantikorlar: Bir Teşhis Referansı/ PABST, Dresden - 2011. 300 s.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Sistemik Otoimmün Hastalıklarda Otoantikorlar: Tanısal Bir Referans/ PABST, Dresden - 2007. 300 s.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Otoantikorlar 2. baskı/ Elsevier Science - 2006. 862 s.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Otoimmün Hastalıklarda Tanı Kriterleri / Humana Press - 2008. 598 s.
7. Reaktif Kiti Talimatları.

Eğitim

Son yemekten 4 saat sonra dayanması tercih edilir, zorunlu bir gereklilik yoktur.

Randevu için endikasyonlar

Test, aşağıdaki durumların teşhisi ve ayırıcı tanısı için endikedir:

• sistemik lupus eritematoz;
• subakut kutanöz lupus ve diğer kutanöz lupus türleri;
• karışık bağ dokusu hastalığı;
• Sjögren sendromu ve ilişkili hastalıklar;
• yaygın ve lokalize skleroderma, CREST sendromu;
• inflamatuar miyopatiler (polimiyozit ve dermatomiyozit);
• jüvenil kronik artrit;
• otoimmün hepatit;
• primer biliyer siroz ve sklerozan kolanjit;
• Bu testin kullanımı, antinükleer faktörün yüksek titrelerinin, antinükleer antikorların, ekstrakte edilebilir nükleer antijene karşı antikorların, DNA'ya karşı antikorların, nükleozomlara karşı antikorların ve antifosfolipid antikorların saptanması için endikedir.

Sonuçların yorumlanması

Test sonuçlarının yorumlanması, ilgilenen hekim için bilgi içerir ve bir teşhis değildir. Bu bölümdeki bilgiler kendi kendine teşhis veya kendi kendine tedavi için kullanılmamalıdır. Doktor tarafından hem bu muayenenin sonuçları hem de diğer kaynaklardan gerekli bilgiler kullanılarak doğru bir teşhis konur: tarih, diğer muayenelerin sonuçları, vb.

Ölçü birimleri: kalitatif test, sonuç "tespit edildi" veya "bulunamadı" şeklinde sunulur.

Herhangi bir antikor tipinin varlığını karakterize eden bir bant tespit edildiğinde, bandın renk yoğunluğu ayrıca tanımlanan antikor tiplerinin her biri için artıların ("çaprazlar") sayısı ile tanımlanır. Pozitiflik derecesindeki bir artış, otoantikorların içeriğini ve afinitesini dolaylı olarak yansıtır.

Referans değerleri: Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNA, Histon, Nucleosome'a ​​karşı antikorlar , Rib P, AMA-M2, Jo-1 bulunamadı.

Otoantikorların belirlenmesinin sonucu, karşılık gelen her bir antijen için "çaprazlar" olarak sunulur. Seropozitivite derecesindeki bir artış, otoantikorların içeriğini ve afinitesini dolaylı olarak yansıtır. Seropozitivite skoru seçenekleri aşağıda listelenmiştir:

1. Antikor bulunamadı.
2. +/- - sınırda sonuç;
3. + - belirli bir antijene karşı düşük otoantikor içeriği;
4. ++, belirli bir antijene yönelik otoantikorların ortalama içeriğidir;
5. +++ - belirli bir antijene karşı yüksek otoantikor içeriği.

Antinükleer antikorların tespiti ile ilişkili ana hastalıklar:

