Přípravky rekombinantního interferonu alfa 2b. Lékařská referenční kniha geotar

Složení interferonových přípravků závisí na jejich formě uvolňování.

Formulář vydání

Přípravky interferonu mají následující formy uvolňování:

• lyofilizovaný prášek pro přípravu očních a nosních kapek, injekční roztok;
• injekční roztok;
• oční kapky;
• filmy na oči;
• nosní kapky a spreje;
• mast;
• dermatologický gel;
• liposomy;
• plechovka spreje;
• perorální roztok;
• rektální čípky;
• vaginální čípky;
• implantáty;
• mikroklyzátory;
• tablety (v tabletách se interferon vyrábí pod obchodním názvem Entalferon).

farmakologický účinek

IFN preparáty patří do skupiny antivirotik a imunomodulačních léků.

Všechny IFN mají antivirovou a protinádorovou aktivitu. Neméně důležitá je jejich schopnost stimulovat akci. makrofágy - buňky hrají důležitá role v zasvěcení.

IFN přispívají ke zvýšení odolnosti organismu vůči průniku viry a blokovat reprodukci viry když vstoupí do cely. To je způsobeno schopností IFN potlačovat translace messenger (messenger) RNA viru .

V čem antivirové působení IFN není namířeno proti určitým viry to znamená, že IFN nejsou charakterizovány virovou specificitou. To vysvětluje jejich všestrannost a široký rozsah antivirové aktivity.

Interferon - co to je?

Interferony jsou třídou s podobnými vlastnostmi glykoproteiny , které jsou produkovány buňkami obratlovců v reakci na vystavení různým typům induktorů, jak virové, tak nevirové povahy.

Podle Wikipedie, aby se biologicky účinná látka byl kvalifikován jako interferon, musí být bílkovinné povahy, mít výrazný antivirová aktivita ve vztahu k různým viry , alespoň v homologních (podobných) buňkách, „zprostředkovaných buněčnými metabolickými procesy, včetně syntézy RNA a proteinů“.

Klasifikace IFN navržená WHO a Interferonovým výborem je založena na rozdílech v jejich antigenních, fyzikálních, chemických a biologických vlastnostech. Navíc zohledňuje jejich druh a buněčný původ.

Podle antigenicity (antigenní specificity) se IFN obvykle dělí na acidorezistentní a acidolabilní. Interferony alfa a beta (také nazývané IFN typu I) jsou acidorezistentní. Interferon gama (γ-IFN) je labilní v kyselém prostředí.

produkce a-IFN leukocyty periferní krve (leukocyty typu B a T), takže byl dříve označován jako leukocytový interferon . V současné době existuje nejméně 14 jeho odrůd.

Produkuje se β-IFN fibroblasty , tak se tomu také říká fibroblastický .

Dřívější označení γ-IFN - imunitní interferon , ale je to stimulováno lymfocyty typu T , NK buňky (normální (přirození) zabijáci; z anglického „natural killer“) a (pravděpodobně) makrofágy .

Hlavní vlastnosti a mechanismus účinku IFN

Bez výjimky jsou všechny IFN charakterizovány polyfunkční aktivitou proti cílovým buňkám. Jejich nejčastější vlastností je schopnost v nich indukovat antivirový stav .

Interferon se používá jako terapeutické a profylaktické činidlo pro různé virové infekce . Charakteristickým rysem přípravků IFN je, že jejich účinek s opakovanými injekcemi slábne.

Mechanismus účinku IFN souvisí s jeho schopností inhibovat virové infekce . V důsledku léčby interferony léky v těle pacienta kolem ohnisko infekce z odolných vůči virus neinfikovaných buněk, což zabraňuje dalšímu šíření infekce.

Interakce se stále neporušenými (intaktními) buňkami zabraňuje provádění reprodukčního cyklu viry aktivací určitých buněčných enzymů ( protein kinázy ).

Nejdůležitější funkcí interferonů je schopnost potlačovat krvetvorba ; modulovat imunitní odpověď těla a zánětlivou odpověď; regulovat procesy buněčné proliferace a diferenciace; inhibují růst a brání reprodukci virové buňky ; stimulovat expresi povrchu antigeny ; potlačit jednotlivé funkce leukocyty typu B a T stimulovat aktivitu NK buňky atd..

Využití IFN v biotechnologiích

Vývoj metod syntézy a vysoce výkonné purifikace leukocyty a rekombinantní interferony v množství dostatečném pro výrobu léčiv umožnilo otevřít možnost použití IFN preparátů pro léčbu pacientů s diagnózou virová hepatitida .

Charakteristickým rysem rekombinantních IFN je to, že jsou produkovány mimo lidské tělo.

Například, rekombinantní interferon beta-1a (IFN β-1a) získaný z buněk savců (zejména z buněk vaječníků čínského křečka) a podobný svými vlastnostmi interferon beta-1b (IFN β-1b) produkovaný členem čeledi Enterobacteriaceae coli (Escherichia coli).

Léky indukující interferon - co to je?

Induktory IFN jsou léky, které samy o sobě neobsahují interferon, ale zároveň stimulují jeho produkci.

Farmakodynamika a farmakokinetika

Hlavním biologickým účinkem α-IFN je inhibice syntézy virových proteinů . Antivirový stav buňky se vyvine během několika hodin po aplikaci léku nebo po indukci produkce IFN v těle.

IFN však neovlivňuje raná stadia replikační cyklus, tedy ve fázi adsorpce, penetrace virus do buňky (penetrace) a uvolnění vnitřní součástvirus v procesu jeho svlékání.

Antivirová akce α-IFN se projevuje i v případě buněčné infekce infekční RNA . IFN nevstupuje do buňky, ale pouze interaguje se specifickými receptory buněčné membrány (gangliosidy nebo podobné struktury obsahující oligocukr ).

Mechanismus aktivity IFN alfa se podobá působení jednotlivce glykopeptidové hormony . Stimuluje aktivitu geny , z nichž některé se podílejí na kódování tvorby produktů s přímým antivirové působení .

β interferony také mají antivirové působení , který je spojen s několika mechanismy účinku najednou. Beta interferon aktivuje NO-syntetázu, která následně zvyšuje koncentraci oxidu dusnatého uvnitř buňky. Ten hraje klíčovou roli v potlačení reprodukce viry .

β-IFN aktivuje sekundární efektorové funkce přírodní zabijáciv , lymfocyty typu B , krevní monocyty , tkáňové makrofágy (mononukleární fagocyty) a neutrofilní které se vyznačují cytotoxicitou závislou a nezávislou na protilátkách.

Kromě toho β-IFN blokuje uvolňování vnitřní složky virus a narušuje metylační procesy virová RNA .

γ-IFN se podílí na regulaci imunitní odpovědi a reguluje její závažnost zánětlivé reakce. I když má vlastní antivirový a protinádorový účinek , gama interferon velmi slabá. Zároveň významně zvyšuje aktivitu α- a β-IFN.

Po parenterálním podání je maximální koncentrace IFN v pozorována po 3-12 hod. Index biologické dostupnosti je 100 % (jak po injekci pod kůži, tak po injekci do svalu).

Trvání poločasu T½ je od 2 do 7 hodin. Stopové koncentrace IFN v plazmě nejsou detekovány po 16-24 hodinách.

Indikace pro použití

IFN je určen k léčbě virová onemocnění ten zásah dýchací trakt .

Kromě toho jsou pacientům předepisovány interferonové přípravky chronické formy hepatitida a delta .

Na léčbu virová onemocnění a zejména se převážně používá IFN-a (oba jsou IFN-alfa 2b a IFN-alfa 2a). "Zlatý standard" léčby hepatitida C považovány za pegylované interferony alfa-2b a alfa-2a. Ve srovnání s nimi jsou konvenční interferony méně účinné.

Genetický polymorfismus zaznamenaný v genu IL28B, který je zodpovědný za kódování IFN lambda-3, způsobuje významné rozdíly v účinku léčby.

Pacienti s genotypem 1 hepatitida C se společnými alelami tohoto genu s větší pravděpodobností dosáhnou delších a výraznějších výsledků léčby ve srovnání s jinými pacienty.

IFN je také často podáván pacientům s onkologická onemocnění : zhoubný , endokrinní nádory pankreatu , non-Hodgkinův lymfom , karcinoidní nádory ; Kaposiho sarkom , kvůli ; vlasatobuněčná leukémie ,mnohočetný myelom , rakovina ledvin atd..

Kontraindikace

Interferon není předepisován pacientům s přecitlivělostí na něj, stejně jako dětem a dospívajícím, kteří trpí těžký duševní poruchy a poruchy nervového systému , které jsou doprovázeny myšlenkami na sebevraždu a pokusy o sebevraždu, těžké a vleklé.

V kombinaci s antivirotikum ribavirin IFN je kontraindikován u pacientů s diagnostikovaným těžkým postižením ledvina (podmínky, při kterých je CC nižší než 50 ml/min).

Interferonové přípravky jsou kontraindikovány v případě (v případech, kdy vhodná terapie nedává očekávaný klinický účinek).

Vedlejší efekty

Interferon patří do kategorie léků, které mohou způsobit velký počet nežádoucí reakce z různých systémů a orgánů. Ve většině případů jsou výsledkem zavedení interferonu do / in, s / c nebo / m, ale mohou je vyvolat i jiné farmaceutické formy léku.

Nejčastější nežádoucí reakce na užívání IFN jsou:

• anorexie;
• nevolnost;
• zimnice;
• chvění v těle.

