PCR анализ за инфекции. PCR: метод, който е твърде добър Водещ лабораторен специалист какво прави PCR

Повечето хора поне веднъж в живота си се изследват за инфекции чрез PCR. Но малко хора знаят какво представлява и каква е същността на изследването.

Диагностиката на инфекции чрез PCR се основава на откриването на ДНК или РНК на патогенен микроорганизъм. Може да се открие във всеки клиничен материал, получен чрез инвазивен или неинвазивен метод. Той разкрива генетичния материал на патогена, който многократно се копира. Определя се определен фрагмент от генетичния код, съответстващ на стандарта.

Ако е налице в клиничния материал, резултатът ще бъде положителен.

Предимства на PCR диагностиката на генитални инфекции:

• висока точност и информативност;
• минимален риск от фалшиво положителен или фалшиво отрицателен резултат;
• използвайки PCR, диагностицирането на инфекции може да се извърши във всеки клиничен материал;
• почти всеки патоген може да бъде открит;
• изследването се провежда бързо - резултатите могат да бъдат получени в рамките на няколко часа след анализа.

В момента PCR диагностиката на инфекции е един от основните методи за откриване на повечето полово предавани болести.

PCR анализ на инфекция с количествено определяне

Най-често лекарите предписват качествени PCR тестове за инфекции. Тоест резултатът може да бъде както положителен, така и отрицателен. Но в някои случаи е необходимо количествено изследване.

Тя се различава по това, че в допълнение към факта на наличието на патогена в структурите пикочно-половата система, се определя концентрацията му в клиничния материал.

Количественият PCR за инфекции е необходим в такива случаи:

• при диагностициране на инфекции, които се считат за опортюнистични патогени (в този случай те могат да причинят възпалителни процесисамо при прекомерно увеличаване на популацията на бактерии);
• за оценка на динамиката на потока патологичен процеси ефективността на терапията;
• за оценка на прогнозата на заболяването, определяне на риска от усложнения, избор на адекватна терапия.

Боли ли да вземете цитонамазка за PCR инфекция

Повечето тестове са безболезнени или причиняват минимален дискомфорт на пациента. Сам по себе си PCR не може да предизвика болкатъй като се извършва в лаборатория, далеч от пациента.

Само процедурата за вземане на клиничен материал може да бъде неприятна. И може да бъде различно. Очевидно е, че ако се вземе урина или еякулат за анализ, тогава анализът няма да бъде болезнен. В същото време, ако се изследва течността, изстъргване от уретрата, тайната простатата, тогава вземането на проби от биоматериала ще бъде повече или по-малко неприятно. Най-често се вземат изстъргвания от уретрални клетки за диагностициране на полово предавани инфекции. Обикновено тази процедура е неприятна, но в нашата клиника е безболезнена.

Каква е разликата между цитонамазка и кръвен тест PCR инфекция

Както вече споменахме, за диагностика могат да се използват различни методи. клиничен материал. В намазка от уретрата се определят онези патогени, които присъстват в структурите пикочен канал. Но те не винаги са там. Поради това често е необходимо да се изследва друг биоматериал, например кръв.

Ето някои инфекции, които могат да бъдат предадени в цитонамазка:

• PCR анализ на бактериални инфекции - гонорея, хламидия, уреаплазмоза, микоплазмоза;
• трихомониаза;
• вируси - HPV, херпес;
• гъбички - кандида.

Ето някои инфекции, които могат да бъдат дарени в кръвта:

• PCR анализ на вирусни инфекции - HIV, вирусен хепатит, херпес, цитомегаловирус;
• бактериални патологии - сифилис (рядко);
• всякакви венерически патологии в случай на тяхната генерализация (гонорея, кандидоза).

На практика най-често PCR на кръвта се извършва със съмнение за вирусни инфекции, които може да не се отличават в външна средапрез уретрата.

Кой трябва да диагностицира инфекция чрез PCR

Основните индикации за PCR анализ за инфекции:

• контрол след лечение;
• наличието на симптоми на болест, предавана по полов път;
• история на незащитен полов акт с нов партньор;
• откриване на инфекции в постоянен партньор;
• преглед преди бременност, IVF, хирургични операции;
• диагностика на безплодието, за да се определят причините за него.

Някои хора се преглеждат без показания, с превантивна цел.