Antijen	Anlam
Sm (Smith)	Sistemik lupus eritematozus için spesifik belirteç (Amerikan Romatoloji Koleji, ACR'nin SLE için 10. kriterine dahildir)
SS-A (Ro52)	Çeşitli otoimmün hastalıklarda, daha sıklıkla sistemik lupus eritematozus ve cilt formlarında, sistemik romatizmal hastalıklarda, romatoid artrit, otoimmün karaciğer hastalıkları vb.
SS-A (Ro60)	Sistemik lupus eritematozus, lupus eritematozusun kutanöz formları, sistemik lupus eritematozusta ışığa duyarlılık, yüksek konjenital lupus eritematozus ve fetal kalp hastalığı riski. Sjögren sendromundaki ana serolojik gösterge. Genellikle SS-A (Ro52) antijenine karşı antikorlarla birlikte not edilir.
SS-B	Sjögren sendromu, sistemik lupus eritematozus.
PCNA	Sistemik lupus eritematozus, lupus nefriti riski.
Ribozomlar (Ribo P)	Sistemik lupus eritematozus, merkezi sinir sistemine zarar verme riski.
nükleozomlar	Sistemik lupus eritematozus, yüksek lupus glomerülonefrit riski.
çift ​​sarmallı DNA	Sistemik lupus eritematozusun spesifik belirteci (SLE ACR'nin 10. kriterine dahildir), yüksek lupus nefriti riski.
snRNP/Sm	Karışık bağ dokusu hastalığı, düşük böbrek hasarı riski olan sistemik lupus eritematozus, skleroderma.
Histonlar	Sistemik lupus eritematozus, ilaca bağlı lupus, skleroderma.
Scl-70	Deri ve iç organların yaygın lezyonları olan sistemik skleroz.
PM-Scl	Polimiyozitli skleroderma.
CENP-B	Sklerodaktili, telenjiektaziler, deri altı kalsifikasyonlar, Raynaud sendromu, özofajit ile CREST sendromu.
Jo-1	Antisentaz sendromu şeklinde polimiyozit.
AMA-M2	Primer biliyer siroz, Sjögren sendromu.

İmmünoblotlama (immünoblot), elde edilen pozitif veya belirsiz test sonuçları olan hastalar için tanıyı doğrulayan oldukça spesifik ve oldukça hassas bir referans yöntemidir. RPHA veya ELISA kullanarak .

Tek tek patojen antijenlerine karşı antikorları saptamaya yönelik bu yöntem, jel elektroforezi ile ayrılmış, belirli proteinlerin ayrı bantlar şeklinde uygulandığı nitroselüloz membranlar üzerindeki ELISA'ya dayanır. Belirli antijenlere karşı antikorlar varsa, karşılık gelen şerit lokusunda koyu bir çizgi belirir. İmmünoblotun benzersizliği, yüksek bilgi içeriğinde ve elde edilen sonuçların güvenilirliğinde yatmaktadır.

Araştırma materyali insan serumu veya plazmasıdır. Bir strip üzerinde araştırma için 1.5-2 ml kan veya 15-25 µl serum gereklidir.

WHO tavsiyesine göre, HIV enfeksiyonunun tanısında ELISA sonuçlarını doğrulaması gereken ek bir uzman yöntemi olarak immünoblotlama (western blot) kullanılır. Bu yöntem genellikle, daha karmaşık ve pahalı olmasına rağmen daha hassas ve spesifik olduğu düşünüldüğünden, pozitif bir ELISA sonucunu iki kez kontrol etmek için kullanılır.

İmmünoblotlama, enzim immünoassay (ELISA) ile virüs proteinlerinin bir jel içinde ön elektroforetik olarak ayrılması ve bir nitroselüloz membrana transferini birleştirir. İmmünoblot prosedürü birkaç aşamadan oluşur. İlk olarak, önceden saflaştırılan ve bileşen bileşenlerine yok edilen HIV, elektroforeze tabi tutulurken, virüsü oluşturan tüm antijenler moleküler ağırlıkla ayrılır. Daha sonra, lekeleme ile antijenler jelden bir nitroselüloz şeridine veya bir naylon filtreye aktarılır; bu şeritler artık HIV'e özgü, gözle görülmeyen bir protein spektrumu içerir. Daha sonra test materyali (serum, hastanın plazması vb.) şeride uygulanır ve numunede spesifik antikorlar varsa, bunlara kesinlikle karşılık gelen antijen protein şeritlerine bağlanırlar. Daha sonraki manipülasyonların bir sonucu olarak (ELISA gibi), bu etkileşimin sonucu görselleştirilir - görünür hale getirilir. Şeridin belirli alanlarında şeritlerin varlığı, çalışılan serumda kesin olarak tanımlanmış HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını doğrular.