Zvracení, zvýšené, pocit sucha v ústech, vypadávání vlasů (), astenie ; nespecifické příznaky připomínající příznaky chřipky ; bolest zad, depresivní stavy , muskuloskeletální bolesti , myšlenky na sebevraždu a pokus o sebevraždu, celková malátnost, porucha chuti a koncentrace, zvýšená podrážděnost, poruchy spánku (často), arteriální hypotenze , zmatek.

Vzácné nežádoucí účinky zahrnují: bolest vpravo v horní části břicha, vyrážky na těle (erytematózní a makulopapulární), zvýšená nervozita, bolestivost a těžký zánět v místě vpichu, sekundární virová infekce (včetně infekce virus herpes simplex ), zvýšená suchost kůže, , bolest v očích , zánět spojivek rozmazané vidění, dysfunkce slzné žlázy , úzkost, labilita nálady; psychotické poruchy , včetně zvýšené agresivity atd.; hypertermie , dyspeptické příznaky , poruchy dýchání, hubnutí, řídká stolice, hyper nebo hypotyreóza , poruchy sluchu (až do jeho úplné ztráty), tvorba infiltrátů v plicích, zvýšená chuť k jídlu, krvácení z dásní, na končetinách, dušnost , renální dysfunkce a rozvoj selhání ledvin , periferní ischemie , hyperurikemie , neuropatie atd..

Léčba léky IFN může způsobit reprodukční dysfunkce . Studie na primátech ukázaly, že interferon narušuje menstruační cyklus u žen . Navíc u žen léčených IFN-α byla hladina a in.

Z tohoto důvodu v případě předepisování interferonu ženám v plodném věku by měl být použit bariérová antikoncepce . Mužům v reprodukčním věku se také doporučuje, aby byli informováni o možných vedlejších účincích.

Ve vzácných případech může být léčba interferonem doprovázena oftalmickými poruchami, které jsou vyjádřeny jako krvácení do sítnice , retinopatie (včetně mimo jiné makulární edém ), fokální změny na sítnici, snížená zraková ostrost a/nebo omezené zorné pole, edém disku zrakové nervy , neuritida očního (druhého kraniálního) nervu , arteriální obstrukce nebo retinální žíly .

Někdy se na pozadí užívání interferonu může vyvinout hyperglykémie , příznaky nefrotického syndromu , U pacientů s cukrovka může zhoršit klinický obraz onemocnění.

Nelze vyloučit, že možnost cerebrovaskulární krvácení , multiformní erytém , nekróza tkáně v místě vpichu srdeční a cerebrovaskulární ischemie , hypertriglyceridermie , sarkoidóza (nebo exacerbace jeho průběhu), Lyellovy syndromy a Stevens-Johnson .

Použití interferonu samotného nebo v kombinaci s ribavirin ve vzácných případech může způsobit aplastická anémie (AA) nebo dokonce PAKKM ( kompletní aplazie červené kostní dřeně ).

Byly také případy, kdy se na pozadí léčby interferonovými přípravky u pacienta vyvinuly různé autoimunitní a imunitně podmíněné poruchy (počítaje v to Werlhofova nemoc a Moszkowitzova nemoc ).

Interferon, návod k použití (Metoda a dávkování)

Pokyny pro použití interferonů alfa, beta a gama naznačují, že před předepsáním léku pacientovi se doporučuje určit, jak je na něj citlivý která nemoc způsobila.

Způsob podávání lidského leukocytárního interferonu se určuje v závislosti na diagnóze stanovené pacientovi. Ve většině případů se předepisuje ve formě subkutánních injekcí, ale v některých případech může být lék injikován do svalu nebo žíly.

Dávka pro léčbu, udržovací dávka a délka léčby se stanoví v závislosti na klinické situaci a odpovědi pacientova těla na terapii, která mu byla předepsána.

„Dětským“ interferonem se rozumí lék ve formě čípků, kapek a mastí.

Pokyny pro použití interferonu pro děti doporučují použití tohoto léku jako terapeutického a profylaktického činidla. Dávku pro kojence a starší děti volí ošetřující lékař.

Pro profylaktické účely se INF používá ve formě roztoku, k jehož přípravě se používá destilovaná nebo převařená voda o pokojové teplotě. Hotový roztok je zbarven červeně a opalescentně. V chladu by se měl uchovávat nejdéle 24-48 hodin. Droga se instiluje do nosu dětí a dospělých.

V virový očních onemocnění lék je předepsán ve formě kapek do očí.

Jakmile se závažnost příznaků onemocnění sníží, objem instilací by měl být snížen na jednu kapku. Průběh léčby je od 7 do 10 dnů.

K léčbě lézí způsobených herpesviry , mast se nanáší tenkou vrstvou na postižená místa kůže a sliznic dvakrát denně s dodržením 12hodinových intervalů. Průběh léčby je od 3 do 5 dnů (do úplného obnovení celistvosti poškozené kůže a sliznic).

Pro prevenci ORZ a musí se namazat nosní průchody . Frekvence procedur během 1. a 3. týdne kurzu je 2x denně. Během 2. týdne se doporučuje udělat přestávku. Pro profylaktické účely by měl být interferon používán po celou dobu epidemie respiračních onemocnění .

Délka rehabilitačního kurzu u dětí, které často mají recidivující virové a bakteriální infekce dýchacích cest , Orgány ORL , opakující se infekce zapříčiněno virus herpes simplex , jsou dva měsíce.

Jak chovat a jak používat interferon v ampulích?

Pokyny pro použití interferonu v ampulích uvádějí, že před použitím je třeba ampuli otevřít, nalít do ní vodou (destilovanou nebo převařenou) při pokojové teplotě až po značku na ampuli odpovídající 2 ml.

Obsah se jemně protřepává, dokud se úplně nerozpustí. Do každého se vstříkne roztok nosní průchod dvakrát denně pět kapek, přičemž mezi injekcemi dodržujte intervaly alespoň šesti hodin.

V léčebné účely IFN se zahajují hned jako první příznaky chřipky . Účinnost léku je tím vyšší, čím dříve jej pacient začne užívat.

Nejúčinnější je inhalační metoda(nosem nebo ústy). Pro jednu inhalaci se doporučuje užít obsah tří ampulí léčiva rozpuštěného v 10 ml vody.

Voda se předehřívá na teplotu nepřesahující +37 °C. Inhalační procedury se provádějí dvakrát denně, přičemž mezi nimi je udržován interval nejméně jedné až dvou hodin.

Při postřiku nebo instilaci se obsah ampule rozpustí ve dvou mililitrech vody a vstříkne se 0,25 ml (nebo pět kapek) do každého nosního průchodu třikrát až šestkrát denně. Délka léčby je 2-3 dny.

Pro preventivní účely se kapky do nosu pro děti instilují (5 kapek) dvakrát denně, v počáteční fázi vývoje onemocnění se frekvence instilací zvyšuje: lék by měl být podáván nejméně pětkrát až šestkrát denně každých hodinu nebo dvě.

Mnozí se zajímají o to, zda je možné kapat roztok interferonu do očí. Odpověď na tuto otázku je kladná.

Předávkovat

Případy předávkování interferonem nejsou popsány.

Interakce

β-IFN je kompatibilní s kortikosteroidní léky a ACTH. Během léčby by se neměl užívat myelosupresivní léky , vč. cytostatika (to může způsobit aditivní efekt ).

S opatrností je IFN-β předepisován s látkami, na jejichž clearance do značné míry závisí systémy cytochromu P450 (antiepileptika , některé antidepresiva atd.).

Neužívejte IFN-alfa a telbivudin . Současné použití α-IFN vyvolává vzájemné posílení účinku ve vztahu k. Při použití společně s fosfazid mohou vzájemně narůstat myelotoxicita oba léky (doporučuje se pečlivě sledovat změny v množství granulocyty a;

v sepse ;

pro léčbu dětí virové infekce (například nebo );

na léčbu chronická virová hepatitida .

IFN se využívá i v terapii, jejímž účelem je rehabilitace často nemocných pacientů. respirační infekce děti.

Nejoptimálnější možností pro užívání dětí jsou nosní kapky: interferon při tomto použití neproniká do gastrointestinálního traktu (před zředěním léku pro nos by měla být voda zahřátá na teplotu 37 ° C).

Pro kojence je interferon předepsán ve formě čípků (150 tisíc IU). Svíčky pro děti by měly být podávány po jedné, 2krát denně, s dodržením 12hodinových intervalů mezi injekcemi. Průběh léčby je 5 dní. K úplnému vyléčení dítěte SARS Zpravidla stačí jeden chod.

Pro léčbu užívejte 0,5 g masti dvakrát denně. Léčba trvá v průměru 2 týdny. Během následujících 2-4 týdnů se mast aplikuje 3x týdně.

Četné pozitivní recenze o léku naznačují, že v tomto léková forma se také etabloval jako účinný lék na léčbu stomatitida a zanícené mandle . Neméně účinné jsou inhalace s interferonem pro děti.

Účinek užívání léku se výrazně zvyšuje, pokud je k jeho podávání použit nebulizér (je nutné použít zařízení, které rozprašuje částice o průměru větším než 5 mikronů). Inhalace přes nebulizér mají svá specifika.

Nejprve musí být interferon inhalován nosem. Za druhé, před použitím zařízení je nutné v něm vypnout funkci ohřevu (IFN je protein, ničí se při teplotě vyšší než 37 °C).