Това е така, защото повечето полово предавани болести могат да протичат без симптоми. Въпреки това те все още се разпространяват сред населението, причиняват усложнения и представляват опасност за репродуктивното здраве. Следователно всеки човек, който води активен полов живот, от време на време сменяйки партньорите си, трябва да се изследва за инфекции на редовни интервали. Препоръчително е да се прави преглед веднъж годишно. Стандартният PCR анализ за 12 инфекции ще отнеме максимум половин час от времето ви. Но това ще позволи своевременно откриване на опасни заболявания.

Анализ на PCR инфекция - как да се подготвим за намазка и кръв

Преди да вземете намазка, трябва да не правите секс 2 дни и да не уринирате 2 часа.

Не е необходимо да се подготвяте за кръвен тест. Независимо какъв клиничен материал дарявате, не трябва да приемате антибиотици до края на диагностиката.

Как да оценим резултата от PCR тест за инфекции

При провеждане на PCR диагностика на инфекции интерпретацията на резултатите се извършва само от лекар. На пръв поглед не създава никакви затруднения.

Наистина, под формата на анализ резултатът най-често е положителен или отрицателен. Но е важно да се вземат предвид комплексните симптоми, данните от други тестове, данните от историята. Понякога има фалшиво положителни резултати от PCR анализ за инфекции. В други случаи резултатите от PCR анализа за инфекции са фалшиво отрицателни.

В първия случай се открива инфекция, която всъщност не е там. Във втория случай патогенът, присъстващ в тялото, не се открива. За да бъде резултатът надежден, е важно да разберете кога положителен анализ PCR за инфекции след инфекция. Препоръчително е да се извърши диагностика не по-рано от 2 седмици след незащитен секс.

PCR анализ за инфекции - който лекар предписва

Диагностиката на инфекции чрез PCR се използва в много отрасли на медицината. Една от основните области на приложение е венерологията. Такива изследвания се предписват от венеролог, по-рядко от гинеколог или уролог.

Ако търсите къде да си направите PCR тест за инфекции, заповядайте в нашата клиника.

Нашите предимства:

• безболезнено вземане на клиничен материал;
• бързи диагностични тестове;
• няма опашки
• висока диагностична точност;
• възможността за получаване на консултация с лекар и, ако е необходимо, предписване на лечение.

Времето на анализа на PCR инфекция обикновено не надвишава 1 ден. В някои случаи резултатите могат да бъдат получени в рамките на няколко часа. Но цената на спешната диагностика е по-висока. Нашата клиника провежда изследвания на определени заболявания, както и комплексни анализи PCR за 12 инфекции.

Цената на диагностичните процедури зависи от редица фактори:

• спешност на диагнозата;
• използван клиничен материал;
• броят на патогените.

Нашата клиника работи с няколко лаборатории. Това ни позволява да предоставим широк обхват диагностични услугии ниски разходи за изследвания.

Ако трябва да вземете PCR тестове за инфекции, свържете се с компетентни венеролози.

PCR анализ - висока прецизност диагностично изследванеза откриване на патогени инфекциозни заболяванияспоред техния генетичен материал (РНК, ДНК) в проба от биологична течност, взета от човек.

Полимеразната верижна реакция дава възможност за диагностициране на широк спектър от заболявания с вирусна етиология, включително тези, присъстващи в човешкото тяло дълго времепротича латентно. Най-често PCR анализът се предписва в гинекологичната и урологичната практика.

Основни показания

PCR анализът се предписва при съмнение за следните патологии:

• вирусен хепатит (А, В, С);
• цитомегаловирусна инфекция;
• стомашно-чревни инфекции (ентеровируси);
• херпес зостер (лишеи);
• Болест на Филатов (моноцитен тонзилит);
• невролоза (грануломатоза на новородени).

Възможността да се използва не само венозна кръв като биоматериал значително разширява списъка на патологиите, диагностицирани чрез PCR. Този списък включва:

• бактериална вагиноза;
• салмонелоза;
• дифтерия;
• различни форми на туберкулоза;
• човешки папилома вирус;
• STD;
• микоплазма хоминис;
• уреаплазма уреалитикум.

Как да се подготвим за изследването

Подготовката за диагностика чрез PCR зависи от коя биологичен материалще бъдат проучени. При кръводаряване 3 дни преди това се изключва приемът на алкохол, разредители на кръвта, препоръчва се спазването на определена диета. При вземане на намазка от уретрата и влагалището за 3-5 дни се изключва интимност, също така е невъзможно да се извърши промиване по това време. Не се правят цитонамазки по време на менструацията, преди нея и в рамките на 5 дни след края й.