İmmünoblotlama en yaygın olarak HIV enfeksiyonu tanısını doğrulamak için kullanılır. WHO, HIV zarf proteinlerinden herhangi ikisine karşı antikorların immünoblotlama ile tespit edilmesi durumunda serayı pozitif olarak değerlendirir. Bu önerilere göre, zarf proteinlerinden (gp160, gp120, gp41) sadece biriyle kombinasyon halinde veya diğer proteinlerle reaksiyona girmeden reaksiyon varsa, sonuç şüpheli kabul edilir ve farklı bir kit kullanılarak ikinci bir çalışma önerilir. seri veya başka bir şirketten. Bundan sonra sonuç şüpheli kalırsa, çalışmalara her 3 ayda bir devam edilir.

özellikler

İmmünoblot analizi, birinci ve ikinci tip HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını belirlemenizi sağlayan güvenilir bir yöntemdir. Bir kişiye virüs bulaşırsa, iki hafta içinde antikorlar ortaya çıkar ve bu çok daha sonra tespit edilebilir. HIV'in özelliği, antikor sayısının hızla artması ve hastanın kanında kalmasıdır. Mevcut olsalar bile, hastalık iki veya daha fazla yıl boyunca kendini göstermeyebilir. ELISA yöntemi, hastalığın varlığını her zaman doğru bir şekilde belirlemez, bu nedenle, enzim immünolojik testi pozitifse, immünoblotlama ve PCR kullanılarak sonuçların doğrulanması gerekir.

Randevu için endikasyonlar

Bu "immünoblot" nedir, zaten bulundu, ancak bu çalışma kime reçete edildi? İnsan immün yetmezlik virüsü (HIV) için immünoblotlama ile test yaptırmanın nedeni, pozitif bir ELISA sonucu. Ameliyat olacak hastalarda enzim immunoassay yapılması gerekir. Ayrıca hamilelik planlayan kadınlar ve cinsel ilişkiye giren herkes için bir analiz yapılmalıdır. ELISA sonuçlarından şüpheniz varsa, HIV hastalarına immünoblotlamayı atayın.

Aşağıdaki endişe verici belirtiler doktora gitme nedeni olabilir:

• keskin kilo kaybı;
• zayıflık, çalışma kapasitesi kaybı;
• üç hafta süren bağırsak bozukluğu (ishal);
• vücudun dehidrasyonu;
• ateş;
• vücutta şişmiş lenf düğümleri;
• kandidiyaz gelişimi, tüberküloz, pnömoni, toksoplazmoz, herpes alevlenmesi.

Hastanın venöz kan bağışı yapmadan önce hazırlanmasına gerek yoktur. Çalışmadan 8-10 saat önce yemek yiyemezsiniz. Kan bağışından bir gün önce alkollü ve kahveli içeceklerin içilmesi, ağır fiziksel egzersizlerin yapılması, heyecan yaşanması önerilmez.

Araştırma nasıl yapılır?

Hastanın bakış açısından, immünoblot başka herhangi bir analizden farklı değildir: venöz kan alınır, incelenir ve sonuç alınır. Ancak teknik hakkında biraz daha ayrıntıya girerseniz, o zaman çok basit değil, ama yine de anlamaya çalışın.

İlk olarak, reaktif üretim tesisinde bir "referans" insan immün yetmezlik virüsü alınır. Daha sonra jel ortamında özel bir prosedür (elektroforez) kullanılarak virüs en küçük bileşenlerine kadar yok edilir: proteinler (virüs antijenleri). Daha sonra, lekelemenin kendisi kullanılarak (İngiliz ıslatmasından), parçacıklar özel bir malzemeye yerleştirilir - nitroselüloz veya bir naylon filtre, şerit adı verilen kullanıma hazır bir gösterge elde edilir. Şerit, antijenlerin moleküler ağırlıklarına bağlı olarak, net bir sırayla dağıtıldığı, yani her milimetre kağıda karşılık gelen belirli bir proteinin bulunduğu bir şerittir.