Pro inhalaci v rozprašovači se obsah jedné ampule zředí ve 2-3 ml destilovaného popř. minerální voda(k tomuto účelu můžete použít i fyziologický roztok). Výsledný objem vystačí na jeden postup. Frekvence procedur během dne je od 2 do 4.

Je důležité si uvědomit, že dlouhodobá léčba dětí interferonem se nedoporučuje, protože se na něm vyvíjí závislost, a proto se nevyvíjí očekávaný účinek.

Interferon během těhotenství

Výjimkou mohou být případy, kdy očekávaný přínos terapie pro nastávající maminku převýší riziko nežádoucích účinků a škodlivý účinek na vývoj plodu.

Možnost izolace složek rekombinantního IFN s mateřské mléko. Vzhledem k tomu, že nelze vyloučit možnost expozice plodu prostřednictvím mléka, není IFN předepisován kojícím ženám.

V extrémních případech, kdy se nelze vyhnout jmenování IFN, se doporučuje, aby žena během terapie odmítla kojit. Pro zmírnění nežádoucího účinku léku (výskyt příznaků podobných příznakům chřipky) se doporučuje souběžné podávání s IFN .

Vynález se týká genetického inženýrství, biotechnologie, medicíny, farmakologie. Nová rekombinantní mnohokopiová plazmidová DNA pSX50 kódující syntézu lidského leukocytového interferonu alfa-2b, jehož exprese je pod kontrolou promotorů laktózy a tryptofanu a terminátoru transkripce. V důsledku transformace buněk recipientního kmene E. coli BL21 rekombinantní plasmidovou DNA pSX50 byl získán kmen E. coli SX50 - producent rekombinantního lidského leukocytárního interferonu alfa-2b s produktivitou až 0,9-1,0 g interferonu alfa-2b na 1 litr kultivačního média. Metoda získání rekombinantního interferonu alfa-2b je založena na použití vytvořeného rekombinantního kmene E. coli SX50 a spočívá v jeho hloubkové kultivaci na živném médiu se sníženým obsahem tryptofanu s kontinuálním přidáváním živných substrátů během biosyntézy, mechanické destrukci buňky mikroorganismu při vysokém tlaku, rozpuštění agregovaného proteinu v koncentrovaném roztoku guanidin hydrochloridu s následnou renaturací interferonu ve fyziologických pufrových roztocích za přítomnosti chaotropních činidel a jeho čištění pomocí třístupňového chromatografického čištění interferonu na pryskyřicích jako je Chelating Sepharose Fast Flow imobilizovaný s Cu +2 ionty, iontoměničová chromatografie na iontoměničových pryskyřicích, jako je SM Sephsrose Fast Flow a gelová filtrační chromatografie na pryskyřicích typu Superdex 75. ano při barvení gelů stříbrem a více než 98 % podle RF HPLC a apyrogenní (LAL-test) v množství alespoň 400-800 mg na 1 litr kultivačního média. 3 n. a 3 z.p f-ly, 6 nemocných.

Výkresy k RF patentu 2242516

Vynález se týká genetického inženýrství léky, získaných biotechnologickými prostředky, jmenovitě k metodám průmyslové výroby rekombinantního lidského leukocytového interferonu alfa-2b pro lékařské účely (dále jen interferon), jakož i k rekombinantním kmenům produkujícím Escherichia coli (E. coli) a plazmidové DNA kódující syntéza interferonu.

Interferony jsou proteinové molekuly s molekulovou hmotností 15 000 až 21 000 daltonů, produkované a secernované buňkami v reakci na virovou infekci nebo jiné patogeny. Existují tři hlavní skupiny interferonů: alfa, beta a gama. Tyto skupiny samy o sobě nejsou homogenní a mohou obsahovat několik různých molekulárních variant interferonu. Bylo tedy identifikováno více než 14 genetických odrůd interferonu alfa, které jsou zajímavé a široce používané v medicíně jako antivirová, antiproliferativní a imunomodulační činidla.

Známé způsoby produkce lidského leukocytového interferonu z lidských leukocytů indukovaných viry a jinými induktory (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).

Hlavní nevýhodou těchto metod výroby interferonů je pravděpodobnost kontaminace konečného produktu lidskými viry, jako je virus hepatitidy B a C, virus imunodeficience atd.

V současnosti je jako slibnější uznáván způsob získávání interferonu mikrobiologickou syntézou, který umožňuje získat cílový produkt s mnohem vyšším výtěžkem z relativně levné suroviny. Přístupy použité v tomto případě umožňují vytvořit varianty strukturního genu, které jsou optimální pro bakteriální expresi, a také regulační prvky, které řídí jeho expresi.

Jako výchozí mikroorganismy se používají různé konstrukce kmenů Pichia pastoris, Pseudomonas putida a Escherichia coli.

Nevýhoda použití P. pastoris jako producenta interferonu (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //Vysoká hladina exprese lidského IFN-2b v Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), jsou extrémně obtížné podmínky pro fermentaci tohoto typu kvasinek, nutnost přísně udržovat koncentraci induktoru, zejména methanolu, v procesu biosyntézy. Nevýhodou použití kmenů Ps. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) je složitost fermentačního procesu při nízké úrovni exprese (10 mg interferonu na 1 litr kultivačního média). Produktivnější je použití kmenů Escherichia coli (Semin. Oncol., 1997, červen; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).

Je známo velké množství plazmidů a kmenů E. coli exprimujících interferon: kmeny E. coli ATCC 31633 a 31644 s plazmidy Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 nebo Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN 35 - AHL6 (SU 1764515), E. coli kmen pINF-AP2 (SU 1312961), E. coli kmen pINF-F-Pa (AU 1312962), E. coli kmen SG 20050 s plazmidem p280/21FN (Kravchenko V.V. Bioorganic et al. chemie, 1987, v. 13, č. 9, s. 1186-1193), kmen E. coli SG 20050 s plazmidem pINF14 (SU 1703691), kmen E. coli SG 20050 s plazmidem pINF16 (RU 2054041) a atd. nevýhodou technologií založených na použití těchto kmenů je jejich nestabilita a také nedostatečná úroveň exprese interferonu.

Spolu s charakteristikami použitých kmenů závisí účinnost procesu do značné míry na technologii použité pro izolaci a čištění interferonu.

Známý způsob výroby interferonu, který zahrnuje kultivaci buněk Ps. putida, destrukce biomasy, úprava polyethyleniminem, frakcionace síranem amonným, hydrofobní chromatografie na fenylsilochromu C-80, pH frakcionace lyzátu, jeho koncentrace a diafiltrace, iontoměničová chromatografie na celulóze DE-52, eluce pH gradientem, iontoměničová chromatografie výsledný eluent na CM celulóze -52, koncentrace průchodem přes filtrační kazetu a gelová filtrace na Sephadexu G-100 (SU 1640996). Nevýhodou této metody je kromě složité vícestupňové fermentace vícestupňový proces při získávání finálního produktu.

Je také znám způsob výroby interferonu, který zahrnuje kultivaci kmene E. coli SG 20050/pIF16 v LB bujónu v baňkách v termostatované třepačce, odstředění biomasy, její promytí roztokem pufru a sonikaci za účelem zničení buněk. Výsledný lyzát se odstředí, promyje 3M močovinou v pufru, rozpustí v guanidinchloridu v pufru, sonikuje, odstředí, oxidativní sulfitolýza, dialýza proti 8M močovině, renaturace a závěrečná dvoustupňová chromatografie na celulóze CM-52 a Sephadexu G -50 (RU 2054041). Nevýhodou této metody je její relativně nízká produktivita hlavních fází procesu izolace a čištění. Týká se to zejména ultrazvukového zpracování produktu, dialýzy a oxidativní sulfitolýzy, což vede k nestabilitě výtěžku interferonu a také nemožnosti použití této metody pro průmyslovou výrobu interferonu.

Jako nejbližší analog (prototyp) lze uvést způsob výroby lidského leukocytového interferonu, který spočívá v kultivaci rekombinantního kmene E. coli, zmrazení výsledné biomasy při teplotě nepřesahující -70 °C, rozmrazení, zničení buněk mikroorganismů s lysozymem, odstranění DNA a RNA zavedením do lyzátu DNázy a čištění izolované nerozpustné formy interferonu promytím tlumivým roztokem s detergenty, rozpuštění sraženiny interferonu v roztoku guanidin hydrochloridu, renaturace a jednostupňové čištění tzv. iontoměničová chromatografie. Jako producent je použit kmen E. coli SS5 získaný s použitím rekombinantního plazmidu pSS5 obsahujícího tři promotory: Plac, Pt7 a Ptrp a gen alfa-interferonu se zavedenými nukleotidovými substitucemi.

Exprese interferonu kmenem E. coli SS5 obsahujícím tento plazmid je řízena třemi promotory: Plac, Pt7 a Ptrp. Úroveň exprese interferonu je asi 800 mg na 1 litr buněčné suspenze (RU 2165455).

Nevýhodou této metody je malá vyrobitelnost použití enzymatické destrukce buněk, DNA a RNA mikroorganismu a jednostupňové chromatografické čištění interferonu. To způsobuje nestabilitu procesu izolace interferonu, vede ke snížení jeho kvality a omezuje možnost použití výše uvedeného schématu pro průmyslovou výrobu interferonu. Nevýhodou tohoto plazmidu a kmene na něm založeného je použití v plazmidu silného neregulovaného fágového promotoru T7 v kmeni E. coli BL21 (DE3), ve kterém je gen T7 RNA polymerázy umístěn pod promotorem lac operonu a která vždy „teče“. V důsledku toho dochází v buňce nepřetržitě k syntéze interferonu, což vede k disociaci plazmidu a snížení životaschopnosti buněk kmene a v důsledku toho ke snížení výtěžku interferonu.