Характеристики на анализа

Биологичен материал за PCR изследване може да бъде кръв, слюнка, намазки. Изборът зависи от вида на вируса или инфекциозна патология. При съмнение за полово предавана болест се дава сутрешна урина и изстъргване от лигавицата на вагиналната стена. С херпес, хепатит, ХИВ - деоксигенирана кръв, в обем минимум 5 мл. В случай на увреждане на централната нервна система, биоматериалът е цереброспиналната течност.

PCR се използва при диагностицирането на вътрематочни патологии на плода (материалът е плацентарна тъкан), с инфекции от белодробен тип (течност от плеврална кухинаили храчки).

Има няколко метода за провеждане на PCR анализ:

• диагностика в реално време;
• определяне на аминокиселинната и нуклеотидната последователност на ДНК;
• метод за секвениране на ДНК;
• нанофлуиди.

Най-често използваното проучване в реално време, то е едно от най- информативни методи, дава максимума нисък интересфалшиви положителни резултати. Анализът се извършва през деня.

В заключение се посочва една от опциите за резултата от изследването - положителен (потвърждава наличието на патологичен процес) или отрицателен (показва липсата му).

Полимеразната верижна реакция (PCR, PCR), открита от американката Кари Мълис през 1983 г., и разработеният на нейна основа метод за откриване на ДНК доведоха учения Нобелова наградапо химия през 1993 г. Днес това е един от най-точните методи в лабораторната диагностика на инфекциозни заболявания. Тя ви позволява да откриете какво е останало скрито преди появата на PCR.

Защо такъв прекрасен метод не измести други видове лабораторна диагностика, а се използва наравно с тях и в някои отношения дори ги губи?

Съществуват различни методиоткриване на инфекции в биологичните течности на пациентите.

• микроскопски методи.

С помощта на микроскоп лаборантът търси патогенни микроорганизми в специално оцветена намазка - проба от секрет от уретрата или от стената на лигавицата. Евтини, прости, но неинформативни. По този начин е възможно да се разграничат трихомонади, гонококи, хламидия, уреаплазма и гарднерела. И това е.

• Културни методи (култури).

Абсолютно същата намазка се нанася върху хранителна среда в петриево блюдо и се вижда какво расте. Всички микроорганизми образуват различни по цвят, форма, големина и консистенция колонии. Именно от тези колонии се определя: кой е бил в намазката. Също така, като цяло, евтино, но дълго, култивирането на микроорганизми може да продължи от 3 до 8 седмици - през това време състоянието на пациента може да се влоши значително. И има още един нюанс: само това, което е в намазката и в определено количество, ще расте. Ако е имало твърде малко патогенни бактерии, тогава няма да е възможно да ги идентифицирате.

• Кръвни изследвания.

Всички патогени оставят след контакт с човешкото тяло своите имунни следи в кръвта му: антигени или антитела. Методът не е най-евтиният, но бърз. Но дори и тук трябва да се има предвид, че до определен момент инфекцията може вече да е в тялото и антителата и антигените все още не са открити: изминало е твърде малко време или твърде ниска концентрация на патогенни микроорганизми. Освен това, този методне позволява да се направи разлика между видовете отделни микроорганизми, които не винаги са опасни за хората.

Така че всички методи имат своите недостатъци. Сред ключовите са следните:

• Ниска чувствителност, т.е. необходим е определен минимален брой микроорганизми в пробата, за да бъдат открити.
• Ниска специфичност, това е, ако две различни видовебактериите (единият опасен, другият не) имат едни и същи протеини на клетъчната повърхност, тогава не всички анализи ви позволяват да разберете кой от тези видове е в тялото.

И двата проблема могат да бъдат решени чрез PCR метода.

Методът се основава на факта, че всеки жив организъм (микро или макро) има уникална ДНК (или РНК - ако говорим сиза някои вируси). Това е най-добрият маркер за наличието на чужд микроорганизъм в човешкото тяло, който човек може да си представи. Дори ако в пробата има следи от ДНК, това означава, че организмът вече се е сблъсквал с тази инфекция по един или друг начин. И как можете да „видите“ тези следи? Те трябва да започнат да се "умножават".

PCR методът се състои от следните стъпки.

• Етап 1. Подготовка на пробата, т.е. извличане на ДНК.

Да предположим, че търсим специфична бактерия в пробата, като например хламидия ( Chlamydia trachomatisпричинител на хламидия). На този етап не знаем дали нейното ДНК е в пробата. Пробата се обработва специално, за да се концентрира ДНК, ако има такава, в минималния обем PCR течност.