Bildiğiniz gibi, insan kanında virüsler varsa, vücut onların kabuklarına (belirli proteinler) karşı antikorlar üretmeye başlar ve her virüsün kendi antijen proteinleri vardır. Kandaki antijen proteinlerine karşı antikorların tespiti, immünoblot yönteminin temelidir. Sonuçta, bir antikor bir antijenle çarpışırsa, o zaman kesinlikle birbirleriyle etkileşime girerler - “yapışırlar”.

Bu nedenle, antijenler şerit şeridindedir ve test deneğinin kanında uygun antijenler varsa, bunlar mutlaka birbirleriyle etkileşime girecek ve bu yerde şerit şeridinde bir gösterge görünecektir - bir düz görünecektir (hamilelik testi gibi). Ayrıca, şeridin belirli bir yerinde, bu şekilde doktor, kanda belirli bir virüsün karakteristiği olan bir dizi protein olup olmadığını anlayacaktır.

Yani, örneğin, protein lokalizasyonu yerlerinde şerit üzerinde bir kararma varsa gp160, gp120, gp41 HIV teşhisi konur, diğer virüsler için tamamen farklı bir protein seti olacaktır.

İmmünoblotun, yalnızca kandaki antikor seti tamamlandığında, yani gp160, gp120, gp41 proteinleri aynı anda mevcutsa, virüsün varlığını doğru bir şekilde belirlemenize izin verdiğine dikkat edilmelidir. %100 HIV enfeksiyonu. Ancak en az biri eksikse, örneğin: gp41 yoksa, ancak yalnızca gp160, gp120 varsa, o zaman test şüpheli olarak kabul edilir ve tekrar gerektirir.

SSS

İmmünoblotun aşamaları nelerdir?

1. Şerit hazırlığı. Daha önce saflaştırılıp bileşenlerine kadar yok edilen immün yetmezlik virüsü (HIV), elektroforeze tabi tutulurken, HIV'i oluşturan antijenler moleküler ağırlıklarına göre ayrıştırılır. Daha sonra, lekeleme ile ("kurutucu" üzerindeki fazla mürekkebi sıkmaya benzer şekilde), antijenler, gözle görülmeyen HIV'e özgü bir antijenik bant spektrumu içeren bir nitroselüloz şeridine aktarılır.
2. Örnek çalışma. Test materyali (serum, hastanın kan plazması vb.) nitroselüloz şeridine uygulanır ve numunede spesifik antikorlar varsa, kesinlikle karşılık gelen (tamamlayıcı) antijenik bantlara bağlanır. Müteakip manipülasyonların bir sonucu olarak, bu etkileşimin sonucu görselleştirilir - görünür hale getirilir.
3. Sonucun yorumlanması. Nitroselüloz plakasının belirli alanlarında bantların varlığı, çalışılan serumda kesin olarak tanımlanmış HIV antijenlerine karşı antikorların varlığını doğrular.

• Şerit A - Pozitif Kontrol
• Şerit B - Zayıf pozitif kontrol
• Şerit C - Negatif Kontrol
• Şerit D - Pozitif numune (HIV-1 antikorları tespit edildi)

Analiz nasıl deşifre edilir?

ELISA, bu test sistemine göre antijenlere karşı tüm veya hemen hemen tüm antikorların varlığını gösterdiyse, bu, pozitif bir HIV testi olduğunu gösterir. İkinci serolojik enzim immün testinin ardından yanıt pozitifse, bir immünoblot yapılmalıdır. Sonuçlarının yorumlanması daha doğru olacaktır. Enzim bağlı immünosorbent testi pozitif sonuç verdiyse, sonraki immünoblot analizi de HIV varlığını gösterdi, ardından nihai sonuç konur.

Analizler deşifre edildiğinde, pozitif bir HIV testinin aşağıdakiler tarafından belirlendiğini bilmeniz gerekir:

• enfeksiyondan 28 gün sonra %60 ila %65;
• %80 - 42 gün sonra;
• % 90 - 56 gün sonra;
• % 95 - 84 gün sonra.