Cílem tohoto vynálezu je zkonstruovat rekombinantní průmyslový kmen producenta E. coli za použití nové rekombinantní plazmidové DNA s vysokou úrovní biosyntézy interferonu a vyvinout účinnou průmyslovou technologii pro získání interferonové látky pro lékařské účely, odpovídající v jakosti podle "Evropského lékopisu" pro látku interferon alfa-2b.

Tento problém byl vyřešen vytvořením rekombinantní plazmidové DNA pSX50 a kmene Escherichia coli SX50, uložených v celoruské sbírce průmyslových kmenů Federal State Unitary Enterprise GosNII Genetics, číslo VKPM V-8550,

stejně jako způsob výroby rekombinantního interferonu alfa-2b založený na použití rekombinantního kmene E. coli SX50 a zahrnující jeho hloubkovou kultivaci na živném médiu se sníženým obsahem tryptofanu s kontinuálním přidáváním živných substrátů během biosyntézy, mechanická destrukce buněk mikroorganismů při vysokém tlaku, rozpuštění agregovaného proteinu v koncentrovaném roztoku guanidin hydrochloridu s následnou renaturací interferonu ve fyziologických pufrových roztocích za přítomnosti chaotropních činidel a třístupňovou chromatografickou purifikací interferonu na pryskyřicích, jako je Chelating Sepharose Fast Flow, imobilizované ionty Cu +2, iontoměničová chromatografie na iontoměničových pryskyřicích, jako je CM Sepharose Fast Flow a gelová filtrační chromatografie na pryskyřicích, jako je Superdex 75.

Podle vynálezu je navržena nová rekombinantní mnohokopiová plazmidová DNA pSX50, kódující syntézu lidského leukocytového interferonu alfa-2b, jehož exprese je pod kontrolou promotorů laktózy a tryptofanu a terminátoru transkripce. Plazmid pSX50 má 3218 párů bází (bp) a je charakterizován přítomností následujících fragmentů:

Sekvence od 1 nukleotidu do 176 nukleotidu (n) zahrnuje 176 bp DNA fragment obsahující tryptofanový promotor (P trp);

Sekvence z roku 177 našeho letopočtu do roku 194 našeho letopočtu zahrnuje syntetický DNA fragment o 18 bp obsahující Shine Delgarnovu sekvenci odpovědnou za iniciaci translace;

Sekvence z roku 195 našeho letopočtu do roku 695 našeho letopočtu zahrnuje fragment DNA o velikosti 501 bp obsahující sekvenci interferonového genu s následujícími nukleotidovými substitucemi: v poloze 37 substituce A za C; v poloze 39 substituce G za T; v poloze 40 substituce A za C; pozice 42, záměna G za T , na pozici 67 změna A na C, na pozici 69 změna G na T, na pozici 70 změna A na C, na pozici 72 změna A na T, na pozici 96 změna G na A, v. pozice 100 změna A na C, na pozici 102 změna A na T, na pozici 114 změna A na C, na pozici 120 změna C na G, na pozici 126 změna G na A, na pozici 129 změna G na A, na pozici 330 změna C na G, na pozici 339 změna G na A, na pozici 342 změna G na A, na pozici 487 změna A na C, na pozici 489 změna A na T, na pozici 495 změna G na A ;

Sekvence z roku 696 našeho letopočtu do roku 713 našeho letopočtu zahrnuje syntetický fragment DNA o 18 bp obsahující syntetický polylinker;

Sekvence z roku 714 našeho letopočtu do roku 1138 našeho letopočtu zahrnuje fragment DNA plazmidu pKK223-3 s 4129 b.p. do roku 4553 našeho letopočtu o velikosti 425 bp obsahující sekvenci striktního terminátoru transkripce rrnBT1T2;

Sekvence z roku 1139 našeho letopočtu do roku 1229 našeho letopočtu zahrnuje fragment DNA plazmidu pUC19 z 2487 b.p. do roku 2577 našeho letopočtu velikost 91 p. O., obsahující promotor genu β-laktomázy (gen rezistence na ampicilin - Amp R);

Sekvence z roku 1230 našeho letopočtu do roku 2045 n. l. zahrnuje DNA fragment plazmidu pUC4K s 720 b.p. do roku 1535 našeho letopočtu o velikosti 816 bp, obsahující strukturní oblast genu kan;

Sekvence z roku 2046 našeho letopočtu do roku 3218 našeho letopočtu zahrnuje fragment DNA plazmidu pUC19 od 1625 do 453 b.p. velikost 1173 BP, obsahující sekvenci odpovědnou za replikaci plazmidu (ori) a lac promotoru (Plac).

Obrázky 1-5 znázorňují návrhová schémata a fyzická mapa plasmidy pSX50.

Obrázek 6 ukazuje úplnou nukleotidovou sekvenci stanovenou pro plazmid pSX50.

Kmen Escherichia coli SX50 byl získán transformací buněk Escherichia coli BL21 plazmidem pSX50 za použití tradiční technologie genetického inženýrství. Kmen E.Coli SX50 se vyznačuje následujícími znaky.

Kulturní a morfologické znaky

Buňky jsou malé, rovné, ztluštělé tyčinkovité, gramnegativní, bez výtrusů. Buňky dobře rostou na jednoduchých živných půdách. Při pěstování na Difko agaru se tvoří kulaté, hladké, konvexní, zakalené, lesklé, šedé kolonie s hladkými okraji. Při pěstování v tekutém médiu (v minimálním médiu s glukózou nebo v LB-bujónu) tvoří intenzivní rovnoměrný zákal.

Fyzikálně-biologické vlastnosti

Aerobní. Teplotní rozsah růstu je 4-42°C při optimálním pH 6,5-7,5.

Jako zdroj dusíku se používají jak minerální soli v amonné a dusičnanové formě, tak organické sloučeniny ve formě aminokyselin, peptonu, tryptonu, kvasnicového extraktu atd.

Jako zdroj uhlíku se používají aminokyseliny, glycerol, sacharidy. Odolnost proti antibiotikům. Buňky vykazují rezistenci vůči kanamycinu (až do 100 ug/ml).

Kmen Escherichia coli 8X50 je producentem interferonu.

Způsob, podmínky a složení média pro skladování kmene

V L-arape s přídavkem kanamycinu do koncentrace 20 μg/ml pod olejem, v L-bujónu s obsahem 15% glycerolu a příslušných antibiotik v ampulích při teplotě minus 70 °C, v lyofilizovaném stavu v ampulích při teplota plus 4°C.

Kmen Escherichia coli SX50 byl identifikován Bergi's Key (1974) jako kmen druhu Escherichia coli.

Způsob průmyslové výroby interferonu alfa-2b

Rysem navrhované metody je vývoj technologie, která umožňuje izolovat interferon z nerozpustné formy, která se hromadí během fermentace, což může výrazně zjednodušit technologické schéma izolačního procesu a zvýšit výtěžek cílového produktu.

Metoda spočívá v kultivaci kmene Escherichia coli SX50 v živném médiu, za stálého přidávání živných substrátů, nejlépe glukózy a kvasničného extraktu, při biosyntéze, nejlépe se sníženým obsahem tryptofanu, mechanické destrukci buněk mikroorganismů při vysokém tlaku 700 -900 bar, rozpuštění interferonu v pufrovém roztoku guanidin hydrochloridu, renaturace interferonu ve fyziologických pufrových roztocích za přítomnosti chaotropních činidel, následovaná třístupňovou chromatografickou purifikací interferonu na pryskyřicích, jako je Chelating Sepharose Fast Flow imobilizovaná s Cu +2 ionty, iontoměničovou chromatografií na iontoměničových pryskyřicích, jako je CM Sepharose Fast Flow a gelovou filtrační chromatografií na pryskyřicích, jako je Superdex 75.

Optimální podmínky pro provedení jednotlivých fází získávání interferonu jsou následující:

Fermentace se provádí s kontinuálním přidáváním substrátů v průběhu procesu, což vede k vysoké úrovni exprese interferonu;

Destrukce buněk se provádí v dezintegrátoru Gaulinova typu při tlaku 900 bar;

Odstranění rozpustných buněčných složek (DNA, RNA, proteiny, lipopolysacharidy atd.) se provádí promytím nerozpustné formy interferonu pufrovými roztoky obsahujícími detergenty (Triton XI00, močovina atd.);

Výsledná sraženina obsahující interferon se rozpustí v tlumivém roztoku 6 M guanidin hydrochloridu;

Renaturace interferonu se provádí ve fyziologickém pufrovacím roztoku obsahujícím chaotropní činidla;

Třístupňová chromatografická purifikace interferonu se provádí na Chelating Sepharose Fast Flow imobilizované s Cu +2 ionty, na kationtoměničové pryskyřici CM Sepharose Fast Flow a gelová filtrační chromatografie na pryskyřici typu Superdex 75;

Po každém chromatografickém čištění se provádí sterilizační filtrace přes apyrogenní filtry s velikostí pórů 0,22 μm.

Výstup interferonu jako výsledek aplikace popsaného způsobu je přibližně 400-800 mg interferonu s 1 litrem kultivačního média. Kvalita výsledného produktu odpovídá normám a požadavkům „Evropského lékopisu“ pro látku interferon alfa-2b.