• Етап 2. Амплификация (умножаване) на ДНК чрез PCR.

Първо, двойноверижната ДНК се "разплита" чрез повишаване на температурата и се получават едноверижни вериги. След това към разтвора се добавят специални къси фрагменти. нуклеинова киселина- грундове. Те ще бъдат семето за синтеза на втората верига на ДНК върху едноверижна "основа". И така, има основа, има семе, остава да добавим нуклеотидите, от които ще бъде завършена втората верига, и устройството, което ще участва в тази конструкция. Ензимът ДНК полимераза действа като такова устройство и процесът на завършване на изграждането на едноверижна ДНК до двойноверижна е полимеразна верижна реакция.

В началото на цикъла имахме две едноверижни ДНК, в края ще имаме две двойноверижни ДНК. И този цикъл се повтаря много пъти, докато количеството ДНК стане достатъчно за лабораторен анализ. За размножаване на ДНК се използват специални устройства - усилватели. На този етап изследователите все още не знаят каква ДНК са амплифицирали или дали има ДНК на хламидия в пробата.

Трябва също да се добави, че има много разновидности на PCR метода, които се използват в зависимост от задачата, възложена на изследователя.

• Етап 3. Откриване (определяне) на ДНК.

На този етапточно това се случва, за да разберете дали в пробата има ДНК на желаната бактерия. По-рано за това се използваше методът на електрофорезата, а по-късно учените започнаха да използват ДНК сонди - специални маркирани ДНК фрагменти, които взаимодействат само с определен участък от анализираната ДНК и по този начин позволяват да се определят специфични нуклеотидни последователности. И накрая, сега за експресна диагностика се използват флуоресцентни маркери, които позволяват определяне на резултата от PCR директно в реакционната епруветка. Ако в пробата е имало ДНК на хламидия, лаборантът ще знае за това.

Какво може PCR

PCR методът ви позволява да идентифицирате патогенни микроорганизми, както и да ги анализирате за тяхната устойчивост (резистентност) към лекарства. В това отношение, в сравнение с културата и други методи, PCR е много по-бърз и по-точен. PCR методите се използват все повече в медицинска практика. Например, сега с негова помощ в някои случаи е възможно да се определи наличието (или липсата) на генетични маркери на резистентност.

Предимства на PCR:

• Чувствителност.

Дори едно копие на неговата ДНК е достатъчно, за да се открие наличието на патогенен микроорганизъм в тялото на пациента. 1 микроорганизъм на проба - това е достатъчно за PCR, този подход не е възможен за други диагностични методи.

• Специфичност.

Както бе споменато по-рано, уникалността на ДНК на всеки тип микроорганизми прави възможно откриването им дори в присъствието на големи обеми чужда, излишна, „баластна“ ДНК, която пречи на анализа.

• Скоростта на анализа.

Целият процес на PCR диагностика отнема не повече от 1 работен ден.

• Производителност.

PCR диагностиката днес е напълно автоматизиран процес.

Какво PCR не може

PCR методът е наистина брилянтно изобретение на молекулярната биология на 20 век. Но понякога е толкова добър, че е неподходящ за диагностика.

Недостатъци на PCR:

• Специфичност.

Тя е зашеметяващо висока, но твърде тясна. При засяване в петриево блюдо всичко, което е било в пробата, ще порасне. И когато провеждате PCR, можете да намерите само това, което търсите, за какво са използвани ДНК сонди. Невъзможно е да се проведе PCR анализ за хламидия и случайно да се открие хепатит.

• Чувствителност.

Има много микроорганизми, които лекарите наричат ​​опортюнистични патогени. Те са част нормална микрофлорахора, стига концентрацията им да не надвишава определени граници. PCR със сигурност ще покаже тяхното присъствие, но това изобщо не означава, че човек е болен. Такива микроорганизми включват микоплазма, уреаплазма, гарднерела и др.

• Проблем със замърсяване.

Замърсяването е замърсяване на проба с ДНК проби отвън. Диагностиката чрез PCR трябва да се извършва в специално подготвени лаборатории и при стерилни условия. Дори едно копие на "външна" ДНК от друга проба, от лабораторен въздух или от ръкавиците на лаборант може да доведе до фалшиво положителни резултати - ако са налице правилните праймери.

• Влияние върху PCR на други компоненти на пробата.