HIV'e yanıt pozitifse, bu, virüse karşı antikorların tespit edildiği anlamına gelir. Yanlış bir pozitif yanıttan kaçınmak için, tercihen iki kez tekrar test etmek gerekir. İki testten ikisinde veya 2 testte 3 testten geçildiğinde immün yetmezlik antikorları tespit edilirse, sonucun pozitif olduğu kabul edilir.

p24 antijeni, enfeksiyon tarihinden itibaren 14 gün gibi kısa bir sürede kanda tespit edilebilir. Enzim immunoassay yöntemi kullanılarak bu antijen 14 ila 56 gün arasında tespit edilir. 60 gün sonra artık kanda yok. Ancak vücutta AIDS oluştuğunda bu p24 proteininin kanda yeniden büyümesi gerçekleşir. Bu nedenle, enfeksiyonun ilk günlerinde HIV'i tespit etmek veya hastalığın nasıl ilerlediğini belirlemek ve tedavi sürecini izlemek için enzim immunoassay test sistemleri kullanılmaktadır. Enzim immün testinin yüksek analitik hassasiyeti, birinci alt tip HIV için biyolojik materyaldeki p24 antijenini 5 ila 10 pg/ml konsantrasyonda, ikinci alt tip HIV için ise 0,5 ng/ml veya daha azını tespit eder.

Altında şüpheli Bir enzim immün testinin sonucu, tanının bir yerde yanlış olduğunu, kural olarak, sağlık çalışanlarının bir şeyi karıştırdığını veya kişinin enfeksiyon belirtileri olduğunu ve sonucun negatif olduğunu, bu da şüpheye neden olduğunu, kişinin yeniden test için gönderildiğini ima eder. .

Altında yanlış pozitif Sonuç, hastanın aşağıdaki koşullarda kan testleri yapıldığında ortaya çıkan sonuç olarak anlaşılır:

• gebelik;
• bir kişinin hormonal dengesizliği varsa;
• Uzun süreli immünosupresyon ile.

Bu durumda analiz nasıl deşifre edilir? En az bir protein tespit edilirse yanlış pozitif sonuç verilir. p24 antijeninin bireysel varyasyonlara çok bağlı olması nedeniyle, bu yöntem kullanılarak hastaların %20 ila %30'u enfeksiyonun ilk döneminde tespit edilir.

Pozitif bir test sonucu ne kadar güvenilir?

Bazen ELISA'nın yanlış pozitif sonuçları vardır (vakaların yaklaşık %1'inde), bu sonucun nedeni hamilelik, çeşitli viral enfeksiyonlar ve basit bir kaza olabilir. Olumlu bir sonuç aldıktan sonra, daha doğru bir teste ihtiyaç vardır - sonuçlara göre tanı konan bir immünoblot. Pozitif bir ELISA'dan sonra pozitif bir immünoblot sonucu %99,9 güvenilirdir - bu, herhangi bir tıbbi test için maksimum doğruluktur. İmmünoblot negatifse, ilk test yanlış pozitiftir ve aslında kişide HIV yoktur.

Belirsiz (şüpheli) bir sonuç nedir?

ELISA pozitif veya negatif ise, immünoblot pozitif, negatif veya belirsiz olabilir. Belirsiz immünoblot sonucu, yani. enfeksiyon yakın zamanda meydana geldiyse ve kanda hala az sayıda HIV antikoru varsa, virüse karşı en az bir proteinin immünoblotunda varlığı gözlemlenebilir, bu durumda immünoblot bir süre sonra pozitif hale gelecektir. Ayrıca, hepatit, bazı kronik metabolik hastalıklar veya hamilelik sırasında HIV enfeksiyonunun yokluğunda belirsiz bir sonuç ortaya çıkabilir. Bu durumda ya immünoblot negatif olacak ya da belirsiz sonucun nedeni bulunacaktır.

Analiz ücreti ne kadar?

HIV için immünoblot, ucuz araştırmalar için geçerli değildir. Ortalama olarak, enzim immünoassay ile yapılan bir tarama muayenesinin maliyeti 500 ila 900 ruble arasındadır. İmmünoblotlama, maliyeti üç ila beş bin ruble arasında olan bir doğrulama çalışmasıdır. Daha karmaşık yöntemler çok daha pahalıdır. Örneğin, polimeraz zincir reaksiyonunun (PCR) analizi için yaklaşık 12.000 ruble ödemeniz gerekecek.