Významné rozdíly mezi navrhovanou metodou a prototypem jsou:

Použití konstrukce kmene s vyšší produktivitou, která umožňuje získat větší množství interferonu z 1 litru kultivačního média při biosyntéze;

Využití účinné mechanické destrukce buněčné biomasy, která umožňuje získat čistší extrakt nerozpustné formy interferonu v kratším čase, s menšími ztrátami;

Použití fyziologických roztoků pufrů během renaturace v přítomnosti chaotropních činidel umožňuje zvýšit výtěžek správně renaturované formy interferonu;

Třístupňové chromatografické čištění interferonu umožňuje získat interferonovou látku o čistotě více než 99 % podle elektroforézy v redukčních i neredukčních podmínkách při barvení gelů stříbrem a více než 98 % podle RF HPLC a prakticky bez pyrogeny (LAL test).

Podstata a výhody nárokované skupiny vynálezů jsou ilustrovány následujícími příklady.

Příklad 1 Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX50

Způsob konstrukce plazmidu pSX50 zahrnuje následující kroky:

Konstrukce vektorového plazmidu pSX10;

1. konstrukce plazmidu pSX3 (2641 bp)

2. konstrukce vektorového plazmidu pSX10 (2553 bp)

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX41 (3218 bp);

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX43 (3218 bp);

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX45 (3218 bp);

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX50 (3218 bp).

Konstrukce vektorového plazmidu pSX10

Vektorový plazmid pSX10 je vektor pUC19, ve kterém je kódující sekvence genu beta-laktamázy rezistentní na ampicilin nahrazena sekvencí kódující gen kan a obsahuje terminátor transkripce z plazmidu pKK223-3.

Konstrukce vektorového plazmidu pSS10 se provádí ve dvou fázích:

Získání plazmidu pSX3 (2641 p. O.), představujícího plazmid pUC19, ve kterém je kódující oblast genu amp nahrazena kódující oblastí genu kan;

Získání vektorového plazmidu pSX10 (2553 bp), což je plazmid pSX3, ve kterém je DNA fragment kódující terminátor transkripce ggBT 1 T 2 vložen za místo BamHI.

Pro získání plazmidu pSX3 se provede pět kol amplifikace DNA. PCR metoda(polymerázová řetězová reakce). Během prvního kola se za použití plasmidové DNA pUC19 jako templátu provede amplifikace fragmentu DNA o velikosti 1828 bp. (fragment PU1-PU2) s použitím primerů:

Tato a následné reakce PCR se provádějí za následujících podmínek: 20 mM Tis-HCl, pH 8,8, 10 mM (NH4)2S04, 10 mM KCI, 2 tM MgCl2, 0,1 % Triton X100, 0,1 mg/ml BSA, 0,2 mM každého dNTP, 1,25 u Pfu DNA polymeráza, 100 ng DNA. Proces amplifikace se skládá z následujících fází: zahřívání na 95 °C po dobu 5 minut, 35 cyklů PCR (30 s 95 °C, 30 s 56 °C, 2 minuty 72 °C) a inkubace po dobu 10 minut při 72 °C. Po amplifikaci (a po následných amplifikacích) je fragment DNA purifikován elektroforeticky na 1% agarózovém gelu. Během druhého a třetího kola se za použití plasmidové DNA pUC4K jako templátu provede amplifikace fragmentu DNA o velikosti 555 bp. (fragment KM1-KM2) s použitím primerů:

a amplifikace fragmentu DNA o velikosti 258 bp. (KMZ-KM4) s primery

V pátém kole PCR se fragmenty (PU1-PU2) a (KM1-KM4) spojí za následujících podmínek: zahřívání na 95 °C po dobu 5 minut, 5 cyklů PCR (30 s 95 °C, 30 s 56 ° C, 10 min 72 °C) a inkubace po dobu 10 min při 72 °C. DNA získaná po poslední PCR je přímo transformována do buněk E. coli DH5 a nanesena na médium LA obsahující 20 ug/ml kanamycinu. Po inkubaci po dobu 12 hodin při 37 °C se klony odplevelí, izoluje se plazmidová DNA a provede se restrikční analýza. Výsledkem je získání plazmidu pSX3 o velikosti 2641 bp.

Pro získání vektorového plazmidu pSX10 byla provedena tři kola amplifikace DNA pomocí PCR. Během prvního kola se s použitím plasmidové DNA pSX3 jako templátu provede amplifikace fragmentu DNA o velikosti 2025 bp. (fragment 10.1-10.2) s použitím primerů:

Během druhého kola se za použití DNA plazmidu pKK223-3 jako templátu provede amplifikace fragmentu DNA o velikosti 528 bp. (fragment KK1-KK2) s použitím primerů:

Ve třetím kole PCR se fragmenty (10.1-10.2) a (KK1-KK2) spojí za následujících podmínek: zahřívání na 95 °C po dobu 5 minut, 5 cyklů PCR (30 s 95 °C, 30 s 56 °C , 10 min 72 °C) a inkubace po dobu 10 min při 72 °C. DNA získaná po poslední PCR je přímo transformována do buněk E. coli DH5 a nanesena na médium LA obsahující 20 ug/ml kanamycinu. Po inkubaci po dobu 12 hodin při 37 °C se klony odplevelí, izoluje se plazmidová DNA a provede se restrikční analýza. Výsledkem je plazmid pSX10 o velikosti 2553 bp.

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX41

Rekombinantní plazmid pSX41 je fragment Hind III - BamHI DNA vektorového plazmidu pSX3 (2529 bp), fragment Hind III - EcoRI DNA 168 bp kódující promotor tryptofanového operonu E. coli (P trp), EcoRI-Xbal a 20 bp syntetický fragment DNA kódující sekvenci SD (Shine-Delgarno) a fragment DNA Xbal-BamHI o velikosti 501 bp kódující gen lidského interferonu alfa 2b.

Pro získání fragmentu Hind III - BamHI DNA vektorového plazmidu pSX3 (2529 bp) se DNA plazmidu pSX3 zpracuje s restrikčními enzymy HindIII a BamHI a poté se provede elektroforetické čištění v 1% agarózovém gelu. Fragment Hind III EcoRI DNA o 168 bp kódující promotor tryptofanového operonu (P trp) byl získán pomocí PCR s použitím celkové DNA E. coli jako templátu a primerů TRP1 a PRP2, po čemž následovalo zpracování amplifikovaného fragmentu restrikčními enzymy HindIII a EcoRI. enzymy:

Pro získání EcoRI-Xbal, 20bp syntetického fragmentu DNA kódujícího SD sekvenci (Shine-Delgarno), jsou syntetizovány následující komplementární oligonukleotidy:

Fragment DNA Xbal-BamIII o velikosti 501 bp kódující gen lidského interferonu alfa 2b se získá pomocí PCR s použitím celkové lidské DNA jako templátu a primerů IFN1 a IFN2, po čemž následuje zpracování amplifikovaného fragmentu restrikčními enzymy Xbal a BamIII:

Dále jsou elektroforeticky purifikované fragmenty spojeny, ligovány s enzymem T4 fágová ligáza, DNA je transformována do buněk E. coli DH5 a nanesena na LA médium obsahující 20 ug/ml kanamycinu. Po inkubaci po dobu 12 hodin při 37 °C se klony odplevelí, izoluje se plazmidová DNA, provede se restrikční analýza a stanoví se primární struktura DNA. Výsledkem je plazmid pSX41 o velikosti 3218 bp. Dále se provádí postupná mutageneze interferonového genu, aby se zvýšila hladina exprese cílového produktu. Mutageneze interferonového genu spočívá v nahrazení tripletů, které se zřídka vyskytují v E. coli, kódujících odpovídající aminokyseliny, triplety, které se často vyskytují v E. coli a kódují stejné aminokyseliny. Mutageneze DNA interferonového genu se provádí pomocí PCR.

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX43

K získání rekombinantního plazmidu pSX43 se provede jedno kolo amplifikace DNA pomocí PCR s použitím DNA plazmidu pSX41 jako templátu a primerů IFN3 a IFN4:

PCR se provádí za následujících podmínek: zahřívání na 95 °C po dobu 5 minut, 20 cyklů PCR (30 s 95 °C, 30 s 56 °C, 10 minut 72 °C) a inkubace po dobu 20 minut při 72 °C. DNA získaná po PCR se přímo transformuje do buněk E. coli DH5 a nanese se na LA médium obsahující 20 ug/ml kanamycinu. Po inkubaci po dobu 12 hodin při 37 °C se klony odplevelí, izoluje se plazmidová DNA, provede se restrikční analýza a stanoví se primární struktura DNA. Výsledkem je získání plazmidu pSX43 o velikosti 3218 bp.

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX45

K získání rekombinantního plazmidu pSX45 se provede jedno kolo amplifikace DNA pomocí PCR s použitím plazmidové DNA pSX43 jako templátu a primerů IFN5 a IFN6:

PCR se provádí za následujících podmínek: zahřívání na 95 °C po dobu 5 minut, 20 cyklů PCR (30 s 95 °C, 30 s 56 °C, 10 minut 72 °C) a inkubace po dobu 20 minut při 72 °C. DNA získaná po PCR se přímo transformuje do buněk E. coli DH5 a nanese se na LA médium obsahující 20 ug/ml kanamycinu. Po inkubaci po dobu 12 hodin při 37 °C se klony odplevelí, izoluje se plazmidová DNA, provede se restrikční analýza a stanoví se primární struktura DNA. Výsledkem je plazmid pSX45 o velikosti 3218 bp.