Чувствителността на PCR може да бъде значително намалена чрез излагане на други вещества. Например, някои лекарства (антикоагуланти) инхибират реакцията на усилване. За идентифициране на такива ситуации има специални методиконтрол. Но рискът от получаване на фалшиви отрицателни резултати все още остава.

• Цена.

Това е скъп метод. Самото оборудване и реактивите за него, както и обучението на лаборанти, които знаят как да боравят с тях, са много скъпи за клиниките и лабораториите. В Русия такова оборудване не се произвежда, а използването на домашни реактиви влошава качеството на анализа.

заключения

• PCR е отличен модерен и скъп метод за диагностициране на патогени на различни инфекциозни заболявания.
• PCR методът не винаги е необходим за диагностика. Ако лекарят не смята за необходимо да ви изпрати за анализ, доверете се на неговото мнение. При самолечение и самотестване за PCR изследване в мрежова лаборатория има голям риск години наред да се лекувате от несъществуващо заболяване.
• Ако лабораторията ви даде резултат, в който се съмнявате, направете отново анализа в друга лаборатория. Рисковете от фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати не са отменени - въпреки цялата модерност и технологичност на метода.

• Общи анализи
• Биохимия на кръвта
• Хормони

PCR(полимеразна верижна реакция) - метод за анализ, базиран на получаване на надежден резултат от минимален брой ДНК фрагменти от тестовия материал, потвърждаващ идентичността на тази нуклеинова киселина определен видживи организми (бактерии, вируси, протозои, гъбички).

Изобретателят на PCR метода през 1983 г. получава Нобелова награда за най-точен и високоинформативен метод за диагностициране на инфекциозни заболявания, за 100% надеждност на метода.

Основата на PCR метода

В хода на изследването ДНК фрагмент се дублира в изкуствено създадена среда, извън тялото. В резултат на анализа, под въздействието на специфични ензими, молекулите на ДНК се увеличават до необходимото количество за идентифициране с помощта на микроскопски изследвания.

Програмата копира само тези ДНК молекули, които присъстват в анализирания материал. Тази характеристика на метода позволява не само да се определят видовете инфекция, но се използва и за установяване на бащинство, в генното инженерство.

PCR методът ви позволява да идентифицирате латентни инфекции и инфекции, чиито патогени имат дълъг периодрастеж, което ги прави невидими по време на бактериологична култура.

Приложение на метода PCR

PCR методът е възможно да се определи всеки тип инфекциозен агент. Много микроорганизми придобиват L-образна форма в момента на излагане на тях. антибактериални лекарстваи остават скрити за микроскопски и имунологични анализи.

PCR е особено широко използван за диагностика на латентни или бавни възпалителни заболяванияако не е възможно да се изолира инфекцията по друг начин. На първо място, това се отнася за следните полови инфекции:

• хепатит С и В
• папиломавирусна инфекция,
• гарднерелоза,
• херпес.

В терапевтичните дейности PCR тестовете се използват за диагностициране на:

• пневмония,
• плеврит, труден за лечение,
• за изолиране на Helicobacter pylori хроничен гастритсклонни към ерозия
• за идентифициране на тенденция към онкологични заболявания– откриване на онковируси.

Материалът за PCR анализ е:

• кръв,
• , шийката на матката, вагината,
• секреция на жлези, слюнка, храчки,
• изпускане от ерозии и язви, други.

Къде да се изследвате чрез PCR

PCR методът е сложна последователна верига от много етапи и цикли. За анализа се използват специфични химични съединения за среди и ензими. Анализът трябва да се извърши от преминал лабораторен лекар специално обучениеза лабораторни изследванияна високо прецизно оборудване, използващо компютърни технологии.

Информация "Вашият лекар" разполага с информация за частни клиники, които имат в арсенала си лабораторно оборудване и реактиви, които отговарят на изискването за анализ на материала чрез PCR. Всички манипулации за вземане на кръв или друг материал се извършват в тези институции със стерилни инструменти и материали в съответствие с изискванията на Министерството на здравеопазването на Руската федерация за борба с разпространението на инфекциозни заболявания.

В много клиники на Центъра за помощ на Вашия лекар се използват вакуумни системи за вземане на кръв, което напълно елиминира теоретично възможната грешка в резултат на изследването и значително повишава обективността на анализа.

Дата на публикуване: 2019-06-12

Тази статия е публикувана само с образователна цел и не представлява научен материал или професионален медицински съвет.