Analiz nerede yapılır?

HIV için nerede test yaptırabilirim? ELISA, şehir içi özel kliniklerde immunoblot çalışmaları yapılmakta, sonuçlar bir gün içerisinde açıklanmaktadır. Anında teşhis de mümkündür. Devlet sağlık kurumlarında, ELISA testleri ve immünoblotlama, Rusya Federasyonu mevzuatına uygun olarak ücretsiz olarak gerçekleştirilir. Hamile kadınların yanı sıra hastaneye kaldırılacak veya ameliyat olacak hastaların bulaşıcı hastalıklar için test edilmesi gerekmektedir.

hipotansiyon, taşikardi, nefes darlığı, siyanoz. Şiddetli hastalık vakalarında kanama, kan karışımı ile kusma mümkündür. Karaciğer ve dalak büyümüştür. Oliguriye dikkat edin. Sıcaklık 3-10 gün boyunca sürekli olarak yüksek kalır. Periferik kanda - formülün sola kayması ile nötrofilik lökositoz. Vebanın tarif edilen genel belirtilerine ek olarak, hastalığın bireysel klinik formlarının karakteristik lezyonları gelişir.

Deri formu nadirdir (%3-5). Enfeksiyonun giriş kapısı bölgesinde bir nokta belirir, daha sonra hiperemi ve ödem ile sızmış bir bölge ile çevrili seröz hemorajik içeriklerle dolu bir papül, bir vezikül (çatışma) görünür. Flikten şiddetli ağrı ile karakterizedir. Açıldığında, dibinde koyu renkli bir kabuk bulunan bir ülser oluşturur. Bir veba ülseri, uzun bir seyir ile karakterizedir, yavaş iyileşir ve bir yara izi oluşturur. Bu form septisemi ile komplike hale gelirse ikincil püstüller ve ülserler oluşur. Belki de bölgesel bir bubo'nun gelişimi (deri-hıyarcıklı form).

Hıyarcıklı form en sık (yaklaşık %80) oluşur ve nispeten iyi huylu bir seyir ile karakterize edilir. Hastalığın ilk günlerinden itibaren bölgesel lenf düğümleri bölgesinde keskin bir ağrı ortaya çıkar, bu da hareket etmeyi zorlaştırır ve hastanın zorla pozisyon almasına neden olur. Birincil bubo, bir kural olarak, yalnızdır; birden fazla bubo daha az görülür. Çoğu durumda, kasık ve femoral lenf düğümleri etkilenir, aksiller ve servikal lenf düğümleri biraz daha az yaygındır. Bubo boyutları cevizden orta boy elmaya kadar değişir. Parlak özellikler keskin ağrı, yoğun kıvam, alttaki dokulara yapışma, periadenit gelişimine bağlı konturların düzgünlüğüdür. Hastalığın ikinci gününde bubo oluşmaya başlar. Gelişirken, üzerindeki cilt kırmızı, parlak, genellikle siyanotik olur. Başlangıçta yoğundur, sonra yumuşar, dalgalanma görülür, konturlar bulanıklaşır. Hastalığın 10-12. gününde açılır - fistül, ülserasyon oluşur. İyi huylu bir hastalık seyri ve modern antibiyotik tedavisi ile rezorpsiyonu veya sklerozu gözlenir. Patojenin hematojen girişinin bir sonucu olarak, daha sonra ortaya çıkan ve küçük boyutlu, daha az ağrılı ve kural olarak takviye etmeyen ikincil bubolar oluşabilir. Bu formun korkunç bir komplikasyonu, hastanın durumunu ölüme kadar keskin bir şekilde kötüleştiren ikincil bir pulmoner veya ikincil septik formun gelişmesi olabilir.