Konstrukce rekombinantního plazmidu pSX50.

K získání rekombinantního plazmidu pSX50 se provede jedno kolo amplifikace DNA pomocí PCR s použitím plazmidové DNA pSX45 jako templátu a primerů IFN7 a IFN8:

PCR se provádí za následujících podmínek: zahřívání na 95 °C po dobu 5 minut, 20 cyklů PCR (30 s 95 °C, 30 s 56 °C, 10 minut 72 °C) a inkubace po dobu 20 minut při 72 °C. DNA získaná po PCR se přímo transformuje do buněk E. coli DH5 a nanese se na LA médium obsahující 20 ug/ml kanamycinu. Po inkubaci po dobu 12 hodin při 37 °C se klony odplevelí, izoluje se plazmidová DNA, provede se restrikční analýza a stanoví se primární struktura DNA. Výsledkem je plazmid pSX50 o velikosti 3218 bp.

Příklad 2. Získání kmene E. coli SX50 - producent interferonu

Kmen E. coli SX50 produkující interferon se získá transformací buněk kmene E. coli BL21 rekombinantním plazmidem pSX50. Kmen produkující interferon se pěstuje ve 301 fermentoru na optickou hustotu 25,0-30,0 o.u. v médiu M9 obsahujícím 1 % kyselého hydrolyzátu kaseinu (Difco), 1 % glukózy, 40 ug/ml kanamycinu, při teplotě 38-39 °C. Během fermentačního procesu se pomocí gravimetrického regulátoru provádí kontinuální přidávání živného substrátu.

Příklad 3 Způsob izolace interferonu z kmene E. coli SX50

Interferon byl získán ve 4 fázích:

Fáze 1. Kultivace kmene E. coli SX50.

Fáze 2 Izolace a čištění nerozpustné formy interferonu.

Fáze 3 Rozpouštění a renaturace interferonu.

Fáze 4. Chromatografické čištění interferonu.

Fáze 1. Kultivace kmene E. coli SX50

Pěstované inokulum kmene E. coli SX50 v objemu 3 litry bohatého média LB po dobu 12 hodin při 26 °C se asepticky zavede do fermentoru obsahujícího 27 litrů sterilního média obsahujícího M9, 1% hydrolyzát kyseliny kaseinové, 1 % glukózy, 1 mM MgCl2, 0,1 mM CaCl2, 40 mg/ml kanamycinu. Kultivace ve fermentoru se provádí při teplotě 38-39 °C, při udržování pH 7±0,15 automatickou titrací 40% roztokem hydroxidu sodného. Koncentrace rozpuštěného kyslíku v rozmezí (50±10)% nasycení je udržována změnou rychlosti míchadla od 100 do 800 ot./min a přívodu vzduchu od 1 do 15 l/min. Koncentrace substrátů, zejména glukózy a kvasnicového extraktu, je měřena během fermentace a jejich koncentrace je udržována změnou rychlosti dávkování koncentrovaných roztoků peristaltickými čerpadly pomocí gravimetrického regulátoru.

Akumulace interferonu ve formě nerozpustné formy je monitorována pomocí mikroskopie s fázovým kontrastem, elektroforézy v 15% polyakrylamidovém gelu (SDS-PAAG) a vysokoúčinné chromatografie na reverzní fázi (RF HPLC). Fermentace se zastaví po dosažení maximální optické hustoty (~ 25-30 p.u.) a zastaví se syntéza interferonu. Po dokončení fermentace se kultivační kapalina oddělí odstředěním v průtokovém rotoru při rychlosti otáčení 5000-10000 ot./min. Biomasa je balena do plastových sáčků a zmražena na minus 70°C.

Fáze 2 Izolace a čištění nerozpustné formy interferonu

300-400 g zmrazené biomasy E. coli SX50 se suspenduje ve 3000 ml pufru 1 (20 mM Tris-HCI, pH 8,0, 10 mM EDTA, 0,1 % Triton X100). Suspenze prochází průtokovým homogenizátorem Gaulinova typu, udržuje se na 900 bar a odstřeďuje se v průtokovém rotoru při 15 000 ot./min. Získaná sraženina se postupně promyje za podobných podmínek pufry 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA, 3 M močovina) a pufrem 3 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 1 mM EDTA) a nakonec interferonem. sraženina se suspenduje ve 200 ml pufru 3. Doba izolace a čištění nerozpustné formy interferonu není delší než 5 hodin.

Fáze 3 Rozpouštění a renaturace interferonu

K suspenzi nerozpustné formy interferonu získané v předchozím stupni se přidá suchý hydrochlorid guanidinu do koncentrace 6 M, dithiothreitol se přidá do koncentrace 50 mM, Tris-HCl pH 8,0 do koncentrace 50 mM, NaCl do koncentraci 150 mM a Triton X100 na koncentraci 0,1 %, inkubovány při teplotě místnosti po dobu 2 h. Nerozpuštěný materiál se oddělí sterilizační filtrací přes membrány s průměrem pórů 0,22 mikronů.

Renaturace interferonu se provádí pomalým ředěním výsledného roztoku 100-200 krát pufrem 4 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA). Poté se renaturační směs inkubuje za stálého míchání po dobu 12-15 hodin při teplotě 4-8°C. Dále se přidá síran hořečnatý do koncentrace 1 mm a agregovaný materiál se odstraní sterilizační filtrací přes membránový filtr s průměrem pórů 0,22 mikronů.

Fáze 4. Chromatografické čištění interferonu

Chromatografické čištění interferonu se provádí ve třech stupních.

1. Výsledný renaturovaný interferon se nejprve čistí afinitní chromatografií na pryskyřici Chelating Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) imobilizované s ionty Cu +2. K tomu se roztok interferonu nanese na kolonu s Cu+2 Chelating Sepharose Fast Flow a interferon se eluuje pufrem 0,1 M kyseliny citrónové pH 2,2.

2. Ve druhém stupni chromatografického čištění se roztok interferonu nanese na katexovou pryskyřici CM Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) a interferon se eluuje gradientem roztoků (0,0-0,5 M NaCl) v 50 mM Na (CH3COO) pufr, pH 5,5.

3. Čištění monomerní formy interferonu od zbytků polymerních forem interferonu se provádí ve třetím stupni čištění interferonu gelovou filtrací na pryskyřici typu Superdex 75 (Amersham Biosciences). Chromatografie se provádí v 50 mM Na(CH3COO) pufru, pH 5,0, obsahujícím 0,15 M NaCl.

Popsaný způsob izolace a čištění interferonu umožňuje získat 4-8 g vysoce purifikovaného interferonu v jednom cyklu izolace po dobu 7-10 dnů z biomasy získané z 10 l kultivačního média. Kvalita výsledného interferonu plně odpovídá požadavkům "Evropského lékopisu" pro látku interferon alfa-2b, a to:

Koncentrace interferonu není nižší než 2×108 IU/ml;

Specifická aktivita interferonu není nižší než 2,0 x 108 IU/mg;

Elektroforetická čistota léčiva není menší než 99 % za redukčních a neredukujících podmínek, když jsou gely barveny stříbrem;

Izoelektrický bod izolovaného interferonu je v oblasti pH 5,8-6,3;

Peptidová mapa izolovaného interferonu se zásadně neliší od peptidové mapy pro evropský standard pro interferon alfa 2b CRS;

Jak vyplývá z výše uvedených příkladů, nárokovaná skupina vynálezů umožňuje získat interferon alfa-2b s vysokým výtěžkem s relativně jednoduchou a spolehlivou technologií.

NÁROK

1. Rekombinantní plazmidová DNA pSX50 kódující syntézu rekombinantního lidského interferonu alfa-2b, vyznačující se tím, že má velikost 3218 párů bází (bp) a skládá se z následujících fragmentů: sekvence od 1 do 176 nukleotidů (n) zahrnuje fragment 176 bp DNA obsahující tryptofanový promotor (P trp), sekvence od 177 do 194 bp. zahrnuje syntetický fragment DNA o 18 bp, obsahující Shine Delgarnovu sekvenci odpovědnou za iniciaci translace, sekvenci od 195 do 695 bp. zahrnuje fragment DNA o velikosti 501 bp obsahující gen interferonu alfa-2b s nukleotidovými substitucemi: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 (A>C ), 69 (G>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (G>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A>C) , 120 (C>G), 126 (G>A), 129 (G>A), 330 (C>G), 339 (G>A), 342 (G>A), 487 (A> C), 489 (A>T), 495 (G>A), sekvence 696 až 713 b.p. zahrnuje syntetický fragment DNA o 18 bp obsahující syntetický polylinker, sekvenci od 714 do 1138 bp. zahrnuje fragment DNA plazmidu pKK223-3 od 4129 do 4553 bp. o velikosti 425 bp, obsahující sekvenci striktního terminátoru transkripce rrnBT1T2, sekvenci od 1139 do 1229 b.p. zahrnuje fragment DNA plazmidu pUC19 od 2487 do 2577 b.p. o velikosti 91 bp, obsahující promotor genu β-laktomázy (gen rezistence na ampicilin -Amp R), sekvence od 1230 do 2045 b.p. zahrnuje DNA fragment plazmidu pUC4K s 720 b.p. do roku 1535 našeho letopočtu o velikosti 816 bp, obsahující strukturní oblast genu kan, sekvence od 2046 b.p. do roku 3218 našeho letopočtu zahrnuje fragment DNA plazmidu pUC19 od 1625 do 453 b.p. velikost 1173 BP, obsahující sekvenci odpovědnou za replikaci plazmidu (ori) a lac promotoru (Plac).