birincil pulmoner form, vakaların %5-10'unda salgın dönemlerinde nadirdir ve hastalığın epidemiyolojik olarak en tehlikeli ve şiddetli klinik formudur. Keskin, şiddetle başlar. Belirgin bir zehirlenme sendromunun arka planına karşı, kuru öksürük, şiddetli nefes darlığı, göğüste kesme ağrıları ilk günlerden itibaren ortaya çıkar. Öksürük daha sonra üretken hale gelir, miktarı birkaç tükürükten çok büyük miktarlara kadar değişebilen ve nadiren hiç bulunmayan balgam üretir. Balgam, önce köpüklü, camsı, şeffaf, daha sonra kanlı bir görünüm kazanır, daha sonra tamamen kanlı hale gelir, çok miktarda veba bakterisi içerir. Genellikle sıvı bir kıvamdır - tanı işaretlerinden biri. Fiziksel veriler azdır: oskültasyon sırasında etkilenen lob üzerinde perküsyon sesinde hafif bir kısalma, hastanın genel ciddi durumuna açıkça tekabül etmeyen bol olmayan ince köpürme ralleri. Terminal dönem, nefes darlığı, siyanoz, stupor gelişimi, pulmoner ödem ve TSS'de bir artış ile karakterizedir. Tansiyon düşer, nabız hızlanır ve iplik gibi olur, kalp sesleri boğuklaşır, hiperterminin yerini hipotermiye bırakır. Tedavinin yokluğunda, hastalık 2-6 gün içinde ölümcül olur. Antibiyotiklerin erken kullanımı ile hastalığın seyri iyi huyludur, çok az farklılık gösterir.

MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 reaktif kiti, HIV-1 ve/veya HIV-1 grup O ve/veya HIV-2'nin insan serumunda veya immün blot yöntemiyle plazma.

Ayırt edici özellikleri:

• "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" reaktif seti, HIV 1 ve peptit - HIV-2 gp36 antijenik determinatın saflaştırılmış lizat viral proteinlerini içerir;
• Bir şeritte HIV-1, HIV-1 grup O, HIV 2'ye karşı antikorların saptanmasını sağlar;
• Analizleri hazırlamak ve yürütmek için basit bir prosedür;
• Reaksiyonun dahili kalite kontrolü*
• Analizin maksimum hızı (3 saat);
• Test numunesinin küçük bir hacmi - 20 µl;
• Araştırma için ek ekipman gerektirmez;
• Kitin kalitesi, Rus ve uluslararası standart numunelerin kullanılmasıyla garanti edilmektedir**

* İç kalite kontrolü, aşağıdakilerin mevcudiyeti ile sağlanır:

• dahili kontrol şeritleri, bir serum veya plazma numunesinin girişinin kontrolünü sağlar;
• kontrol negatif serum (K-);
• şerit üzerinde tespit edilen bantları tanımlamaya izin veren kontrol pozitif serumu (K+);
• reaktif kitinin duyarlılığının kontrolünü sağlayan zayıf pozitif serumu (K + cl) kontrol edin.

**Kalite güvencesi:

MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 reaktif kitinin özellikleri, rastgele bir donör numunesinden, HIV enfeksiyonu teşhisi konmuş hastalardan, ticari serokonversiyon panellerinden, standart panellerden ve "potansiyel olarak etkileşime giren" numunelerden alınan numunelerin test edilmesiyle belirlendi. belirleme" bileşenleri.

Reaktif kiti, HIV 1.2 ve HIV-1 antijenine karşı antikorlar içermeyen standart panelin serumlarının çalışmasında yanlış pozitif sonuçlar vermez ("Standart AT (-) HIV", No. FSR 2007/00953 / 10/ 25/2007). Özgüllük - %100.

Teşhis özgüllüğü, önceden onaylanmış HIV-1, HIV-2 enfeksiyonu olmayan çeşitli kan merkezlerinden ve kliniklerden 200 donörden oluşan rastgele bir örnek üzerinde çalışılarak belirlendi. Rastgele bir donör örneğinin çalışmasında özgüllük %100 idi;

Reaktif kitinin özgüllüğü, hamile kadınlardan, hastanede yatan hastalardan, hepatit C ve E hastalarından alınan serum veya plazma numuneleri ve "potansiyel olarak enterferans yaratan belirleme" bileşenleri içeren numuneler dahil olmak üzere 250 numunenin çalışmasında belirlendi. MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 kiti kullanıldığında, bu numuneler için yanlış pozitif sonuç bulunamadı.