2. Bakteriální kmen Eschcerichia coli SX50 transformovaný rekombinantním plazmidem podle nároku 1 je producentem rekombinantního lidského leukocytového interferonu alfa-2b.

3. Způsob výroby lidského interferonu alfa-2b, který zahrnuje kultivaci kmene Escherichia coli SX5 podle nároku 2 v živném médiu s konstantním přidáváním živných substrátů během biosyntézy, mechanickou destrukci buněk mikroorganismů při tlaku 700-900 bar. , rozpouštění interferonu v tlumivém roztoku guanidin hydrochloridu, renaturace interferonu ve fyziologických tlumivých roztocích za přítomnosti chaotropních činidel, třístupňová chromatografická purifikace interferonu na pryskyřicích jako je Chelating Sepharose Fast Flow imobilizovaná s Cu +2 ionty, iontoměničová chromatografie na iontoměničových pryskyřicích, jako je CM Sepharose Fast Flow a vylučovací chromatografie na pryskyřicích, jako je Superdex 75.

4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že kultivace se provádí na živném médiu se sníženým obsahem tryptofanu za kontinuálního přidávání živných substrátů, s výhodou glukózy a kvasinkového extraktu.

5. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se před rozpuštěním interferonu čistí odstraněním rozpustných buněčných složek, včetně DNA, RNA, proteinů, lipopolysacharidů, promytím pufrovými roztoky obsahujícími detergenty, jako je Triton XI 00, močoviny.

6. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že po každém chromatografickém čištění se provádí sterilizační filtrace přes filtry s velikostí pórů 0,22 um.

Sání

Při s/c nebo/m podání interferonu alfa-2b se jeho biologická dostupnost pohybuje od 80 % do 100 %. Po zavedení interferonu alfa-2b je Tmax v plazmě 4-12 hodin, T1 / 2 - 2-6 hod. 16-24 hodin po podání není rekombinantní interferon v krevním séru detekován.

Metabolismus

Metabolismus se provádí v játrech.

Alfa interferony jsou schopny narušit oxidační metabolické procesy, snížit aktivitu mikrozomálních jaterních enzymů systému cytochromu P450.

chov

Je vylučován převážně ledvinami glomerulární filtrací.

Předávkovat

Údaje o předávkování lékem Altevir® nejsou k dispozici.

Podmínky skladování

Lék by měl být uchováván mimo dosah dětí v souladu s SP 3.3.2-1248-03 při teplotě 2° až 8°C; nezmrazujte.

Interakce s jinými léky

Lékové interakce mezi Altevirem a jinými léky nebyly plně prozkoumány. Altevir® by měl být používán s opatrností současně s hypnotiky a sedativy, narkotickými analgetiky a léky, které mají potenciální myelodepresivní účinek.

Při současném jmenování Alteviru a theofylinu by měla být sledována jejich koncentrace v krevním séru a v případě potřeby by měl být změněn dávkovací režim.

Při použití Alteviru v kombinaci s chemoterapeutickými léky (cytarabin, cyklofosfamid, doxorubicin, teniposid) se zvyšuje riziko rozvoje toxických účinků.

Vedlejší účinek

Obecné reakce: velmi často - horečka, slabost (jsou na dávce závislé a reverzibilní reakce, vymizí do 72 hodin po přerušení léčby nebo jejím ukončení), zimnice; méně často - malátnost.

Ze strany centrálního nervového systému: velmi často - bolest hlavy; méně často - astenie, ospalost, závratě, podrážděnost, nespavost, deprese, sebevražedné myšlenky a pokusy; zřídka - nervozita, úzkost.

Z muskuloskeletálního systému: velmi často - myalgie; méně často - artralgie.

Ze strany zažívací ústrojí: velmi často - ztráta chuti k jídlu, nevolnost; méně často - zvracení, průjem, sucho v ústech, změna chuti; zřídka - bolest břicha, dyspepsie; možná reverzibilní zvýšení jaterních enzymů.

Ze strany kardiovaskulárního systému: často - pokles krevního tlaku; zřídka - tachykardie.

Dermatologické reakce: méně často - alopecie, zvýšené pocení; zřídka - kožní vyrážka, svědění kůže.

Na straně hematopoetického systému: možná reverzibilní leukopenie, granulocytopenie, snížení hladiny hemoglobinu, trombocytopenie.

Ostatní: zřídka - hubnutí, autoimunitní tyreoiditida.

Sloučenina

lidský rekombinantní interferon alfa-2b 3 miliony IU

Pomocné látky: octan sodný, chlorid sodný, disodná sůl kyseliny ethylendiamintetraoctové, tween-80, dextran 40, voda na injekci.

Dávkování a podávání

Aplikujte s / c, / ma / in. Léčba musí být zahájena lékařem. Dále se svolením lékaře může pacient sám sobě podávat udržovací dávku (v případech, kdy je lék předepsán s / c nebo / m).

Chronická hepatitida B: Altevir® se podává SC nebo IM v dávce 5-10 milionů IU 3krát týdně po dobu 16-24 týdnů. Léčba je zastavena po 3-4 měsících užívání při absenci pozitivní dynamiky (podle studie DNA viru hepatitidy B).

Chronická hepatitida C: Altevir® se podává s.c. nebo IM v dávce 3 miliony IU 3krát týdně po dobu 24-48 týdnů. U pacientů s recidivujícím průběhem onemocnění a pacientů, kteří dosud nebyli léčeni interferonem alfa-2b, se účinnost léčby zvyšuje při kombinované léčbě s ribavirinem. Délka kombinované terapie je minimálně 24 týdnů. Léčba Altevirem by měla být prováděna po dobu 48 týdnů u pacientů s chronickou hepatitidou C a 1. genotypem viru s vysokou virovou zátěží, u kterých do konce prvních 24 týdnů léčby nebyla zjištěna RNA viru hepatitidy C v krevním séru.

Papilomatóza hrtanu: Altevir® se podává s/c v dávce 3 miliony IU/m2 3krát týdně. Léčba začíná po chirurgickém (nebo laserovém) odstranění nádorové tkáně. Dávka se volí s ohledem na snášenlivost léku. Dosažení pozitivní odpovědi může vyžadovat léčbu po dobu 6 měsíců.

Vlasatobuněčná leukémie: Doporučená dávka Alteviru pro subkutánní podání u pacientů se splenektomií nebo bez ní je 2 miliony IU/m2 3krát týdně. Ve většině případů dochází k normalizaci jednoho nebo více hematologických parametrů po 1-2 měsících léčby, je možné prodloužit dobu léčby až na 6 měsíců. Tento dávkovací režim by měl být dodržován nepřetržitě, pokud nedojde k rychlé progresi onemocnění nebo k příznakům závažné nesnášenlivosti léku.

Chronická myeloidní leukémie: doporučená dávka Alteviru v monoterapii je 4-5 milionů IU/m2 za den s/c denně. Pro udržení počtu leukocytů může být nutné použít dávku 0,5-10 milionů IU / m2. Pokud léčba dosáhne kontroly počtu leukocytů, pak by měl být lék použit v maximální tolerované dávce (4-10 milionů IU / m2 denně), aby se udržela hematologická remise. Lék by měl být vysazen po 8-12 týdnech, pokud léčba nevedla k částečné hematologické remisi nebo klinicky významnému poklesu počtu leukocytů.

Non-Hodgkinův lymfom: Altevir® se používá jako adjuvantní terapie v kombinaci se standardními režimy chemoterapie. Lék se podává s / c v dávce 5 milionů IU / m2 3krát týdně po dobu 2-3 měsíců. Dávka musí být upravena v závislosti na snášenlivosti léku.

Melanom: Altevir® se používá jako adjuvantní terapie u dospělých s vysokým rizikem recidivy po odstranění nádoru. Altevir® se podává intravenózně v dávce 15 milionů IU/m2 5krát týdně po dobu 4 týdnů, poté s/c v dávce 10 milionů IU/m2 3krát týdně po dobu 48 týdnů. Dávka musí být upravena v závislosti na snášenlivosti léku.

Mnohočetný myelom: Altevir® se předepisuje v období dosažení stabilní remise v dávce 3 miliony IU/m2 3x týdně s/c.

Kaposiho sarkom na pozadí AIDS: optimální dávka nebyla stanovena. Lék lze použít v dávkách 10-12 milionů IU / m2 / den s / c nebo / m. V případě stabilizace onemocnění nebo odpovědi na léčbu léčba pokračuje, dokud nádor neustoupí nebo není nutné vysadit lék.

Rakovina ledvin: optimální dávka a režim nebyly stanoveny. Doporučuje se používat lék s / c v dávkách 3 až 10 milionů IU / m2 3krát týdně.

Příprava roztoku pro intravenózní podání

Odebere se objem roztoku Altevira nezbytný k přípravě požadované dávky, přidá se do 100 ml sterilního 0,9% roztoku chloridu sodného a podává se po dobu 20 minut.

Popis výrobku

Injekční roztok je čirý, bezbarvý.

S opatrností (Opatření)

Aplikace pro porušení funkce jater

Aplikace pro porušení funkce ledvin

Lék je kontraindikován u těžké renální a / nebo jaterní nedostatečnosti (včetně těch, které jsou způsobeny přítomností metastáz).

speciální instrukce

Před léčbou Altevirem pro chronickou virovou hepatitidu B a C se doporučuje jaterní biopsie k posouzení stupně poškození jater (známky aktivní zánětlivý proces a/nebo fibróza). Účinnost léčby chronické hepatitidy C se zvyšuje kombinovanou terapií s Altavirem a ribavirinem. Užívání přípravku Altevira není účinné při rozvoji dekompenzované jaterní cirhózy nebo jaterního kómatu.

V případě nežádoucích účinků během léčby Altevirem je třeba snížit dávku léku o 50 % nebo lék dočasně vysadit, dokud nevymizí. Pokud nežádoucí účinky přetrvávají nebo se znovu objeví po snížení dávky nebo je pozorována progrese onemocnění, je třeba léčbu Altevirem přerušit.

Při poklesu hladin krevních destiček pod 50x109 / l nebo hladin granulocytů pod 0,75x109 / l se doporučuje snížit dávku Alteviru 2krát s kontrolou krevních testů po 1 týdnu. Pokud tyto změny přetrvávají, je třeba lék vysadit.

Při poklesu hladiny krevních destiček pod 25x109/l nebo hladiny granulocytů pod 0,5x109/l se doporučuje vysadit Altevir® s kontrolou krevních testů po 1 týdnu.

U pacientů užívajících přípravky s interferonem alfa-2b lze v krevním séru detekovat protilátky, které neutralizují jeho antivirovou aktivitu. Téměř ve všech případech jsou titry protilátek nízké, jejich výskyt nevede ke snížení účinnosti léčby ani výskytu jiných autoimunitních poruch.

Použití během těhotenství a kojení

Lék je kontraindikován během těhotenství a kojení (kojení).

Formulář vydání

Injekční roztok je čirý, bezbarvý.
1 ml
lidský rekombinantní interferon alfa-2b 3 miliony IU
Pomocné látky: octan sodný, chlorid sodný, disodná sůl kyseliny ethylendiamintetraoctové, tween-80, dextran 40, voda

Datum spotřeby od data výroby

18 měsíců

Indikace pro použití

Jako součást komplexní terapie u dospělých:

U chronické virové hepatitidy B bez známek jaterní cirhózy;

Při chronické virové hepatitidě C při absenci příznaků selhání jater (monoterapie nebo kombinovaná léčba s ribavirinem);

S papilomatózou hrtanu;

S genitálními bradavicemi;

S vlasatobuněčnou leukémií, chronickou myeloidní leukémií, non-Hodgkinským lymfomem, melanomem, mnohočetným myelomem, Kaposiho sarkomem na pozadí AIDS, progresivní rakovinou ledvin.

Kontraindikace

Závažná kardiovaskulární onemocnění v anamnéze (nekontrolované chronické srdeční selhání, nedávný infarkt myokardu, výrazné srdeční arytmie);

Těžká renální a/nebo selhání jater(včetně způsobených přítomností metastáz);

Epilepsie, stejně jako závažné poruchy centrálního nervového systému, zejména vyjádřené depresí, sebevražednými myšlenkami a pokusy (včetně anamnézy);

Chronická hepatitida s dekompenzovanou cirhózou jater a u pacientů užívajících nebo nedávno léčených imunosupresivy (s výjimkou dokončené krátkodobé léčby kortikosteroidy);

Autoimunitní hepatitida nebo jiné autoimunitní onemocnění;

Léčba imunosupresivy po transplantaci;

Choroba štítná žláza nekontrolovatelné konvenčními terapeutickými metodami;

Dekompenzovaná plicní onemocnění (včetně COPD);

Dekompenzovaný diabetes mellitus;

Hyperkoagulabilita (včetně tromboflebitidy, plicní embolie);

Těžká myelodeprese;

Těhotenství;

období laktace (kojení);

Přecitlivělost na složky léku.

farmakologický účinek

Interferon. Altevir® má antivirové, imunomodulační, antiproliferativní a protinádorové účinky.

Interferon alfa-2b, interagující se specifickými receptory na buněčném povrchu, iniciuje komplexní řetězec změn uvnitř buňky, včetně indukce syntézy řady specifických cytokinů a enzymů, narušuje syntézu virové RNA a virových proteinů v buňce. buňka. Výsledkem těchto změn je nespecifická antivirová a antiproliferativní aktivita spojená s prevencí replikace viru v buňce, inhibicí buněčné proliferace a imunomodulačním účinkem interferonu. Interferon alfa-2b stimuluje proces prezentace antigenu imunokompetentním buňkám, má schopnost stimulovat fagocytární aktivitu makrofágů a také cytotoxickou aktivitu T-buněk a přirozených zabijáků účastnících se antivirové imunity.

Zabraňuje proliferaci buněk, zejména nádorových. Má tlumivý účinek na syntézu určitých onkogenů, což vede k inhibici růstu nádoru.

látka-roztok: bal Reg. č.: LSR-007009/08

Klinicko-farmakologická skupina:

Forma uvolnění, složení a balení

látka -řešení.

lahve (1) - kartonové obaly.

Popis účinných látek léku Interferon alfa-2b»

farmakologický účinek

Interferon. Jedná se o vysoce purifikovaný rekombinantní protein s molekulovou hmotností 19 300 daltonů. Získáno z klonu Escherichia coli hybridizací bakteriálních plazmidů s genem lidských leukocytů kódujícím syntézu interferonu. Na rozdíl od interferonu má alfa-2a arginin na pozici 23.

Má antivirový účinek, který je způsoben interakcí se specifickými membránovými receptory a indukcí syntézy RNA a v konečném důsledku i proteinů. Ty zase brání normální reprodukci viru nebo jeho uvolnění.

Má imunomodulační aktivitu, která je spojena s aktivací fagocytózy, stimulací tvorby protilátek a lymfokinů.

Má antiproliferativní účinek na nádorové buňky.

Indikace

Akutní hepatitida B, chronická hepatitida B, chronická hepatitida C.

Vlasatobuněčná leukémie, chronická myeloidní leukémie, renální karcinom, Kaposiho sarkom na pozadí AIDS, kožní T-buněčný lymfom (mycosis fungoides a Cesariho syndrom), maligní melanom.

Dávkovací režim

Zadejte / in nebo s / c. Dávka a léčebný režim se nastavují individuálně v závislosti na indikacích.

Vedlejší účinek

Příznaky podobné chřipce:často - horečka, zimnice, bolest kostí, kloubů, očí, myalgie, bolest hlavy, zvýšené pocení, závratě.

Z trávicího systému: možný pokles chuti k jídlu, nevolnost, zvracení, průjem, zácpa, poruchy chuti, sucho v ústech, ztráta hmotnosti, mírná bolest břicha, mírné změny jaterních testů (obvykle normální po ukončení léčby).

Ze strany centrálního nervového systému a periferního nervového systému: zřídka - závratě, mentální zhoršení, poruchy spánku, poruchy paměti, úzkost, nervozita, agresivita, euforie, deprese (po dlouhodobé léčbě), parestézie, neuropatie, třes; v některých případech - sklon k sebevraždě, ospalost.

Ze strany kardiovaskulárního systému: možné - tachykardie (s horečkou), arteriální hypotenze nebo hypertenze, arytmie; v některých případech - porušení kardiovaskulárního systému, onemocnění koronárních tepen, infarkt myokardu.

Z dýchacího systému: zřídka - bolest na hrudi, kašel, mírná dušnost; v některých případech - zápal plic, plicní edém.

Z hematopoetického systému: možná lehká leukopenie, trombocytopenie, granulocytopenie.

Dermatologické reakce: možné svědění, reverzibilní alopecie.

ostatní: zřídka - svalová ztuhlost; v ojedinělých případech - protilátky proti přirozeným nebo rekombinantním interferonům.

Kontraindikace

Těžké kardiovaskulární onemocnění, dekompenzovaná cirhóza jater, těžká deprese, psychóza, závislost na alkoholu nebo drogách, přecitlivělost na interferon alfa-2b.

Těhotenství a kojení

Použití během těhotenství je možné pouze v případě, že očekávaný přínos léčby pro matku převáží potenciální riziko pro plod.

Není známo, zda se interferon alfa-2b vylučuje do mateřského mléka. Pokud je to nutné, užívání během laktace by mělo rozhodnout o ukončení kojení.

Ženy ve fertilním věku by měly během léčby používat spolehlivou antikoncepci.

Aplikace pro porušení funkce jater

Kontraindikováno u dekompenzované cirhózy jater. Používejte opatrně u pacientů s poruchou funkce jater.

Aplikace pro porušení funkce ledvin

Používejte opatrně u pacientů s poruchou funkce ledvin.

speciální instrukce

Používejte opatrně u pacientů s poruchou krvetvorby ledvin, jater, kostní dřeně, se sklonem k sebevražedným pokusům.

U pacientů s onemocněním kardiovaskulárního systému je možná arytmie. Pokud se arytmie nesníží nebo se zvýší, dávka by měla být snížena 2krát nebo by měla být léčba ukončena.

Během období léčby je nutné kontrolovat neurologický a psychický stav.

Při těžké inhibici hematopoézy kostní dřeně je nutná pravidelná studie složení periferní krve.

Interferon alfa-2b má stimulační účinek na imunitní systém, a proto by měl být používán s opatrností u pacientů náchylných k autoimunitním onemocněním kvůli zvýšenému riziku autoimunitních reakcí.

léková interakce

léková interakce

Interferon alfa-2b inhibuje metabolismus theofylinu a snižuje jeho clearance.