Teşhis duyarlılığı aşağıdakiler kullanılarak belirlendi:
- Boston Biomedica, Inc. Farklı HIV-1 alt tiplerini içeren farklı bölgelerden HIV-1 panel plazma numuneleri (WWRB 301): grup M (alt tipler A, B, C, D, E, F) ve grup O; reaktif kitinin duyarlılığı %100'dü;

Reaktif kitinin duyarlılığı, uluslararası serokonversiyon panelleri Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), kat. nrs. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932, PRB 940

Reaktif kiti, HIV-1 antikorları içeren standart bir panelin serumlarında HIV-1 antikorlarını tespit eder (“Standart AT (+) HIV-1”, No. FSR 2007/00953, 25 Ekim 2007 tarihli), antikorları tespit eder HIV-2'ye karşı antikorlar içeren standart panelin serumunda HIV-2'ye ("Standart AT (+) HIV-2", No. FSR 2007/00953, 10/25/2007). Hassasiyet - %100.

13 Temmuz 2011 tarihli FSR 2010/07958 kayıt sertifikası (geçerlilik sınırlı değildir)

Birleştirmek:

• İmmünosorbent. Bireysel HIV-1 proteinleri (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) ile üzerlerine elektrotransfer yöntemiyle adsorbe edilen ve sentetik bir HIV-2 peptidi ile şeride uygulanan beyaz nitroselüloz membran şeritleri, gp36 proteininin bir analogu ve insan anti-IgG (iç kontrol) - 18 adet;
• K- - kontrol negatif serum. HIV-1,2, HCV, HIV antijeni, HBsAg'ye karşı antikorlar içermeyen insan kan serumu, 560C'de ısıtılarak inaktive edilir; şeffaf açık sarı sıvı - 1 test tüpü (0.08 mi). Koruyucular içerir: timerosal ve sodyum azid;
• K+ - kontrol pozitif serum. HIV-1,2'ye karşı antikorlar içeren (titre en az 1:10000), HBsAg, HIV antijeni, HCV'ye karşı antikorlar içermeyen, 560°C'de ısıtılarak inaktive edilmiş insan kan serumu; şeffaf açık sarı sıvı - 1 test tüpü (0.08 mi) Koruyucu içerir: timerosal ve sodyum azid;
• K+sl - zayıf pozitif serumu kontrol edin. HIV-1,2'ye karşı antikorlar içeren (titre 1:200'den fazla olmayan), HBsAg, HIV antijeni, HCV'ye karşı antikorlar içermeyen, 560C'de ısıtılarak inaktive edilmiş insan kan serumu; şeffaf açık sarı sıvı - 1 test tüpü (0.08 mi). Koruyucular içerir: timerosal ve sodyum azid;
• RROKk (x10) - numunelerin ve konjugatların seyreltilmesi için çözelti. Konsantre - Ön işleme tabi tutulmuş normal keçi serumu içeren Tris tamponu; opak gri sıvı - 1 şişe (10 mi). Koruyucu içerir: timerosal;
• PRk (x20) - yıkama solüsyonu. Konsantre - Tween-20 içeren Tris tamponu; berrak renksiz sıvı - 1 şişe (70 mi). Koruyucu içerir: timerosal;
• Eşlenik. Alkalin fosfataz ile konjuge edilmiş insan IgG'sine karşı keçi antikorları; berrak renksiz sıvı - 1 test tüpü (0.06 mi);
• Substrat (renklendirme solüsyonu). 5-bromo-4-floro-indolil-fosfat (BCIP) ve nitrosin tetrazolyum (NBT) çözeltisi; şeffaf açık sarı sıvı - 1 şişe (50 mi);
• Bağışıklık lekelenmesi için toz. Yağsız süt tozu - amorf beyaz veya açık sarı toz - 5 paket x 1 g;
• Reaksiyon oluşturmak için kapaklı bir tablet - 2 adet;
• Plastik cımbız - 1 adet.